Articles

Staining festés

by admin

Nissl festés

magok és nissl szervek (durva endoplazmatikus retikulum) vannak festve kék lila krezil ibolya.

A Nissl festést Klüver-Barrera (KB) festéshez használják.

  • Festési eljárást
  • Fontos szempontok tekintetében differenciálás

Festési eljárást

1 Deparaffinization Xilol 3 változásokat, 10 minuntes minden
2 Eltávolítás xilol 100% – os etanol 3 változásokat, 5 perc
3 Hidratálás 95%, 70% etanol 5 perc
4 Mosás folyó csapvíz 2 perc
5 Öblítés Desztillált víz
6 Festés 0.1% cresyl ibolya megoldás 10 perc, 37 ° c
7 Differenciálás 95% etanol + néhány csepp 10% ecetsav oldat Körülbelül 5-10 percig. Ügyelni kell arra, hogy ne túldifferenciálódjon, mivel a elszíneződés a következő lépésben történik.
8 differenciálás 95%, 100% etanol kb. Különbséget kell tenni, amíg csak a magok és a nissl testek kék lila színűek.
9 Step ⑦ & ⑧ megismételhető, ha nagyobb differenciálásra van szükség.
10 Kiszáradás 100% ehtanol 2 változik, 5 perc
11 Elszámolási Xilol 3 változásokat, 10 minuntes minden
12 Lefedés

0.1% krezil-ibolya vizes oldat (használat előtt szűrő)

cresyl violet

1g

desztillált víz

1000ml

A krezil-ibolya pH-ja

a festési módszer a festési oldat pH-jától függően eltérő. A 3,0-as pH-érték közelében csak a Nissl-testek, a nukleolusok és a nukleáris membránok halványkék színűek. A gliális sejtmagok csak nagyon enyhén festettek. A pH-érték növekedésével a szín összességében sötétebbé válik, az idegsejtek, az idegrostok és a gliasejtek citoplazmája pedig kopoltyúvá válik. Az együttes festés a 4,0 pH-érték közelében fokozódik. Ezért hosszabb differenciálási időre van szükség.


  • pH3.0

  • pH4.7

A krezil-ibolya típusai

háromféle krezil-ibolyát használnak jelenleg a neuropatológia laboratóriumában.

Termék neve gyártó elérhetőség
Cresyl Violet Acetate EM SCIENCE out of stock
Cresyl Violet acetate SIGMA /td> kereskedelmi forgalomban kapható
cresyl violet (acetate) Merck kereskedelmi forgalomban kapható

a differenciálódási idő a kreziloleterméktől függően változik

a festési oldat pH-ja a terméktől függően eltérő. Ezért a festési módszerek is különböznek. Fontos tudni, hogy a differenciáláshoz szükséges idő különbözik a termékek között. Azonban bármelyik terméket is használják, ugyanaz a festett kromatikus kép végső soron a minta mikroszkóp alatt történő differenciálásával és megfigyelésével nyerhető.

Krezil-Ibolya-acetát

Termék neve gyártó 0,1% – os krezil-ibolya oldat pH-ja 95% – os etanolban
EM SCIENCE 3.5 10 30 másodperc
Cresyl Ibolya-acetát SIGMA 4.7 10 perc körülbelül
Cresyl ibolya (Acetát) a MERCK 4.8 10 perc körülbelül

※ A pH-állítható a 3.5 körülbelül 3.8 hozzáadásával megfelelő mennyiségű 10% – os ecetsav, hogy a Sigma, valamint a Merck festés megoldások, ami lerövidíti a szükséges időt differenciálás 95% etanol. Azonban nem ajánlott újra használni ezt a megoldást.

fontos szempontok a differenciálódás tekintetében

végezze el a differenciálást, amíg a háttér fehérre nem vált. Ideális, ha az idegsejtmagok nukleoljai és atommembránjai tiszták és kromatinok halványan foltosak.

Krezil-ibolyaszín-acetát (Sigma C5042) PH4.7-et használtak mindkét szakaszban.

bal oldali fénykép: 95% etanol differenciálás csak 10 másodpercig. Elégtelen differenciálódás esetén az egész idegsejt kék színű, ami lehetetlenné teszi a mag és a Nissl testek azonosítását.

jobb oldali fénykép: 95% etanol differenciálás 10 percig. A megfelelő differenciálás lehetővé teszi a neuronok magjainak és Nissl-testének egyértelmű megkülönböztetését.