Diagnosi di Laboratorio

diagnosi Differenziale tra le altre amebae

Patogeni Entamoeba specie deve essere differenziato da altri protozoi intestinali come la parte amebae (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) e i flagellati Dientamoeba fragilis. La differenziazione morfologica tra questi è possibile, ma potenzialmente complicata, in base alle caratteristiche morfologiche delle cisti e dei trofozoiti.

In cultura, caratteristiche di crescita differenziali di E. moshkovskii può aiutare a distinguerlo da altre specie, ma i metodi di coltura hanno importanti limitazioni (infezioni miste mancanti, contaminazione, disponibilità ad alta intensità di lavoro e limitata). Storicamente, la differenziazione di E. dispar ed E. histolytica era basata su analisi isoenzimatiche o immunologiche, ma queste non sono più favorite dalla disponibilità di metodi molecolari efficaci e vengono raramente eseguite. I metodi molecolari sono attualmente raccomandati per distinguere le specie Entamoeba patogene.

Rilevamento microscopico

L’identificazione microscopica di cisti e trofozoiti nelle feci è il metodo comune per diagnosticare le specie Entamoeba patogene. Questo può essere ottenuto utilizzando:

• Sgabello fresco: supporti bagnati e preparati permanentemente macchiati (ad esempio, tricromo).
• Concentrati da feci fresche: supporti bagnati, con o senza macchia di iodio, e preparati permanentemente macchiati (ad esempio, tricromo). Mentre utile per le cisti, metodi di concentrazione potrebbero non essere utili per dimostrare trofozoiti.
• La microscopia ha anche una bassa sensibilità se viene analizzato un solo campione di feci e richiede personale addestrato nella diagnosi morfologica. La raccolta e l’analisi di tre campioni di feci consecutivi entro dieci giorni migliorano le possibilità di rilevamento. Inoltre, E. dispar, E. histolytica ed E. moshkovskii non sono distinguibili in base alla morfologia.

I trofozoiti possono anche essere identificati in aspirati o campioni bioptici ottenuti durante la colonscopia o la chirurgia.

Immunodiagnosi

I kit per il dosaggio immunoenzimatico (EIA) per il rilevamento degli anticorpi di Entamoeba histolytica e i kit EIA per il rilevamento degli antigeni sono disponibili in commercio negli Stati Uniti. Il rilevamento di anticorpi è più utile nei pazienti con malattia extraintestinale (cioè ascesso epatico amebico) quando gli organismi non si trovano generalmente all’esame delle feci. La rilevazione degli anticorpi ha un valore diagnostico limitato su pazienti provenienti da aree altamente endemiche che possono avere una precedente esposizione e sieroconversione, ma può essere di maggiore utilità su pazienti provenienti da aree in cui Entamoeba spp patogena. sono rari. La rilevazione dell’antigene durante le infezioni attive può essere utile come aggiunta alla diagnosi microscopica nel rilevare i parassiti e può distinguere tra infezioni patogene e non patogene.

Rilevazione degli anticorpi

Il test di emoagglutinazione indiretta (IHA) è stato sostituito da kit di test VIA disponibili in commercio per la sierodiagnosi di routine dell’amebiasi. L’antigene è costituito da un estratto solubile grezzo di organismi coltivati assenicamente. Il test VIA rileva anticorpi specifici per E. histolytica in circa il 95% dei pazienti con amebiasi extraintestinale, il 70% dei pazienti con infezione intestinale attiva e il 10% delle persone asintomatiche che stanno passando cisti di E. histolytica. Se gli anticorpi non sono rilevabili in pazienti con una presentazione acuta di sospetto ascesso epatico amebico, un secondo campione deve essere prelevato 7-10 giorni dopo. Se il secondo campione non mostra sieroconversione, devono essere presi in considerazione altri agenti. Rilevabile E. gli anticorpi specifici di histolytica possono persistere per anni dopo il successo del trattamento, quindi la presenza di anticorpi non indica necessariamente un’infezione acuta o in corso. Inoltre, i pazienti che hanno vissuto in aree altamente endemiche sono suscettibili di essere sieropositivi a causa di esposizioni passate. La specificità è del 95% o superiore: raramente si verificano reazioni false positive.

Sebbene sia stata riportata la rilevazione di anticorpi IgM specifici per E. histolytica, la sensibilità è solo del 64% circa nei pazienti con malattia invasiva corrente. Parecchi corredi commerciali di VIA per rilevazione dell’anticorpo sono disponibili negli Stati Uniti. Non esistono kit di rilevamento di anticorpi commerciali per E. dispar o E. moshkovskii o E. bangladeshi.

Rilevazione dell’antigene

La rilevazione dell’antigene può essere utile come aggiunta alla diagnosi microscopica nella rilevazione dei parassiti e per distinguere fra le infezioni patogene e non patogene. Tuttavia, l’utilità è limitata per i campioni congelati o fissi e per i campioni post-trattamento. Studi recenti indicano una migliore sensibilità e specificità dei saggi di antigene fecale con l’uso di anticorpi monoclonali che possono distinguere tra infezioni da E. histolytica e E. dispar. È disponibile almeno un kit commerciale che rileva solo l’infezione patogena da E. histolytica nelle feci; sono disponibili diversi kit che rilevano gli antigeni di E. histolytica nelle feci ma non escludono le infezioni da E. dispar.

Diagnosi molecolare

PCR convenzionale

Nei laboratori di diagnosi di riferimento, l’analisi molecolare mediante saggi convenzionali basati su PCR è il metodo di scelta per discriminare tra E. histolytica ed E. dispar. Alcuni saggi possono anche distinguere E. moshkovskii.

Real-Time PCR

Un approccio TaqMan real-time PCR è stato convalidato al CDC e viene utilizzato per la diagnosi differenziale di laboratorio di amebiasi. Il test mira al gene rRNA 18S con sonde TaqMan specifiche per specie in un formato duplex, rendendo possibile rilevare sia E. histolyrica che E. dispar nello stesso recipiente di reazione.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Confronto delle motivazioni della PCR in tempo reale per la diagnosi differenziale di laboratorio di amebiasi. J Clin Microbiol 2005;43: 5491-5497.

Sicurezza di laboratorio

Le cisti nei campioni di feci non fissati sono potenzialmente infettive. Osservare le precauzioni standard applicabili ai campioni di feci: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.