laboratóriumi diagnózis

differenciáldiagnózis más amebae

patogén Entamoeba Fajok között meg kell különböztetni más bélprotozoáktól, mint például a nem patogén amebae (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) és a flagellate dientamo fragilis. Ezek között morfológiai differenciálódás lehetséges, de potenciálisan bonyolult, a ciszták és trofozoiták morfológiai jellemzői alapján.

kultúrában az E. differenciált növekedési jellemzői. a moshkovskii segíthet megkülönböztetni más fajoktól, de a tenyésztési módszereknek fontos korlátai vannak (hiányzó vegyes fertőzések, szennyeződés, munkaigényes, korlátozott rendelkezésre állás). Történelmileg az E. dispar és az E. histolytica differenciálódása izoenzimatikus vagy immunológiai analízisen alapult, de ezek már nem kedveznek a hatékony molekuláris módszerek rendelkezésre állásának, és ritkán kerülnek végrehajtásra. Jelenleg molekuláris módszerek ajánlottak a patogén Entamoeba Fajok megkülönböztetésére.

mikroszkopikus kimutatás

a ciszták és trofozoitok mikroszkópos azonosítása a székletben a patogén Entamoeba Fajok diagnosztizálásának gyakori módszere. Ezt a következőkkel lehet elérni:

• friss széklet: nedves tartók és tartósan festett készítmények (pl. trichrome).
• friss székletből készült koncentrátumok: nedves tartók, jódfoltokkal vagy anélkül, és tartósan festett készítmények (pl. trichrome). Míg a ciszták számára hasznos, a koncentrációs módszerek nem feltétlenül hasznosak a trofozoiták bizonyítására.
• a Mikroszkópiának alacsony érzékenysége is van, ha csak egy székletmintát elemeznek, és morfológiai diagnózisra képzett személyzetet igényel. Három egymást követő székletminta összegyűjtése és elemzése tíz napon belül javítja az észlelés esélyét. Továbbá, E. dispar, E. histolytica, E. moshkovskii nem különböztethető alapján morfológia.

a Trofozoitok a kolonoszkópia vagy műtét során kapott aspirátumokban vagy biopsziás mintákban is azonosíthatók.

Immunodiagnosis

az Entamoeba histolytica antitest detektálására szolgáló enzim immunoassay (EIA) készletek, valamint az antigén detektálására szolgáló EIA készletek kereskedelmi forgalomban kaphatók az Egyesült Államokban. Az antitest kimutatása a leghasznosabb az extraintesztinális betegségben (azaz amebikus máj tályogban) szenvedő betegeknél, amikor az organizmusokat általában nem találják meg a székletvizsgálat során. Az antitest kimutatása korlátozott diagnosztikai értékkel bír olyan, magas endemikus területekről származó betegek esetében, akiknek valószínűleg korábbi expozíciója és szerokonverziója van, de nagyobb mértékben alkalmazhatók olyan területeken élő betegeknél, ahol patogén Entamoeba spp. ritka. Az aktív fertőzések során az antigén kimutatása hasznos lehet a paraziták kimutatására szolgáló mikroszkopikus diagnózis kiegészítéseként, és különbséget tehet a patogén és a nem patogénfertőzések között.

antitest detektálás

Az indirekt hemagglutinációs (IHA) tesztet felváltották a kereskedelemben kapható EIA tesztkészletek az amebiasis rutinszerű szerodiagnózisára. Az antigén axenikusan tenyésztett organizmusok nyers oldható kivonatából áll. Az EIA-teszt az E-re specifikus antitesteket detektálja. histolytica az extraintesztinális amebiasisban szenvedő betegek körülbelül 95% – ánál, az aktív bélfertőzésben szenvedő betegek 70% – ánál, valamint az E. histolytica cisztáit áthaladó tünetmentes személyek 10% – ánál. Ha az antitestek nem mutathatók ki olyan betegeknél, akiknél a feltételezett amebikus máj tályog akut megjelenése van, egy második mintát 7-10 nappal később kell levonni. Ha a második minta nem mutat szerokonverziót, akkor más szereket is figyelembe kell venni. Kimutatható E. a hisztolitika-specifikus antitestek a sikeres kezelés után évekig fennmaradhatnak, így az antitestek jelenléte nem feltétlenül utal akut vagy aktuális fertőzésre. Azok a betegek is, akik nagyon endémiás területeken éltek, valószínűleg szeropozitív a múltbeli expozíciók miatt. A specifitás 95% vagy magasabb: hamis pozitív reakciók ritkán fordulnak elő.

bár az E. histolytica specifikus IgM antitestek kimutatását jelentették, az érzékenység csak 64% a jelenlegi invazív betegségben szenvedő betegeknél. Számos kereskedelmi EIA készletek antitest kimutatására állnak rendelkezésre az Egyesült Államokban. Az E. dispar vagy az E. moshkovskii vagy az E. Bangladesi kereskedelmi antitest-kimutatási készletek nem léteznek.

antigén detektálás

az antigén detektálása hasznos lehet a paraziták kimutatására szolgáló mikroszkopikus diagnózis kiegészítéseként, valamint a patogén és nempatogén fertőzések megkülönböztetésére. A hasznosság azonban korlátozott a fagyasztott vagy rögzített példányok és a kezelés utáni példányok esetében. A közelmúltban végzett vizsgálatok a széklet antigénvizsgálatok érzékenységének és specificitásának javulását mutatják monoklonális antitestek alkalmazásával, amelyek különbséget tehetnek az E. histolytica és az E. dispar fertőzések között. Legalább egy kereskedelmi készlet áll rendelkezésre, amely csak patogén E. histolytica fertőzést észlel a székletben; számos készlet áll rendelkezésre, amelyek kimutatják az E. histolytica antigéneket a székletben, de nem zárják ki az E. dispar fertőzéseket.

molekuláris diagnózis

hagyományos PCR

referencia-diagnosztikai laboratóriumokban a hagyományos PCR-alapú vizsgálatok molekuláris analízise az E. histolytica és az E. dispar közötti megkülönböztetés módszere. Egyes vizsgálatok megkülönböztethetik E. moshkovskii-t is.

valós idejű PCR

A CDC-nél validálták a TaqMan valós idejű PCR megközelítést, amelyet az amebiasis differenciál laboratóriumi diagnosztizálására használnak. A vizsgálat a 18S rRNA gént célozza meg fajspecifikus TaqMan szondákkal duplex formátumban, lehetővé téve mind az E. histolyrica, mind az E. dispar kimutatását ugyanabban a reakcióedényben.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Összehasonlítása valós idejű PCR indokok differenciál laboratóriumi diagnózis amebiasis. J Klin 2005;43:5491-5497.

laboratóriumi biztonságosság

a nem rögzített székletmintákban lévő ciszták potenciálisan fertőzőek. Tartsa be a székletmintákra vonatkozó szokásos óvintézkedéseket: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.