laboratoriediagnose

differentialdiagnose blandt andre Amebae

patogene Entamoeba-arter skal differentieres fra andre intestinale protosoer, såsom den ikke-patogene amebae (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, endolimaks nana, Iodamoeba buetschlii) og flagellat Dientamoeba fragilis. Morfologisk differentiering blandt disse er mulig, men potentielt kompliceret, baseret på morfologiske egenskaber hos cyster og trofositter.

i kultur, differentielle vækstkarakteristika for E. moshkovskii kan hjælpe med at skelne det fra andre arter, men kulturmetoder har vigtige begrænsninger (manglende blandede infektioner, forurening, arbejdskrævende, begrænset tilgængelighed). Historisk set differentiering af E. dispar og E. histolytica var baseret på isoensymatisk eller immunologisk analyse, men disse foretrækkes ikke længere med tilgængeligheden af effektive molekylære metoder og udføres sjældent. Molekylære metoder anbefales i øjeblikket til at skelne mellem patogene Entamoeba-arter.

mikroskopisk detektion

mikroskopisk identifikation af cyster og trofositter i afføringen er den almindelige metode til diagnosticering af patogene Entamoeba-arter. Dette kan opnås ved hjælp af:

• frisk afføring: våde monteringer og permanent farvede præparater (f.eks.
• koncentrater fra frisk afføring: våde monteringer, med eller uden jodplet, og permanent farvede præparater (f.eks. Selvom det er nyttigt for cyster, er koncentrationsmetoder muligvis ikke nyttige til at demonstrere trofositter.
• mikroskopi har også en lav følsomhed, hvis kun en afføringsprøve analyseres og kræver personale, der er uddannet i morfologisk diagnose. Indsamling og analyse af tre på hinanden følgende afføringsprøver inden for ti dage forbedrer chancerne for påvisning. Også E. dispar, E. histolytica og E. moshkovskii kan ikke skelnes ud fra morfologi.

Trofositter kan også identificeres i aspirater eller biopsiprøver opnået under koloskopi eller kirurgi.

Immunodiagnose

EIA-sæt til Entamoeba histolytica-antistofdetektion samt EIA-sæt til antigendetektion er kommercielt tilgængelige i USA. Antistofdetektion er mest nyttig hos patienter med ekstraintestinal sygdom (dvs.amebisk leverabces), når organismer generelt ikke findes ved afføringsundersøgelse. Antistofdetektion er af begrænset diagnostisk værdi hos patienter fra meget endemiske områder, der sandsynligvis har tidligere eksponering og serokonversion, men kan være mere anvendelig på patienter fra områder, hvor patogen Entamoeba spp. er sjældne. Antigendetektion under aktive infektioner kan være nyttigt som et supplement til mikroskopisk diagnose til påvisning af parasitter og kan skelne mellem patogene og ikke-patogene infektioner.

Antistofdetektion

den indirekte hæmagglutinationstest (IHA) er blevet erstattet af kommercielt tilgængelige VVM-testsæt til rutinemæssig serodiagnose af amebiasis. Antigen består af et råopløseligt ekstrakt af aksenisk dyrkede organismer. VVM-testen detekterer antistof specifikt for E. 95% af patienterne med ekstraintestinal amebiasis, 70% af patienterne med aktiv tarminfektion og 10% af asymptomatiske personer, der passerer cyster af E. histolytica. Hvis antistoffer ikke kan påvises hos patienter med en akut præsentation af mistænkt amebisk leverabscess, skal en anden prøve trækkes 7-10 dage senere. Hvis den anden prøve ikke viser serokonversion, bør andre stoffer overvejes. Detekterbar E. histolytica-specifikke antistoffer kan vedvare i årevis efter vellykket behandling, så tilstedeværelsen af antistoffer indikerer ikke nødvendigvis akut eller aktuel infektion. Også patienter, der har boet i meget endemiske områder, vil sandsynligvis være seropositive på grund af tidligere eksponeringer. Specificitet er 95% eller højere: falsk-positive reaktioner forekommer sjældent.

selvom detektion af IgM-antistoffer, der er specifikke for E. histolytica, er følsomheden kun omkring 64% hos patienter med nuværende invasiv sygdom. Flere kommercielle VVM-sæt til antistofdetektion er tilgængelige i USA. Der findes ingen kommercielle antistofdetekteringssæt til E. dispar eller E. moshkovskii eller E. bangladeshi.

Antigendetektion

Antigendetektion kan være nyttigt som et supplement til mikroskopisk diagnose til påvisning af parasitter og til at skelne mellem patogene og ikke-patogene infektioner. Anvendeligheden er dog begrænset til frosne eller faste prøver og til prøver efter behandling. Nylige undersøgelser indikerer forbedret følsomhed og specificitet af fækale antigenassays ved anvendelse af monoklonale antistoffer, der kan skelne mellem E. histolytica og E. dispar infektioner. Der findes mindst et kommercielt sæt, der kun registrerer patogen E. histolytica-infektion i afføring; der findes flere sæt, der registrerer E. histolytica-antigener i afføring, men udelukker ikke E. dispar-infektioner.

Molekylær diagnose

konventionel PCR

i referencediagnoselaboratorier er molekylær analyse ved konventionelle PCR-baserede analyser den valgte metode til at skelne mellem E. histolytica og E. dispar. Nogle analyser kan også skelne E. moshkovskii.

realtids PCR

en TAKMAN realtids PCR-tilgang er blevet valideret ved CDC og bruges til differentiel laboratoriediagnose af amebiasis. Analysen er rettet mod 18S rRNA-genet med artsspecifikke Takman-prober i et dupleksformat, hvilket gør det muligt at detektere både E. histolyrica og E. dispar i samme reaktionsbeholder.visvesvara GS, et al. Sammenligning af realtids PCR-rationaler til differentiel laboratoriediagnose af amebiasis. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

Laboratoriesikkerhed

cyster i ikke-faste afføringsprøver er potentielt infektiøse. Overhold standardforholdsregler, der gælder for afføringsprøver: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.