HPLC

Bevezetés

nagy teljesítményű folyadékkromatográfia alapvetően az oszlopkromatográfia rendkívül továbbfejlesztett formája. Ahelyett, hogy az oldószer a gravitáció alatt egy oszlopon keresztül csöpögne, nagy nyomás alatt, akár 400 atmoszféra alatt kényszerül. Ez sokkal gyorsabbá teszi.

azt is lehetővé teszi, hogy egy nagyon sokkal kisebb részecskeméretet használjon az oszlop csomagolóanyagához, amely sokkal nagyobb felületet biztosít az álló fázis és a mögötte áramló molekulák közötti kölcsönhatásokhoz. Ez lehetővé teszi a keverék összetevőinek sokkal jobb elválasztását.

az oszlopkromatográfiával kapcsolatos másik jelentős javulás az alkalmazható kimutatási módszerekre vonatkozik. Ezek a módszerek rendkívül automatizáltak és rendkívül érzékenyek.

az oszlop és az oldószer

összetéveszthetetlenül, a HPLC-ben az oldószer relatív polaritásától és az álló fázistól függően két variáns van használatban.

normál fázis HPLC

Ez lényegében ugyanaz, mint amit már olvastál a vékony réteg kromatográfiájában vagy az oszlopkromatográfiájában. Bár “normálisnak” nevezik, ez nem a HPLC leggyakrabban használt formája.

az oszlop apró szilícium-dioxid-részecskékkel van feltöltve, az oldószer például nem poláris-hexán. Egy tipikus oszlop belső átmérője 4,6 mm (és ennél kisebb is lehet), hossza 150-250 mm.

az oszlopon áthaladó keverék poláris vegyületei hosszabb ideig tapadnak a poláris Szilícium-dioxidhoz,mint a nem poláris vegyületek. A nem polárisak ezért gyorsabban haladnak át az oszlopon.

fordított fázisú HPLC

ebben az esetben az oszlop mérete megegyezik, de a szilícium-dioxidot úgy módosítják, hogy nem poláris legyen, hosszú szénhidrogénláncokat csatolva a felületéhez – általában 8 vagy 18 szénatommal. Poláris oldószert használnak – például víz és alkohol, például metanol keverékét.

ebben az esetben a poláris oldószer és a poláris molekula között erős vonzerő alakul ki az oszlopban áthaladó keverékben. A Szilícium-dioxidhoz (az álló fázishoz) kapcsolódó szénhidrogénláncok és az oldatban lévő poláris molekulák között nem lesz akkora vonzerő. A keverékben lévő poláris molekulák ezért idejük nagy részét az oldószerrel mozgatják.

a keverékben lévő nem poláris vegyületek általában a szénhidrogéncsoportokkal alakulnak ki a Van der Waals diszperziós erők miatt. Kevésbé oldódnak az oldószerben is, mivel meg kell szakítani a hidrogénkötéseket, amikor például a víz vagy a metanol molekulák közé szorulnak. Ezért kevesebb időt töltenek oldatban az oldószerben, ami lelassítja őket az oszlopon keresztül.

Ez azt jelenti, hogy most a poláris molekulák gyorsabban haladnak át az oszlopon.

fordított fázisú HPLC a leggyakrabban használt formája HPLC.