diagnózis

klinikai diagnózis: a chlamydialis fertőzésben szenvedő betegek klinikai képe félrevezető lehet, mivel a fertőzött nők 70-80% – a, a fertőzött férfiak 50% – a tünetmentes. Jellemzően egy komplikációmentes chlamydialis fertőzéssel rendelkező nő szagtalan, mucoid hüvelyi ürítéssel jár, pruritis nélkül. A frekvencia vagy sürgősség nélküli Dysuria panaszkodni fog, ha a húgycső érintett. Továbbá a PID-ben a magas lázzal, dyspareuniával, hosszan tartó menstruációs ciklusokkal és intermensturális vérzéssel járó súlyos hasi fájdalom kiváltható. A vizsgálat során a cervicitis sárga, felhős, mucoid kisüléssel látható az operációs rendszerből. A méhnyak könnyen vérzik, ha spatulával vagy kefével kaparják. A vizeletvizsgálat feltárja a >5 WBC/HPF (nagy teljesítményű mező) jelenlétét, amely urethritisre utal13. A chlamydialis fertőzések klinikailag nem különböztethetők meg más húgycső-fertőzésektől. Amin teszt (azaz, A KOH vaginális szekrécióhoz való hozzáadásával járó jelentős szagkibocsátás) segíthet megkülönböztetni a chlamydialis fertőzéseket a többi alsó nemi szervi fertőzéstől, de alacsony specificitással rendelkezik.

a férfiaknál a chlamydialis fertőzés urethritis formájában jelentkezik az érintett 15-55% – ánál kevesebb vagy egyenlő, mint 35 év, esetenként epididymitis lehet látni2. Enyhe vagy közepes tiszta vagy fehér húgycső kisülés látható reggel, mielőtt a beteg ürül. Epididymitis esetén előfordulhat, hogy az anamnézisben egyoldalú herefájdalom, scrotalis erythema, érzékenység vagy duzzanat jelentkezik az epididymis felett. A diagnózist a pénisz mucopurulens kisülésének jelenlétével lehet megállapítani, amely a Gram festésnél >5 WBC/HPF, valamint intracelluláris Gram negatív diplococcusok hiánya. A Reiter-szindróma a kezeletlen chlamydia fertőzés ritka szövődménye lehet. Reaktív arthritis, amely magában foglalja az urethritis/cervicitis hármasát nőknél, konjuntivitist és fájdalommentes mucopurulent kitörést a tenyéren és a láb talpán, Reiter szindrómájában29 látható. A nőket gyakrabban érinti, mint a férfiakat. Az alsó végtagok iránti előszeretettel aszimmetrikus többszörös ízületi érintettség van.

laboratóriumi diagnózis: a betegség tünetmentes jellege és a C. trachomatis által okozott fertőzések növekvő spektruma hangsúlyozza az érzékeny és megbízható laboratóriumi módszerek szükségességét.

a mintagyűjtés és-szállítás ismerete a diagnosztikai vizsgálatok pontosságához elengedhetetlen. Kimutatták, hogy mind a C. trachomatis diagnosztikai vizsgálatainak érzékenysége, mind specifikussága közvetlenül kapcsolódik a minta megfelelőségéhez. A gazdasejteket, amelyek a szervezetet hordozzák, fel kell venni a mintagyűjteménybe, mivel a chlamydia obligát intracelluláris kórokozók, különösen a szervezet közvetlen vizualizációjával járó technikákban.

a mintavételi helyek kiválasztása befolyásolhatja a kórokozó visszanyerésének valószínűségét. A C. trachomatis genitális traktusból történő visszanyerésének 10-20 százalékos növekedését figyelték meg, ha mind a nyaki, mind a húgycső példányokat csak a nyaki mintavételhez hasonlítják42. Az endocervicalis tampon, a hüvelyi/introital tampon, a vulval tampon, valamint a húgycső és a rektális tampon, valamint az első fogási vizelet a női betegektől vett gyakori minták. A húgycső-és rektális tampon, valamint az első fogási vizeletminta más specifikus minták, például a prosztata folyadék mellett hím betegektől is gyűjthető.

A minta begyűjtésének és szállításának minőségbiztosítása: a minta megfelelőségét a mikroszkópia során a squamo-oszlopos sejtek vizualizációjával lehet meghatározni. A minta megfelelőnek tekinthető, ha diánként egy oszlopos / metaplasztikus sejtet tartalmaz. Az izolálás valószínűsége akkor optimális, ha a mintát közvetlenül a begyűjtés után 2-8°C-on hűtik.a mintavétel és a feldolgozás közötti idő ideális esetben 48 h-nál kisebb lehet, ha ez nem lehetséges, ezeket -70 °C-on fagyaszthatják a feldolgozásig16. A magzati szarvasmarha szérum (2-5%) segít megőrizni a chlamydia életképességét a fagyasztandó mintában. A két moláris szacharóz-foszfát (2-MSP) vagy a szacharóz-glutamát-foszfát a leggyakrabban használt szállítóeszköz. Szintetikus transzport közeg a kultúrához és néhány nem – kultúra teszt kifejlesztésre és jóváhagyásra került diagnosztikai felhasználásra, azaz M4 transzport közeg, Flex Trans medium és új M4 szintetikus/univerzális közeg.

a Chlamydia laboratóriumi diagnózisa a következő módszerekből áll:

(i) specifikus tesztek

sejtkultúra: a szervezet izolálása a chlamydia fertőzés diagnózisának végleges módszere. A Chlamydia kötelező intracelluláris kórokozó, ezért embrionált tyúktojást vagy állati sejtvonalakat igényel a tenyésztéshez. Az ilyen tenyésztési módszerek műszakilag nehézkesek, munkaigényesek, nehézkesek és drágák, és nem széles körben alkalmazzák általános klinikai laboratóriumokban végzett rutinvizsgálatként. A chlamydia viz tenyésztéséhez azonban három in vitro rendszert alkalmaztak. egér beoltás (intraperitonealis, intracranialis és intravénás), sárgazsák beoltás (7-8 napos csirkemembrió tojássárgája sac inokuláció)és sejttenyészetek16. A leggyakrabban használt sejtvonalak a következők: – HeLa 229 sejtek, McCoy sejtek, BHK21 és BGMK cells24.

a sejttenyészetnek a chlamydia izolálására való érzékenységét fokozza a sejtek policationokkal, DEAE-dextránokkal történő előkezelése, az inokulum centrifugálása a sejt egyrétegére, valamint anti-metabolitok, például cikloheximid vagy B citochalasin beépítése a sejttenyészetbe42. Cell egyrétegű kultúra C. trachomatis termesztik dob vagy shell fiolák üveg borítók vagy a kutak multiwell sejtkultúra ételek. A héjas injekciós üveg módszer érzékenyebb a klinikai mintára, mint a multiwell sejtkultúra, mivel kisebb a keresztszennyeződés esélye42. Az oltást megelőzően a mintát ultrahanggal kell kezelni, hogy megzavarják a gazdasejteket, és elkülönítsék a chlamydialis zárványokat. A sejttenyészetek beoltásához a túlnyúló tenyészközeget el kell távolítani, és a tenyészhordozó közegben elegendő mintával kell helyettesíteni, hogy lefedje az egyréteget, és megakadályozza a szárítást.

a leggyakrabban használt növekedési közeg az Eagles Minimal Essential Medium (EMEM), amelyet aminosavakkal és vitaminokkal, magzati borjúszérummal (5-10), extra glükózzal (0,056 m) és 2-glutamin42 egészítenek ki. Az oltás után a tenyészeteket 37 ° C-on 2-3 napig inkubáljuk. A chlamydialis zárványokat ezután immunfluoreszcens festéssel figyeljük meg. Az izolálás érzékenysége a laboratóriumtól és az alkalmazott tenyészetrendszertől függően 70-85 százalék között mozog. Hagyományosan ez a C. trachomatis diagnózisának” arany standardja”, mivel 100% – os specifikus42. Sajnos a legtöbb magán-és közlaboratórium MŰSZAKI igénye, munkaerőintenzitása és magas költsége miatt ez túlmutat a képességeken.

közvetlen fluoreszcens vizsgálat (DFA): A DFA-teszt a Chlamydia specifikus antitestfestés jelentős előnyét növeli a minta közvetlen vizsgálatához, és továbbra is az egyik leghasznosabb diagnosztikai technika. Ebben a vizsgálatban az elemi testek gyors azonosítását alkalmazzák flourescein izotiocinát – konjugált monoklonális antitestekkel (FITC-MAB) a MUMPP vagy a nemzetség specifikus LPS ellen. Az elemi testek különálló, élesen körvonalazott, almazöld, korong alakú (300 nm) részecskékként jelennek meg, a retikuláris testek pedig körülbelül háromszor nagyobbak, mint az elemi testek, amelyek fluoreszkáló halo-val rendelkeznek.

Ez az eljárás nem igényel szigorú feltételeket a példányok szállítására, mivel az ágy oldalán kenetet készítenek, majd feldolgozásra szállítják. A C. trachomatis MOMP alkalmazásával a DFA érzékenysége és specifikussága 80-90 százalék, illetve 98-99 százalék a kultúrával kapcsolatban43. A DFA magas specificitása annak tulajdonítható, hogy függ a chlamydialis zárványok megkülönböztető morfológiájának és festési jellemzőinek megjelenítésétől. A DFA az egyetlen rendelkezésre álló diagnosztikai teszt, amely lehetővé teszi a minta megfelelőségének egyidejű értékelését a kenetben jelen lévő hámsejtek megjelenítésével. Ez gyors és egyszerű (átfutási idő körülbelül 30 perc), de a mikroszkópos vizsgálat és az eredmények értelmezése szakértelmet igényel. Ez a módszer ezért alacsony térfogatú laboratóriumok számára ajánlott. Ez a teszt alkalmazható extragenitális webhelyekre is. Úgy tűnik, hogy érzékenyebb, mint a kultúra kimutatására Chlamydia endometrium vagy petevezeték példány42.

ELISA (enzyme linked immunosorbant assay): Az ELISA a C. trachomatis antigén kimutatására áll rendelkezésre. Számos kereskedelmi forgalomban kapható ELISA készletek állnak rendelkezésre erre a célra. Ezek többsége kimutatja a chlamydialis LPS-t, amely jobban oldódik, mint a MOMP. Az enzim immunoassay (EIA) vizsgálatok 62-96 százalékos érzékenységet és 86-99 százalékos specificitást mutattak a sejtkultúrához44 képest. Ez a teszt olyan laboratóriumok számára alkalmas, amelyek nem férnek hozzá a sejttenyészethez. A DFA-hoz és a PCR45-hez,46,47-hez képest azonban szerte a világon, beleértve Indiát is, különböző nagy és kis tanulmányok számoltak be az ELISA gyenge érzékenységéről.

citológia: a citológia könnyen hozzáférhető, egyszerűen használható és költséghatékony diagnosztikai teszt. Nem igényel óvintézkedéseket a minták tárolására és szállítására, és nem életképes/nem fertőző részecskék is kimutathatók. A klinikai minta minőségét mikroszkopikus technikával lehet értékelni, és az ezekben a vizsgálatokban alkalmazott technikai eljárások általában gyorsabbak és egyszerűbbek, mint a tenyészet. Leggyakrabban Giemsa, immunflourescence és jódfestési módszereket alkalmaznak. Egyéb foltok, mint immunoperoxidáz, immunoferritin, May Grunwald, Giemenez, Macchiavello és akridin narancs is használható kimutatására chlamydia felvétel hámlasztott sejtek. Az intracitoplazmatikus zárványok jelenléte patogonómiai az újszülötteknél a chlamydialis szemfertőzések esetében, azonban ez a módszer nem ajánlott a kötőhártya-gyulladás vagy a genitális fertőzés diagnosztizálására felnőtteknél az érzékenység hiánya miatt. A három módszer közül az immunfluoreszcencia a legnagyobb érzékenységet kínálja, amelyet Giemsa, majd jódfestés követ42.

molekuláris módszerek: A hagyományos diagnosztikai módszerek számos korlátozással rendelkeznek, amelyek közé tartozik az alacsony érzékenység, a hosszú tesztelési idő és a magas költségek. Ezért a DNS-és RNS-szekvenciák közvetlen felismerésén alapuló vizsgálatokat dolgoznak ki. A chlamydia kimutatására szolgáló, kereskedelmi forgalomban kapható DNS-szonda a PACE 2 teszt (a Chemilumineszcencia fokozott vizsgálata)48, amely képes a Neisseria gonorrhoeae kimutatására is, amely nem izotópos DNS-szonda a C. trachomatis r-RNS specifikus részeinek kimutatására az endocervikális és húgycső mintában. Egy másik DNS-szondát, a PACE 2C-tesztet is kifejlesztettek, amely egyszerre érzékeli mind a C. trachomatis, mind az N. gonorrhoeae-t egyetlen mintából; azonban a Pace 2C további értékelése szükséges a diagnosztikában való felhasználás előtt. Ezek a vizsgálatok egy kemilumineszcens DNS-szondát alkalmaznak, amely hibridizálódik a chlamydia 16S rRNA fajspecifikus szekvenciájához. Miután a DNS-rRNA hibrid létrejött, adszorbeálódik egy mágneses gyöngyre, és a kemilumineszcens választ kvantitatív módon detektálják egy luminométerrel. Mivel a chlamydiák aktív elosztása legfeljebb 104 példányban tartalmaz 16S rRNS-t, a PACE 2 tesztnek elméletileg érzékenyebbnek kell lennie, mint az antigénérzékelő rendszereknek. A PACE 2 érzékenységét a DNS-amplifikációs szabványhoz képest még nem értékelték jól, de egy vizsgálatban 77-93% – ról számoltak be48.

A fejlesztési vizsgálatok alapján nukleinsav-amplifikációs technológia (NAAT) a legfontosabb lépést a területen a chlamydia diagnózis óta in vitro sejt kultúra technikák helyébe a petezsák kulturális elszigeteltség, a szervezet a klinikai mintákat. A NAAT legalább 20-30 százalékkal érzékenyebb (akár egyetlen génmásolatot is képes kimutatni), és 100 százalékkal specifikusabb49, 50. Lehetőséget kínál arra, hogy nem invazív mintákat, például vizeletet használjunk a tünetmentes egyének fertőzéseinek szűrésére, akik általában nem keresnek klinikai ellátást. Ez kritikus előny, mivel a nőknél a chlamydialis fertőzések többsége, a férfiaknál pedig a fertőzések jelentős része tünetmentes. A DNS-amplifikációs technológiák közül a legszélesebb körben ismert a PCR. A PCR lehet nemzetség, faj, csoport vagy törzs specifikus az alapozó kialakításától függően. A C. trachomatis diagnózisát célzó gének a MOMP gén, az endogén plazmid, a foszfolipáz gén, valamint a 16S és 23S rRNA gén. Mivel az összes nukleinsaverősítő technológia nukleinsav célokat érzékel, ezek nem függenek sem a célszervezet életképességétől, sem ép állapotától a pozitív eredmény érdekében. Ezért a minta szállítása nem kritikus kérdés49. Bár nem vizsgálták jól, úgy tűnik, hogy a doxiciklin-kezelést követő tenyészet-negatív, PCR-pozitív állapot” ablaka ” legfeljebb 3 wk29-ig tart. Ezen idő elteltével a beteg példányok mind a kultúra, mind a PCR negatívvá válnak.

a PCR teszt a C kimutatására. a Roche Diagnostics által kifejlesztett trachomatis, Basel Switzerland (Roche-Amplicor) volt az első PCR-teszt, amelyet az FDA jóváhagyott az Egyesült Államokban51. 1993 óta az Amplicor PCR-t viszonylag jól értékelték mind az urogenitális, mind a vizeletminták esetében, általános érzékenysége és specificitása 90, 99-100 százalék, respectively51. Az Amplicor PCR-t nyaki, férfi húgycső és férfi vizeletminták esetében engedélyezték.

a robbanás a molekuláris biológiai technikák újabb vizsgálatok, mint a m2000 rendszer (Abbott), valamint a strand-elmozdulás erősítés (SDA) (BD ProbeTec strand elmozdulás hangerősítő által kifejlesztett Becton Dickinson and Company, Diagnosztikai Rendszerek, Franklin Lakes, nj) átírási által közvetített erősítés (TMA) (APTIMA rendszer által Gen-Probe, Inc., San Diego) elérhetővé vált C. trachomatis számára. Bár népszerű a fejlett országokban, a magas kezdeti és karbantartási költségek megakadályozzák azok használatát erőforrás-rossz beállításokat.

A C terhe. a genitális traktus trachomatis organizmusai (chlamydialis terhelés) kvantitatív, valós idejű PCR-vel kimutathatók, és 10-től több mint egymillió organizmus/ml genitális traktus szekrécióig terjedhet52. Ez valószínűleg befolyásolja a különböző nukleinsav-amplifikációs tesztek teljesítményét, amelyek nem tesznek rutinszerűen különbséget a magas vagy alacsony chlamydialis terhelésű emberek között. Beszámoltak arról, hogy a chlamydialis terhelés eltérései összefüggenek a klinikai tünetek jelenlétével, a fertőzés átvihetőségével és perzisztenciájával, valamint a krónikus következmények kialakulásának kockázatával53. Ezért fontos szerepe van a számszerűsítésnek a chlamydialis fertőzések diagnózisában és kezelésében.

A NAATs a legérzékenyebb vizsgálatok a genitális tract54,55,56 chlamydialis és gonococcus fertőzéseinek szűrésére és diagnosztizálására. Ugyanakkor az alacsony prevalenciájú területeken mutatott teljesítményükkel kapcsolatos kételyekről számoltak be57,58. 2002-ben a CDC azt javasolta, hogy erősítse meg a C. trachomatis összes pozitív Naátját, ha a teszt pozitív prediktív értéke <90 százalék59. A NAAT módszerek valódi sajátosságai azonban >99 százalék54,55.

A CDC azt is javasolta, hogy több lehetséges stratégiák confirmation59, amely tartalmazza (i) a vizsgálat egy második példány a különböző NAAT azonos vagy magasabb érzékenységet, hogy az első teszt, (ii) végrehajtása a különböző NAAT azonos vagy magasabb érzékenységet, hogy az első teszt célzás egy másik nukleinsav-szekvenciát, az eredeti példány, (iii) ismétli az eredeti teszt az eredeti példány, valamint (iv) hozza a beteg vissza a vizsgálat megismétlését.

a leírt korlátozások azonban az, hogy a legtöbb klinikus nem gyűjt két mintát ugyanarra az értékelésre, és nem is lehetséges, hogy visszahozza a beteget egy másik minta összegyűjtésére, és a legtöbb laboratóriumnak nincs lehetősége / képessége két különböző Naat elvégzésére.

a megerősítő tesztelés fogalma nem új57. Ez azonban megnehezíti a NAAT pozitív minta kezelését, és növeli a már amúgy is drága szűrővizsgálat költségeit. Emellett még mindig van hely a NAATs érzékenységének javítására, talán jobb mintakészítéssel, automatizálással vagy célkoncentrációval.

(ii) nem-specifikus tesztek

a leukocita-észteráz (LE) teszt egy gyors mérőpálca-teszt vizeletmintákkal történő alkalmazásra. Ez a teszt a húgyúti fertőzések kimutatására szolgál a polimorfonukleáris (PMN) sejtek által termelt enzim kimutatásával. A pozitív LE vizsgálati eredmények számos különböző szer, köztük a C. trachomatis és az N. gonorrhoeae által okozott fertőzésekkel fordulnak elő.

A C. trachomatis fertőzés kimutatására szolgáló LE-teszt érzékenysége 31-100 százalék között változik, a sajátosságok pedig 83-100 százalék között mozognak60. A Le-tesztet a serdülő férfiak számára a legjobb szűrővizsgálatnak tekintették, és a legtöbb jelentés szerint nem alkalmazható nők vagy idősebb férfiak mintáinak tesztelésére a nem megfelelő teljesítmény miatt.

(iii) Rapid point of care (POC) tesztek

gyorstesztek, más néven “point-of-care” tesztek A C. trachomatis alkalmaz EIA technológiát olyan formátumokban, amelyek elsősorban membránrögzítésen vagy latex immunodiffúzión alapulnak. A gyorsteszteket az orvosi rendelőkben végzik, nem igényelnek kifinomult felszerelést, körülbelül 30 perc alatt elvégezhetők. Az eredmények vizuálisan olvashatók, így minőségiek. Bár több készlet kereskedelmi forgalomban kapható, de egyiket sem értékelték jól. A gyorstesztek általában lényegesen kevésbé érzékenyek és specifikusak,mint a laboratóriumi vizsgálatok. A PCR-hez képest a Clearview teszt érzékenysége és sajátossága (Unipath Kft., UK) 53,8, illetve 99,1 százalék volt az endokervikális tamponminták aránya, és 31,1, illetve 95,2 százalék a filippínó nők hüvelyváladékmintáival61. A gyorstesztek csak akkor nyújtanak előnyt a hagyományos laboratóriumi vizsgálatokhoz képest, ha a betegkezeléshez azonnal eredményekre van szükség. A gyors teszteket nem szabad alacsony prevalenciájú populációban vagy tünetmentes egyéneknél alkalmazni a hamis pozitív eredmények lehetősége miatt. A gyorsteszt eredményeit mindig feltételezettnek kell tekinteni, és ha pozitív, laboratóriumi vizsgálattal kell megerősíteni.

összefoglalva, bár a kultúra 100% – ban specifikus, becsült érzékenysége akár 50% is lehet. A laboratóriumok többsége a költségek, az idő és a technikai nehézségek miatt eltávolodott a kultúrától. Így a kultúra mint diagnosztikai arany standard helyett a kiterjesztett arany standard/definiált referenciaszabvány, azaz a két nem kultúratechnikával általánosan konzisztens eredmény kutatási eszközként hasznosnak tekinthető43.

(iv) szerológia

a szerológiai vizsgálatok általában nem hasznosak a C. trachomatis által okozott genitális traktus fertőzések diagnózisában. C által kiváltott antitestek. a trachomatis fertőzés hosszú élettartamú, és a pozitív antitest teszt nem különbözteti meg az előzőt a jelenlegi fertőzéstől.