kurfarvning
Nissl-farvning
kerner og nissl-legemer (groft endoplasmatisk retikulum) er farvet blå lilla med cresylviolet.
Nissl-farvning bruges til farvning af KL-Karrera (KB).
- farvningsprocedure
- vigtige overvejelser vedrørende differentiering
farvningsprocedure
| 1 | Deparaffinisering | Ksylen | 3 Ændringer, 10 minuntes hver | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 2 | 100% ethanol | 3 Ændringer, 5 minutter hver | |||
| 3 | hydrering | 95%, 70% ethanol | 5 minutter hver | ||
| 4 | vask | rindende vand | 2 minutter | ||
| 5 | skylning | destilleret vand | |||
| 6 | farvning | 0,1% cresylviolet opløsning | 10 minutter, 37 liter | ||
| 7 | differentiering | 95% ethanol + et par dråber 10% eddikesyreopløsning | cirka 5 til 10 minutter. Pas på ikke at overdifferentiere, da affarvning vil fortsætte i det følgende trin. | ||
| 8 | differentiering | 95%, 100% ethanol | cirka 1 minut hver. Differentier, indtil kun kerner og nissl-kroppe er blå lilla. | ||
| 9 | mikroskopisk kontrol | step AMD& kan gentages, hvis der er behov for mere differentiering. | |||
| 10 | dehydrering | 100% ehtanol | 2 Ændringer, 5 minutter hver | ||
| 11 | rydning | 3 Ændringer, 10 minutter hver | |||
| 12 | coverslipping |
0.1% cresylviolet vandig opløsning (Filter før brug)
1g
1000ml
pH af cresylviolet
farvningsmetoden varierer afhængigt af pH i farvningsopløsningen. Ved en pH tæt på 3,0 er kun Nissl-legemerne, nucleoli og nukleare membraner farvet Lyseblå. Gliacellekerner er kun meget let farvede. Når pH øges, bliver farven generelt mørkere, og cytoplasmaet i nerveceller, nervefibre og gliaceller farves sammen. Co-farvning intensiveres tæt på en pH på 4,0. Derfor kræves en længere differentieringstid.
pH3.0
pH4.7
typer af cresyl violet
tre typer cresyl violet anvendes i øjeblikket i laboratoriet for neuropatologi.
| Produktnavn | producent | tilgængelighed |
|---|---|---|
| CRESYL Violet acetat | EM SCIENCE | ikke på lager |
| Cresyl Violet acetat | Sigma | tilgængelig kommercielt |
| cresylviolet (acetat) | Merck | tilgængelig kommercielt |
differentieringstiden varierer afhængigt af cresylviolet produkt
ph af farvningsopløsningen varierer afhængigt på produktet. Derfor er farvningsmetoderne også forskellige. Det er vigtigt at være opmærksom på, at den tid, der kræves til differentiering, varierer mellem produkter. Uanset hvilket produkt der anvendes, kan det samme farvede kromatiske billede i sidste ende opnås gennem differentiering og observation af prøven under et mikroskop.
| Produktnavn | producent | pH på 0,1% cresylviolet opløsning | Differentieringstid i 95% ethanol |
|---|---|---|---|
| Cresylviolet acetat | EM SCIENCE | 3.5 | i 10 til 30 sekunder |
| CRESYLVIOLET acetat | SIGMA | 4, 7 | 10min ca. |
| Cresylviolet (acetat) | MERCK | 4, 8 | 10min ca. |
Oprens pH-værdien kan justeres fra 3,5 til ca. 3,8 ved at tilsætte en passende mængde 10% eddikesyre til Sigma-og Merck-farvningsløsningerne, hvilket vil forkorte den nødvendige tid til differentiering med 95% ethanol. Det anbefales dog ikke at genbruge denne løsning.
vigtige overvejelser vedrørende differentiering
Udfør differentiering, indtil baggrunden bliver hvid. At have nukleolerne og kernemembranerne i nervecellekernerne klare og kromatin svagt farvet er ideelt.
Cresylviolet acetat (Sigma C5042) pH4.7 blev brugt i begge sektioner.
venstre fotografi: 95% ethanoldifferentiering i kun 10 sekunder. Med utilstrækkelig differentiering er hele nervecellen farvet blå, hvilket gør det umuligt at identificere kernen og Nissl-legemerne.
højre fotografi: 95% ethanoldifferentiering i 10 minutter. Tilstrækkelig differentiering gør det muligt at differentiere neuronernes kerner og Nissl-kroppe klart.
Leave a Reply