restrikciós enzimek
a laboratóriumban a restrikciós enzimeket (vagy restrikciós endonukleázokat) használják a DNS kisebb fragmensekre vágására. A vágásokat mindig specifikus nukleotidszekvenciákon végezzük. A különböző restrikciós enzimek különböző DNS-szekvenciákat ismernek fel és vágnak le.
honnan származnak a restrikciós enzimek?
restrikciós enzimek találhatók a baktériumokban. A baktériumok restrikciós enzimeket használnak a vírusok elpusztítására – az enzimek megtámadják a vírus DNS-ét, és haszontalan fragmensekké bontják.
hogyan működnek a restrikciós enzimek?
Mint minden enzimek, egy restrikciós enzim működik, hogy a forma-kell-alakja megegyezik. Amikor érintkezik egy DNS-szekvenciával, amelynek alakja megegyezik az enzim egy részével, az úgynevezett felismerési hely, körbeveszi a DNS-t, és megszakítja a DNS-molekula mindkét szálát.
minden restrikciós enzim más és specifikus felismerési helyet vagy DNS-szekvenciát ismer fel. A felismerési helyek általában csak rövidek – 4-8 nukleotid.
mikor használják a restrikciós enzimeket?
a restrikciós enzimek a biotechnológiai kutatás alapvető eszközei. DNS klónozásra és DNS ujjlenyomatvételre használják őket.
különböző típusú restrikciós enzim
a tudósok több száz különböző típusú restrikciós enzimet azonosítottak és tisztítottak. Ők nevezték el a nemzetség pedig faj a szervezet voltak szigetelve, valamint kapnak egy szám jelzi a sorrendet, amelyben találták őket. Például az EcoRI volt az első restrikciós enzim, amelyet az Escherichia coli RY13 törzséből izoláltak, míg a HindIII volt a harmadik enzim, amelyet az R D Haemophilus influenzae törzsből izoláltak.
DNS-fragmensek: tompa vagy ragadós végek?
a DNS két egymást kiegészítő nukleotidszálból áll, amelyek kettős spirálban spirálnak egymás körül. A restrikciós enzimek mindkét nukleotidszálat átvágják, a DNS-t fragmensekké bontják, de ezt nem mindig ugyanúgy teszik.
SmaI egy példa egy restrikciós enzimre, amely egyenesen átvágja a DNS szálakat, DNS-fragmenseket hozva létre lapos vagy tompa véggel.
más restrikciós enzimek, mint például az EcoRI, átvágják a DNS-szálakat olyan nukleotidokon, amelyek nem pontosan ellentétesek egymással. Ez DNS-fragmenseket hoz létre egy nukleotidszállal, amely a végén túlnyúlik. Ezt a túlnyúló nukleotidszálat ragadós végnek nevezik, mivel könnyen kötődhet a kiegészítő DNS-fragmensekhez.
Leave a Reply