Articles

restrikciós enzimek

a laboratóriumban a restrikciós enzimeket (vagy restrikciós endonukleázokat) használják a DNS kisebb fragmensekre vágására. A vágásokat mindig specifikus nukleotidszekvenciákon végezzük. A különböző restrikciós enzimek különböző DNS-szekvenciákat ismernek fel és vágnak le.

honnan származnak a restrikciós enzimek?

restrikciós enzimek találhatók a baktériumokban. A baktériumok restrikciós enzimeket használnak a vírusok elpusztítására – az enzimek megtámadják a vírus DNS-ét, és haszontalan fragmensekké bontják.

hogyan működnek a restrikciós enzimek?

Mint minden enzimek, egy restrikciós enzim működik, hogy a forma-kell-alakja megegyezik. Amikor érintkezik egy DNS-szekvenciával, amelynek alakja megegyezik az enzim egy részével, az úgynevezett felismerési hely, körbeveszi a DNS-t, és megszakítja a DNS-molekula mindkét szálát.

minden restrikciós enzim más és specifikus felismerési helyet vagy DNS-szekvenciát ismer fel. A felismerési helyek általában csak rövidek – 4-8 nukleotid.

mikor használják a restrikciós enzimeket?

a restrikciós enzimek a biotechnológiai kutatás alapvető eszközei. DNS klónozásra és DNS ujjlenyomatvételre használják őket.

különböző típusú restrikciós enzim

a tudósok több száz különböző típusú restrikciós enzimet azonosítottak és tisztítottak. Ők nevezték el a nemzetség pedig faj a szervezet voltak szigetelve, valamint kapnak egy szám jelzi a sorrendet, amelyben találták őket. Például az EcoRI volt az első restrikciós enzim, amelyet az Escherichia coli RY13 törzséből izoláltak, míg a HindIII volt a harmadik enzim, amelyet az R D Haemophilus influenzae törzsből izoláltak.

DNS-fragmensek: tompa vagy ragadós végek?

a DNS két egymást kiegészítő nukleotidszálból áll, amelyek kettős spirálban spirálnak egymás körül. A restrikciós enzimek mindkét nukleotidszálat átvágják, a DNS-t fragmensekké bontják, de ezt nem mindig ugyanúgy teszik.

SmaI egy példa egy restrikciós enzimre, amely egyenesen átvágja a DNS szálakat, DNS-fragmenseket hozva létre lapos vagy tompa véggel.

más restrikciós enzimek, mint például az EcoRI, átvágják a DNS-szálakat olyan nukleotidokon, amelyek nem pontosan ellentétesek egymással. Ez DNS-fragmenseket hoz létre egy nukleotidszállal, amely a végén túlnyúlik. Ezt a túlnyúló nukleotidszálat ragadós végnek nevezik, mivel könnyen kötődhet a kiegészítő DNS-fragmensekhez.