mistä restriktioentsyymit tulevat?

Restriktioentsyymejä löytyy bakteereista. Bakteerit käyttävät restriktioentsyymejä virusten tappamiseen-entsyymit hyökkäävät viruksen DNA: ta vastaan ja hajottavat sen hyödyttömiksi fragmenteiksi.

miten restriktioentsyymit vaikuttavat?

kuten kaikki entsyymit, myös restriktioentsyymi toimii muotoa sovittamalla. Kun se joutuu kosketuksiin DNA-sekvenssin kanssa, jonka muoto vastaa jotakin entsyymin osaa, niin sanottua tunnistuspaikkaa, se kiertyy DNA: n ympärille ja aiheuttaa katkoksen DNA-molekyylin molemmissa säikeissä.

jokainen restriktioentsyymi tunnistaa erilaisen ja spesifisen tunnistuspaikan eli DNA-sekvenssin. Tunnistuspaikat ovat yleensä vain lyhyitä-4-8 nukleotidia.

milloin restriktioentsyymejä käytetään?

Restriktioentsyymit ovat biotekniikan tutkimuksen perustyökalu. Niitä käytetään DNA-kloonaukseen ja DNA-sormenjälkien ottamiseen.

erityyppisiä restriktioentsyymejä

tutkijat ovat tunnistaneet ja puhdistaneet satoja erityyppisiä restriktioentsyymejä. Ne on nimetty sen eliön suvun ja lajin mukaan, josta ne eristettiin, ja niille on annettu numero, joka kertoo niiden löytymisjärjestyksen. Esimerkiksi EcoRI oli ensimmäinen restriktioentsyymi, joka eristettiin Escherichia coli-kannasta RY13, kun taas Hindii oli kolmas entsyymi, joka eristettiin Haemophilus influenzae-kannasta R D.

DNA-fragmentteja: tylppiä tai tahmeita päitä?

DNA koostuu kahdesta toisiaan täydentävästä nukleotidisäikeestä, jotka kiertyvät toistensa ympäri kaksoiskierteessä. Restriktioentsyymit leikkaavat molemmat nukleotidisäikeet ja hajottavat DNA: n sirpaleiksi, mutta ne eivät aina tee tätä samalla tavalla.

SmaI on esimerkki restriktioentsyymistä, joka leikkaa suoraan DNA-juosteiden läpi muodostaen DNA-fragmentteja, joilla on litteä tai tylppä pää.

muut restriktioentsyymit, kuten EcoRI, leikkaavat DNA-juosteita nukleotideilla, jotka eivät ole täsmälleen vastakkain. Tällöin syntyy DNA-fragmentteja, joiden päässä on yksi nukleotidisäike, joka ulostaa. Tätä nukleotidijuostetta sanotaan tahmeaksi, koska se voi helposti sitoutua toisiaan täydentäviin DNA-fragmentteihin.