blod-og Marvanalyse

Begrænsninger, der ledsager generering af cellesuspensioner, gælder ikke for patienter med blod-eller marvinddragelse ved kroniske lymfoproliferative lidelser. Underklassificering af disse læsioner er stærkt afhængig af strømningscytometri.42,44,49-51 kronisk lymfocytisk leukæmi (CLL) er i det væsentlige defineret af dets immunofenotypiske egenskaber. Andre B-celle lymfoproliferative lidelser har karakteristiske, hvis ikke altid absolut specifikke fænotyper. Mantelcellelymfom kan ofte genkendes i sin leukæmiske fase, skønt den mest specifikke markør, cyclin D1, er meget vanskelig at detektere ved strømning med aktuelle teknikker. Hårcelleleukæmi har omvendt ikke kun en karakteristik,men også en meget specifik fænotype42,50, 52; lejlighedsvis kan patienter med uforklarlig pancytopeni bestemmes at have hårcelleleukæmi, når kun et lille antal blodlegemer med den klassiske fænotype er identificeret52 (Fig. 15-3).

Strømningscytometri kan også detektere prognostiske faktorer hos personer med CLL. I erkendelse af, at CLL kan opdeles i en dårlig prognosetype forbundet med ikke-muterede immunoglobulin V-regiongener og en bedre prognose muteret fænotype, har flere undersøgelser forsøgt at identificere strømningssurrogater. Den første markør, der viste sig at være prognostisk, var CD38, skønt korrelationen med enten mutationsstatus eller prognose er ufuldkommen.53,54 CETA-kædeassocieret proteinkinase 70 (SAP 70) ser ud til at være en bedre surrogatmarkør, selvom den heller ikke er perfekt; det giver dog prognostiske oplysninger.55-57 selv om denne analyse er bredt tilgængelig, især i kommercielle referencelaboratorier, kan afskæringer mellem positive og negative imidlertid være vilkårlige, og der kan således forekomme betydelig variation i resultater blandt laboratorier.Der er gjort 58,59 forsøg på at forbedre reproducerbarheden,60 men det er ikke altid sikkert, at et bestemt assay vil give de samme resultater som dem i den offentliggjorte kliniske litteratur. Andre forsøg er blevet gjort for at definere prognostisk signifikante undergrupper af patienter med CLL ved hjælp af andre kombinationer af markører,61 Men disse kombinationer er ikke blevet vedtaget i rutinemæssig praksis.

den primære værdi af strømningscytometri ved vurdering af kroniske leukæmier er dens evne til at demonstrere klonalitet i B-cellepopulationer baseret på begrænset ekspression af en type immunoglobulin let kæde. Denne funktion er særlig værdifuld i evalueringen af patienter med uforklarlig lymfocytose62,63 og er også nyttig til bestemmelse af stadiet hos patienter med B-celle ikke-Hodgkin lymfom,64,65, fordi tilstedeværelsen af så lidt som 0, 5% til 1% af en klonal B-cellepopulation, eller endnu mindre, kan påvises i MARV eller blod hos nogle patienter. Imidlertid har den høje følsomhed af strømningscytometri til påvisning af klonale populationer vist små klonale B-cellepopulationer hos nogle patienter uden åbenlyst lymfom eller leukæmi.66 således skal konstateringen af en lille marvklon fortolkes med forsigtighed i fravær af andre tegn på lymfom, analogt med at finde en monoklonal gammopati hos en patient uden tegn på myelom.

Strømningscytometri er også blevet anvendt i vid udstrækning i undersøgelsen af patienter med myelom. En begrænsning af strømningscytometri er, at plasmaceller er underrepræsenteret på marvaspirater undersøgt ved strømning sammenlignet med forekomsten af celler på film eller i biopsier; som et resultat kan denne teknik ikke bruges til at kvantificere myelomceller og kan således ikke erstatte morfologi ved anvendelse af traditionelle diagnostiske kriterier. Plasmaceller har imidlertid en karakteristisk fænotype, herunder meget lys ekspression af CD38 og ekspression af CD138,67,68 og er således lette at genkende. Ved anvendelse af membranpermeabiliseringsteknikker er det let at demonstrere cytoplasmisk immunoglobulin (ig) letkædebegrænsning.67 det er mere vigtigt, at neoplastiske plasmaceller normalt har unormale fænotyper. Selvom ingen enkelt specifik fænotypisk abnormitet tillader sondring mellem godartet monoklonal gammopati og myelom, strømningscytometri kan stadig være nyttigt at skelne myelom fra monoklonal gammopati af ubestemt betydning, eller at forudsige progression af monoklonal gammopati af ubestemt betydning eller ulmende myelom.69-71 desuden har strømningscytometrisk vurdering af unormale plasmaceller på tidspunktet for diagnosen myelom vist sig at have prognostisk betydning.72 derudover er påvisning af cirkulerende plasmaceller eller persistens af en unormal fænotype efter behandling, herunder påvisning af minimal restsygdom, forudsigelig for resultatet hos patienter med myelom.69,71,73-76

Klonalitet af T-cellepopulationer kan også påvises ved strømningscytometri, skønt metoden er mere kompleks og ikke er så bredt tilgængelig som den, der anvendes til B-celler. Denne teknik er baseret på demonstration af begrænsning af V-beta-genbrug i T-celle leukæmier.77-79 T-celle maligniteter viser også ofte unormale T-celle fænotyper, som oftest er karakteriseret ved tab af et normalt pan-T antigen eller ekspression af et T-celle antigen ved unormal intensitet.44,80,81 fordi visse små, usædvanlige og endda klonale t-cellepopulationer kan ses i små antal under ikke-neoplastiske forhold, har denne teknik mere begrænset følsomhed end demonstration af en klonal B-cellepopulation. Imidlertid, når unormale T-celler tegner sig for mere end en meget lille procentdel af celler, multiparameter strømningscytometri demonstrerer dem let og spiller en væsentlig rolle i kategoriseringen af disse usædvanlige tumorer.