Nissl-farging

Kjerner og nissl-legemer (grovt endoplasmatisk retikulum) er farget blålilla med cresylviolett.

Nissl-farging brukes Til Klü-Barrera (KB) – farging.

• Fargeprosedyre
• Viktige hensyn til differensiering

Fargeprosedyre

1	Deparaffinisering	Xylen	3 endringer, 10 minutter hver
2	Fjerning av xylen	100% etanol	3 endringer, 5 minutter hver
3	hydrering	95%, 70% etanol	5 minutter hver
4	vaskingtd 2 minutter
5	skylling	destillert vann
6	Farging	0,1% cresyl fiolett løsning	10 minutter, 37℃
7	Differensiering	95% etanol + noen få dråper 10% eddiksyreoppløsning	omtrent 5 til 10 minutter. Forsiktighet bør utvises for ikke å overdifferensiere siden avfarging vil fortsette i følgende trinn.
8	Differensiering	95%, 100% etanol	Omtrent 1 minutt hver. Differensiere til bare kjerner og nissl organer er blå lilla.
9	Mikroskopisk sjekk	steptionary & ② kan gjentas hvis mer differensiering er nødvendig.
10	Dehydrering	100% ehtanol	2 endringer, 5 minutter hver
11	Clearing	Xylen	3 endringer, 10 minutter hver
12	dekkslipping

0.1% cresyl fiolett vandig løsning (Filter før bruk)

cresyl fiolett

1g

destillert vann

1000ml

pH av cresyl fiolett

fargemetoden varierer avhengig av ph i fargeløsningen. Ved en pH nær 3,0 er Bare Nissl-kroppene, nukleolene og kjernemembranene farget lyseblå. Glialcellekjerner er bare svært lite farget. Etter hvert som pH øker, blir fargen mørkere generelt, og cytoplasma av nerveceller, nervefibre og glialceller er samfarget. Co-farging intensiverer nær en pH på 4,0. Derfor er det nødvendig med en lengre differensieringstid.

pH3.0
• 
  pH4.7

Typer cresylviolett

Tre typer cresylviolett brukes For Tiden I Laboratoriet For Nevropatologi.

produktnavn produsent tilgjengelighet EM SCIENCE utsolgt SIGMA

/td>

tilgjengelig kommersielt cresyl violet (acetat) merck tilgjengelig kommersielt

differensieringstiden varierer avhengig av cresylviolettproduktet

fargeløsningens ph varierer avhengig av produktet. Derfor er fargemetodene også forskjellige. Det er viktig å være oppmerksom på at tiden som kreves for differensiering, varierer mellom produkter. Uansett hvilket produkt som brukes, kan det samme fargete kromatiske bildet til slutt oppnås gjennom differensiering og observasjon av prøven under et mikroskop.

produktnavn produsent pH på 0,1% cresyl fiolett løsning Differensieringstid i 95% etanol Cresyl Fiolett Acetat EM VITENSKAP 3.5 i 10 til 30 sekunder SIGMA 4,7 10min omtrent td> 10min omtrent

※ ph kan justeres FRA 3,5 til omtrent 3,8 ved å tilsette en passende mengde 10% eddiksyre til sigma-og merck-fargeløsningene, noe Som vil forkorte tiden som trengs for differensiering med 95% etanol. Det anbefales imidlertid ikke å gjenbruke denne løsningen.

Viktige hensyn til differensiering

Utfør differensiering til bakgrunnen blir hvit. Å ha nukleolene og kjernemembranene i nervecellekjernene klare og kromatin svakt farget er ideelt.

Cresylviolettacetat (Sigma C5042) pH4.7 ble brukt i begge seksjonene.

Venstre bilde: 95% etanol differensiering i bare 10 sekunder. Med utilstrekkelig differensiering er hele nervecellen farget blå, noe som gjør det umulig å identifisere kjernen og Nissl-kroppene.

høyre fotografi: 95% etanol differensiering i 10 minutter. Tilstrekkelig differensiering gjør at kjernene og Nissl-kroppene av nevroner kan differensieres tydelig.