Diagnose

Klinisk diagnose: Klinisk bilde av pasientene som lider av klamydialinfeksjon kan være misvisende da opptil 70-80 prosent av de smittede kvinnene og 50 prosent av de smittede mennene er asymptomatiske. Vanligvis vil en kvinne med ukomplisert klamydialinfeksjon presentere luktfri, mucoid vaginal utslipp uten kløe. Dysuri uten frekvens eller haster vil bli klaget over hvis urinrøret er involvert. Videre, I PID, kan historie med alvorlige magesmerter med høy feber, dyspareuni, langvarige menstruasjonssykluser og intermenstural blødning fremkalles. Ved undersøkelse kan cervicitt med gul, overskyet, mucoid utslipp ses fra operativsystemet. Livmorhalsen har en tendens til å blø lett når skrapt med slikkepott eller pensel. Urinalyse vil avsløre tilstedeværelsen av >5 WBC/HPF (high power field), som tyder på uretritt13. Klamydialinfeksjoner kan ikke skilles fra andre urinveisinfeksjoner klinisk. Amintest (dvs., signifikant luktfrigjøring ved TILSETNING AV KOH til vaginal sekresjon) kan bidra til å skille klamydiainfeksjoner fra andre nedre kjønnsinfeksjoner, men har lav spesifisitet.Klamydiainfeksjon hos menn manifesterer seg som uretritt hos 15-55 prosent av de berørte mindre enn eller lik 35 år, noen ganger epididymitt kan ses2. Mild til moderat klar til hvit urethral utflod er sett i morgen før pasienten hulrom. Ved epididymitt kan historie med ensidig testikulær smerte med skrotal erytem, ømhet eller hevelse over epididymis fremkalles. Diagnosen kan etableres ved tilstedeværelse av mucopurulent utslipp fra penis som På Gramfarging viser >5 WBC / HPF og fravær av intracellulære Gram negative diplokokker. Reiter syndrom kan være en sjelden komplikasjon av ubehandlet klamydial infeksjon. En reaktiv artritt som inkluderer triade av uretritt / cervicitt hos kvinner, conjuntivitt og smertefri mucopurulent utbrudd på palmer og såler av føtter, ses i Reiter syndrom29. Kvinne er mer vanlig påvirket enn menn. Det er asymmetriske flere fellesinvolveringer med predileksjon for nedre ekstremiteter.Laboratoriediagnose: Asymptomatisk sykdommens Art og det økende spekteret av infeksjoner forårsaket Av c. trachomatis understreker behovet for følsomme og pålitelige laboratoriemetoder.

Ferdigheter i prøvetaking og transport er avgjørende for nøyaktighet i diagnostisk testing. Både sensitiviteten og spesifisiteten av diagnostiske tester For c. trachomatis har vist seg å være direkte relatert til tilstrekkeligheten av prøven. Vertscellene som huser organismen bør inkluderes i prøvetaking som chlamydiae er obligate intracellulære patogener, spesielt i teknikker som involverer direkte visualisering av organismen.

valget av prøvetakingssteder kan påvirke sannsynligheten for å gjenopprette patogenet. En 10-20 prosent økning i utvinningen Av c. trachomatis fra kjønnsorgan har blitt observert hvis både cervikale og urethrale prøver er tatt i forhold til cervikal prøvetaking42. Endocervikal vattpinne, vaginal/introital vattpinne, vulval vattpinne samt urethral og rektal vattpinne og første fangst urin er de vanlige prøvene tatt fra kvinnelige pasienter. Urethral og rektal vattpinne og første fangst urinprøve kan også hentes fra mannlige pasienter i tillegg til andre spesifikke prøver som prostatavæske.

Kvalitetssikring av innsamling og transport av prøven: Prøven tilstrekkelighet kan bestemmes ved visualisering av squamo-columnar celler under mikroskopi. En prøve anses som tilstrekkelig hvis den inneholder en kolonne / metaplastcelle per lysbilde. Sannsynligheten for isolering er optimalisert dersom prøven er nedkjølt umiddelbart etter innsamling ved 2-8°C. tiden mellom prøveinnsamling Og behandling bør ideelt sett være mindre enn 48 timer, hvis det ikke er mulig, kan disse fryses ved -70 °C til prosessert16. Fosterbovinserum (2-5%) bidrar til å bevare chlamydiae-levedyktigheten i prøver som skal fryses. To-molar sukrosefosfat (2-MSP) eller sukrose glutamatfosfat er det mest brukte transportmediet. Syntetiske transportmedier for kultur og noen ikke – kulturtester er utviklet og godkjent for diagnostisk bruk, dvs. M4 transport medium, Flex Trans medium og nytt m4 syntetisk/universelt medium.

laboratoriediagnosen Av Klamydia består Av følgende metoder:

(i) Spesifikke tester

Cellekultur: Isolering av organismen er den endelige metoden for diagnose av klamydialinfeksjon. Chlamydia er et obligatorisk intracellulært patogen og krever derfor embryonerte hønseegg eller dyrcellelinjer for kultur. Slike kulturmetoder er teknisk vanskelige, arbeidsintensive, besværlige og dyre, og har ikke blitt utbredt som en rutinemessig test utført i generelle kliniske laboratorier. Imidlertid har tre in vitro-systemer blitt brukt til kultur av chlamydiae viz. inokulering av mus (intraperitoneal, intrakraniell og intravenøs), plommesekk-inokulering (7-8 dagers kyllingembryo-inokulering av plommesekk) og cellekulturlinjer16. De mest brukte cellelinjene inkluderer-HeLa 229 celler, McCoy celler, BHK21 og bgmk celler24.

cellekulturens følsomhet for isolering av klamydiae forsterkes ved forbehandling av celler ved polykasjoner, DEAE-dekstraner, sentrifugering av inokulumet på cellemonolaget og inkorporering av antimetabolitter som cykloheksimid Eller cytochalasin B i cellekulturmedium42. Cellemonolag for kultur Av C. trachomatis dyrkes i trommel-eller skallflasker på glassdeksler eller i brønnene til multiwell cellekulturskåler. Skallhetteglasset er mer følsomt for klinisk prøve enn multiwell cellekultur på grunn av mindre sjanser for krysskontaminering42. Før inokulering skal prøven sonikeres for å forstyrre vertscellene og for å skille klamydialinneslutninger. For å inokulere cellekulturer, bør det overliggende kulturmediet fjernes og erstattes med nok prøve i kulturtransportmediet for å dekke monolaget og forhindre tørking.Det mest brukte vekstmediet er Eagles Minimal Essential Medium (EMEM) supplert med aminosyrer og vitaminer, føtal kalveserum (5-10), ekstra glukose (0,056 m) og 2-glutamin42. Etter inokulering inkuberes kulturer ved 37o C i 2-3 dager. Chlamydial inneslutninger blir deretter observert ved immunfluorescerende farging. Sensitiviteten til isolasjonen har vist seg å variere fra 70-85 prosent avhengig av laboratoriet og kultursystemet som brukes. Tradisjonelt er dette «gullstandarden» for diagnosen C. trachomatis, da Den er 100 prosent spesifikk42. Dessverre er det utenfor kapasiteten til de fleste private og offentlige laboratorier på grunn av teknisk etterspørsel, arbeidsintensitet og høye kostnader.

direkte fluorescerende test (DFA): DFA-testen legger til den betydelige fordelen Av Klamydia-spesifikk antistofffarging til direkte undersøkelse av prøven og er fortsatt en av de mest nyttige diagnostiske teknikkene. I denne testen brukes rask identifisering av elementære legemer i smører med flouresceinisotiocynat – konjugerte monoklonale antistoffer (FITC-Mab) mot MOMP eller genusspesifikke LPS. Elementære legemer fremstår som tydelige, skarpt skisserte, eplegrønne, diskformede (300 nm) partikler og retikulerte legemer opptrer omtrent tre ganger større enn elementære legemer som har en fluorescerende halo.

denne prosedyren krever ikke strenge betingelser for prøvetransport, da en sengesideflaske fremstilles og deretter transporteres for behandling. VED BRUK AV MOMP Av C. trachomatis er sensitiviteten og spesifisiteten til DFA funnet å være henholdsvis 80-90 prosent og 98-99 prosent i forhold til kultur43. DEN høye spesifisiteten TIL DFA skyldes dens avhengighet av visualisering av karakteristisk morfologi og fargingskarakteristikker av klamydial inneslutninger. DFA er den eneste diagnostiske testen tilgjengelig som tillater samtidig vurdering av prøvenes tilstrekkelighet ved visualisering av epitelceller tilstede i smøret. Det er raskt og enkelt (behandlingstid ca 30 min), men mikroskopisk undersøkelse og tolkning av resultater krever kompetanse. Denne metoden anbefales derfor for laboratorier med lavt volum. Denne testen kan også brukes på ekstragenitale steder. Det er rapportert å være mer følsom enn kultur for påvisning Av Klamydia i endometrial eller tubal prøver42.

ELISA (enzymbundet immunosorbant analyse): ELISA er tilgjengelig for påvisning Av C. trachomatis antigen. Flere kommersielt tilgjengelige ELISA-sett er tilgjengelige for formålet. De fleste av disse oppdager chlamydial LPS som er mer løselig enn MOMP. Enzymimmunoassay-testene (EIA) har blitt rapportert å ha en sensitivitet på 62-96 prosent og en spesifisitet på 86-99 prosent sammenlignet med cellekulturen44. Denne testen er egnet for laboratorier uten tilgang til cellekultur. Imidlertid har forskjellige store og små studier over hele Verden, inkludert India, rapportert dårlig følsomhet FOR ELISA i forhold TIL DFA og PCR45,46,47.Cytologi: Cytologi Er en lett tilgjengelig, enkel å bruke og kostnadseffektiv diagnostisk test. Det krever ikke forholdsregler for prøvelagring og transport, og ikke-levedyktige / ikke-smittsomme partikler kan også detekteres. Kvaliteten på det kliniske prøven kan vurderes ved mikroskopisk teknikk, og de tekniske prosedyrene som brukes i disse testene, er vanligvis raskere og enklere å utføre enn kultur. Giemsa, immunoflourescence og jodfargingsmetoder er mest brukte. Andre flekker som immunoperoxidase, immunoferritin, May Grunwald, Giemenez, Macchiavello og acridin orange kan også brukes til å oppdage klamydial inkludering i eksfolierte celler. Tilstedeværelsen av intracytoplasmatiske inneslutninger er patogenonomisk for klamydial okulære infeksjoner hos nyfødte, men denne metoden anbefales ikke for å diagnostisere konjunktivitt eller kjønnsinfeksjon hos voksne på grunn av mangel på følsomhet. Av de tre metodene tilbyr immunfluorescens den høyeste følsomheten etterfulgt Av Giemsa og deretter jodfarging42.

Molekylære metoder: De tradisjonelle diagnosemetodene har flere begrensninger som inkluderer lav følsomhet, lang testtid og høy kostnad. Derfor utarbeides tester basert på direkte anerkjennelse AV DNA-og RNA-sekvenser. Den kommersielt tilgjengelige DNA-sonden for påvisning Av Klamydia er PACE 2-test (Probe Assay Chemiluminescence Enhanced)48, som er i stand Til å oppdage Neisseria gonorrhoeae også, som er en ikke-isotopisk DNA-sonde for påvisning av spesifikke deler av r-RNA Av C. trachomatis i endocervical og urethral prøven. EN ANNEN DNA-probe, PACE 2c test er også utviklet som samtidig oppdager Både C. trachomatis og n. gonorrhoeae fra en enkelt prøve; imidlertid er det nødvendig med ytterligere evaluering AV PACE 2C før bruk i diagnostikk. Disse testene benytter en kjemiluminescerende DNA-sonde som hybridiserer til en artsspesifikk sekvens av klamydial 16s rRNA. NÅR DNA-rrna hybrid er dannet, blir den adsorbert på en magnetisk perle og den kjemiluminescerende responsen detekteres kvantitativt med et luminometer. Siden aktivt delende chlamydiae inneholder opptil 104 kopier AV 16s rRNA, BØR PACE 2-testen teoretisk være mer følsom enn antigen deteksjonssystemer. SENSITIVITETEN TIL PACE 2 i forhold TIL EN DNA-amplifikasjonsstandard er ennå ikke godt evaluert, men er rapportert å være 77 til 93 prosent48 i en studie.utviklingen av tester basert PÅ nukleinsyreforsterkningsteknologi (NAAT) har vært den viktigste fremgangen innen klamydialdiagnose siden in vitro cellekulturteknikker erstattet plommesekken for kultur og isolering av organismen fra kliniske prøver. NAAT er minst 20-30 prosent mer følsom (i stand til å oppdage så lite som en enkelt genkopi) og 100 prosent spesifikk 49, 50. Det gir mulighet til å bruke ikke-invasive prøver som urin til å skjerme for infeksjoner hos asymptomatiske personer som vanligvis ikke ville søke klinisk behandling. Dette er en kritisk fordel, siden flertallet av klamydialinfeksjoner hos kvinner og en betydelig andel infeksjoner hos menn er asymptomatiske. DEN mest kjente AV DNA-forsterkningsteknologiene er PCR. PCR kan være slekt, art, gruppe, eller stamme bestemt avhengig av primer design. Gener målrettet for diagnose Av c. trachomatis er MOMP-genet, det endogene plasmidet, fosfolipase-genet OG 16s og 23s rRNA-genet. Siden alle nukleinsyreforsterkningsteknologier oppdager nukleinsyremål, er disse ikke avhengige av enten levedyktighet eller en intakt tilstand av målorganismen for et positivt resultat. Derfor er transport av prøve ikke et kritisk problem49. Selv om det ikke er godt studert, ser «vinduet» for den kulturnegative, PCR-positive tilstanden etter behandling med doksycyklin ut til å vare opp til 3 wk29. Etter denne tiden blir pasientprøver både kultur og PCR-negative.

PCR-testen for påvisning Av C. trachomatis utviklet Av Roche Diagnostics, Basel Sveits (Roche-Amplicor) Var Den første PCR-testen som ble godkjent AV FDA I Usa51. Siden 1993 Har Amplicor PCR blitt relativt godt evaluert for både urogenitale og urinprøver, med en samlet følsomhet og spesifisitet på 90 og 99 til 100 prosent, respektivt51. Amplicor PCR er godkjent for cervical, mannlig urethral og mannlige urinprøver.med eksplosjonen av molekylærbiologi teknikker nyere analyser som m2000 system (Abbott) samt strand-forskyvning amplification (sda) (Bd ProbeTec strand forskyvning amplification utviklet Av Becton Dickinson and Company, Diagnostic Systems, Franklin Lakes, Nj) og transkripsjon-mediert amplification (TMA) (APTIMA system Av Gen-Probe, Inc., San Diego) ble tilgjengelig For C. trachomatis. Selv om de er populære i de utviklede landene, hindrer deres høye start – og vedlikeholdskostnader deres bruk i ressursfattige innstillinger.

byrden Av C. trachomatis organismer i kjønnsorganet (klamydial belastning) kan detekteres ved kvantitativ sanntids PCR og kan variere fra 10 til over en million organismer/ml kjønnsveiesekretjoner52. Dette vil trolig påvirke ytelsen til forskjellige nukleinsyreforsterkningstester, som ikke rutinemessig skiller mellom personer med høy og lav klamydialast. Forskjeller i klamydial belastning er rapportert å være forbundet med tilstedeværelse av kliniske symptomer, overførbarhet og varighet av infeksjon, og risikoen for å utvikle kronisk følgelighet53. Derfor er det en kritisk rolle kvantifisering i diagnose og behandling av klamydialinfeksjoner.

NAATs Er de mest sensitive tester for screening og diagnose av klamydial-og gonokokkinfeksjoner i kjønnsorganene54, 55, 56. Imidlertid rapporteres tvil om deres ytelse i lav prevalens områder57, 58. I 2002 ANBEFALTE CDC å bekrefte alle positive NAATs for C. trachomatis når den positive prediktive verdien av testen er < 90 prosent59. IMIDLERTID er DE sanne spesifikkene TIL NAAT-metodene funnet å være > 99 prosent54, 55.CDC har også foreslått flere mulige strategier for bekreftelse59 som inkluderer (i) testing av en annen prøve med EN ANNEN NAAT som har lik eller høyere følsomhet for den første testen, (ii) å utføre en ANNEN NAAT som har lik ELLER høyere følsomhet for den første testen rettet mot en annen nukleinsyresekvens på den opprinnelige prøven, (iii) gjenta den opprinnelige testen på den opprinnelige prøven, og (iv) bringe pasienten tilbake for en retest.begrensningene som er beskrevet er imidlertid at de fleste klinikere ikke vil samle inn to prøver for samme evaluering, og det er heller ikke mulig å bringe pasienten tilbake for å samle inn en annen prøve, og de fleste laboratorier har ikke fasiliteter / evne til å utføre to Forskjellige NAATs.

konseptet med bekreftende testing er ikke nytt57. Men; det kompliserer håndteringen AV EN NAAT positiv prøve og legger kostnader til en allerede dyr screening test. Det er også fortsatt rom for å forbedre Følsomheten Til NAATs, kanskje ved bedre prøvepreparering, automatisering eller målkonsentrasjon.

(ii) Ikke-spesifikke tester

Leukocyttesterase (LE) test er en rask peilepinne test for bruk med urinprøver. Denne testen er utformet for å oppdage urinveisinfeksjoner ved å oppdage enzymet produsert av polymorfonukleære (pmn) celler. Positive LE testresultater oppstår med infeksjoner forårsaket av En rekke forskjellige midler, inkludert C. trachomatis og n. gonorrhoeae.

følsomheten TIL le-testen for påvisning Av c. trachomatis-infeksjon varierer mye fra 31 til 100 prosent, og spesifisiteten varierer fra 83 til 100 prosent60. LE-testen har blitt ansett som den beste screeningstesten for unge menn, og ifølge de fleste rapporter bør DEN ikke brukes til testing av prøver fra kvinner eller eldre menn på grunn av utilfredsstillende ytelse.

(iii) Rapid point of care (POC) tester

Rapid tester, også kalt «point-of-care» tester For C. trachomatis benytter EIA teknologi i formater basert primært på membran fangst eller latex immunodiffusjon. Raske tester utføres i legens kontorer, krever ikke avansert utstyr,og kan være ferdig i ca 30 min. Resultatene leses visuelt og er dermed kvalitative. Selv om flere sett er kommersielt tilgjengelige, men ingen har blitt godt vurdert. Generelt er de raske testene betydelig mindre følsomme og spesifikke enn laboratorieutførte EIAs. Sammenlignet MED PCR, sensitiviteten og spesifisiteten Av Clearview test (Unipath Ltd., UK) var henholdsvis 53,8 og 99,1 prosent med endocervikale swabprøver, og 31,1 og 95,2 prosent med vaginale swabprøver fra Filippinske kvinner61. De raske testene gir en fordel i forhold til konvensjonelle laboratorietester bare når resultatene kreves umiddelbart for pasientbehandling. Hurtigtester bør ikke brukes i en populasjon med lav prevalens eller for asymptomatiske individer på grunn av muligheten for falske positive resultater. Resultatene av en hurtigtest bør alltid betraktes som presumptive, og hvis de er positive, bør de bekreftes av en laboratorieprøve.til slutt, selv om kulturen er 100 prosent spesifikk, kan den estimerte følsomheten være så lav som 50 prosent. Flertallet av laboratorier har flyttet bort fra kultur på grunn av utgifter involvert, tid og tekniske problemer. Således, i stedet for kultur som en diagnostisk gullstandard, anses den utvidede gullstandarden/definerte referansestandarden, dvs. vanlig konsistent resultat med to ikke-kulturteknikker å være nyttig som forskningsverktøy43.

(iv) Serologi

de serologiske testene er generelt ikke nyttige ved diagnostisering av genital veisinfeksjoner forårsaket Av C. trachomatis. Antistoffer fremkalt Av C. trachomatis infeksjon er lang levetid og en positiv antistofftest vil ikke skille en tidligere fra en nåværende infeksjon.