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診断

臨床診断：クラミジア感染に罹患している患者の臨床像は、感染した女性の70-80％、感染した男性の50％が無症候性であるため、誤解を招く可能性がある。 通常、複雑でないクラミジアの伝染の女性はpruritisなしで無臭の、ムコイドのおり分泌物と示します。 尿道が関与している場合、頻度または緊急性のない排尿障害が訴えられる。 さらに，ＰＩＤでは，高熱，排尿困難，長期間の月経周期および硬膜間出血を伴う重度の腹痛の既往が惹起され得る。 検査では、黄色、曇り、ムコイド排出を伴う子宮頸管炎がosから見ることができる。 子宮頸部は、へらやブラシで掻き取ると簡単に出血する傾向があります。 尿検査では、尿道炎を示唆する>5WBC/HPF（高出力フィールド）の存在が明らかになります13。 クラミジア感染症は、臨床的に他の尿道感染症と区別することはできません。 アミン検定（、腟の分泌へのKOHの付加の重要な臭気解放）は他のより低い生殖地域の伝染からのクラミジアの伝染を区別するのを助けることができますが、低い特

男性のクラミジア感染は、罹患者の15-55％が35歳以下で尿道炎として現れ、時には精巣上体炎が見られることがある2。 軽度から中等度の透明から白色の尿道排出は、患者が空隙を形成する前の午前中に見られる。 精巣上体炎では，陰嚢紅斑を伴う片側性精巣痛の既往，精巣上体に対する圧痛または腫脹が惹起されることがある。 診断は、グラム染色で>5WBC/HPFを示す陰茎からの粘液膿性排出の存在および細胞内グラム陰性二倍球菌の欠如によって確立すること ライター症候群は未治療のクラミジア感染症のまれな合併症である可能性があります。 ライター症候群では、女性の尿道炎/子宮頸管炎のトライアド、関節炎、手のひらと足の裏の痛みのない粘液膿性の噴火を含む反応性関節炎が見られる29。 女性は男性よりも一般的に影響を受けます。 下肢には非対称的な複数の関節関与があり、好みがある。

検査室診断：病気の無症候性の性質とc.trachomatisによって引き起こされる感染の増加スペクトルは、敏感で信頼性の高い検査法の必要性を強調しています。

検体の収集と輸送の熟練度は、診断試験の精度にとって最も重要です。 C.trachomatisの診断試験の感度と特異性の両方が、標本の妥当性に直接関連していることが示されている。 クラミジアは、特に生物の直接可視化を含む技術では、偏性細胞内病原体であるため、生物を収容する宿主細胞は標本収集に含める必要があります。

サンプリング部位の選択は、病原体を回復する可能性に影響を与える可能性がある。 生殖管からのc.trachomatisの回復の10-20パーセントの増加は頚部サンプリングだけと比較して頚部およびurethral標本が取られれば観察されました42。 Endocervical綿棒、腟/introital綿棒、外陰部の綿棒、またurethralおよび直腸の綿棒および最初捕獲物の尿は女性の患者から取られる共通のサンプルです。 尿道および直腸の綿棒および最初捕獲物の尿サンプルはまたprostatic液体のような他の特定のサンプルに加えて男性の患者から集めることができます。

標本のコレクションそして輸送の品質保証:標本の妥当性は顕微鏡検査の間にsquamo柱状細胞の視覚化によって定めることができます。 スライドごとに1つの柱状/化生細胞が含まれている場合、標本は適切であると考えられます。 分離の可能性は標本が2-8°c.のコレクションの直後に冷やされていれば最大限に活用されるサンプルコレクションと処理間の時間は理想的に48hよりより少しべきであるそれが可能でなければこれらは-70°cでプロセスされるまで凍らせるかもしれない16。 胎児の牛のような血清（2-5%）は凍結する標本のchlamydiaeの実行可能性の維持を助けます。 2モルのスクロースの隣酸塩（2MSP）またはスクロースのグルタミン酸塩の隣酸塩は最も一般的な輸送媒体です。 培養およびいくつかの非培養試験のための合成輸送媒体が開発され、診断用に承認されている、すなわち、M4輸送媒体、Flex Trans媒体および新しいM4合成/

クラミジアの検査室診断は、以下の方法で構成されています：

（i）特定の試験

細胞培養：生物の単離は、クラミジア感染の診断のための決定的な方 クラミジアは偏性の細胞内病原体であり、したがって、培養のために胚発生鶏卵または動物細胞株を必要とする。 このような培養法は、技術的に困難であり、労働集約的であり、面倒で高価であり、一般的な臨床検査室で行われるルーチン検査として広く採用されてい しかし、三つのin vitroシステムは、クラミジアすなわちの培養のために使用されています。 マウス接種（腹腔内、頭蓋内および静脈内）、卵黄嚢接種（7-8日齢のニワトリ胚卵黄嚢接種）および細胞培養ライン16。 最も一般的に使用される細胞株には、Ｈｅｌａ２ ２ ９細胞、Ｍｃｃｏｙ細胞、ＢＨＫ２ １およびＢＧＭＫ細胞２ ４が含まれる。

クラミジアの単離のための細胞培養の感度は、ポリカーション、DEAE-デキストランスによる細胞の前処理、細胞単層への接種物の遠心分離、およびサイクロヘキシミドまたはシトカラシンBなどの抗代謝産物の細胞培養培地への取り込み42によって増強される。 C.trachomatisの培養のための細胞単分子層は、ガラスカバースリップ上のドラムまたはシェルバイアルまたはmultiwell細胞培養皿の井戸で栽培されています。 シェルバイアル法は、交差汚染の可能性が少ないため、マルチウェル細胞培養よりも臨床検体に対してより敏感である42。 接種の前に、標本は宿主細胞を破壊し、クラミジア封入体を分離するために超音波処理されるべきである。 細胞培養物に接種するためには、上になる培養基は単層をカバーし、乾燥を防ぐために培養輸送媒体の標本の十分と取除かれ、取り替えられるべきです。

最も一般的に使用される成長培地は、アミノ酸およびビタミン、胎児の子牛血清（5-10）、余分なグルコース（0.056m）および2-グルタミン酸42を補充したイーグルス最小必須培地（EMEM）である。 接種後、培養物を３ ７℃で２〜３日間インキュベートする。 その後、クラミジア封入体を免疫蛍光染色により観察する。 単離の感度は、実験室および使用される培養系に応じて70-85パーセントの範囲に示されている。 伝統的に、これはC.trachomatisの診断のための”金本位”100パーセントのspecific42であるのでである。 残念ながら、それは技術的な要求、労働の強度および高い費用によるほとんどの私用および公共の実験室の機能を越えてある。

直接蛍光テスト（DFA）: DFAテストは標本の検査を指示するために汚れるクラミジアの特定の抗体のかなりの利点を加え、最も有用な診断技術の1つに残ります。 この試験では，ＭＯＭＰまたは属特異的ＬＰＳに対するフラウレセインイソチオシネート共役モノクローナル抗体（ＦＩＴＣ-Ｍａｂ）を用いた塗抹標本中の素体の迅速な同定を用いた。 素体は明瞭で鋭く輪郭を描かれたリンゴグリーンの円盤状（300nm）の粒子として現れ、網状体は蛍光ハローを持つ素体の約三倍の大きさで現れる。

この手順は、ベッド側スミアが準備され、その後処理のために輸送されるため、試料輸送のための厳しい条件を必要としません。 C.trachomatisのMOMPを使用すると、DFAの感度および特異性は、文化に関してそれぞれ80〜90％および98〜99％であることが見出される43。 DFAの高い特異性は、クラミジア介在物の特徴的な形態および染色特性の可視化への依存性に起因する。 DFAは、塗抹標本中に存在する上皮細胞の可視化によって標本の妥当性を同時に評価することを可能にする唯一の診断試験である。 それは急速、簡単（応答時間約30分）であるが、結果の顕微鏡検査そして解釈は専門知識を要求する。 従ってこの方法は少量の実験室のために推薦される。 このテストはまたextragenital場所に適用することができます。 これは、子宮内膜または卵管標本におけるクラミジアの検出のための培養よりも敏感であることが報告されている42。

ELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）: ELISAはC.trachomatisの抗原の検出のために利用できます。 いくつかの市販のＥＬＩＳＡキットがその目的のために入手可能である。 これらのほとんどは、MOMPよりも可溶性であるクラミジアLPSを検出する。 酵素イムノアッセイ（EIA）試験は、細胞培養と比較して62〜96％の感度および86〜99％の特異性を有することが報告されている44。 このテストは細胞培養へのアクセスなしで実験室のために適している。 しかし、インドを含む世界中のさまざまな大規模および小規模の研究では、DFAおよびPCR45、46、47と比較してELISAの感度が低いことが報告されている。

細胞診：細胞診は簡単に利用可能で、使いやすく、費用対効果の高い診断テストです。 それは標本の貯蔵および輸送のための注意を要求しないし、非実行可能な/非伝染性の粒子はまた検出することができる。 臨床標本の質は顕微鏡の技術によって査定することができ、これらのテストで使用される技術的なプロシージャは通常培養より行い速く、簡単です。 Giemsa、免疫蛍光およびヨウ素染色法が最も一般的に使用されている。 免疫ペルオキシダーゼ、免疫フェリチン、May Grunwald、Giemenez、Macchiavelloおよびacridine orangeのような他の汚れはまた剥離された細胞でクラミジアの包含を検出するために使用することがで 細胞質内封入体の存在は、新生児のクラミジア眼感染症の病理学的なものであるが、この方法は、感受性の欠如のために成人の結膜炎または生殖器感染症の診断には推奨されない。 三つの方法のうち、免疫蛍光は最高の感度を提供し、次いでギムザ、次いでヨウ素染色42を提供する。

分子法: 診断の従来の方法に低い感受性、長いテストの時間および高い費用を含んでいる複数の限定があります。 したがって、DNAおよびRNA配列の直接認識に基づく試験が考案されている。 クラミジアの検出のための市販されているDNAの調査はENDOCERVICALおよびurethral標本のC.trachomatisのR-RNAの特定の部分の検出のための非同位体DNAの調査のNeisseria淋病をまた検出することができるPACE2テスト（調査の試金のChemiluminescence高められる）48である。 別のDNAプローブであるPACE2Cテストも開発されており、単一の標本からC.trachomatisとn.gonorrhoeaeの両方を同時に検出していますが、診断に使用する前にPACE2Cのさらなる評価が必要です。 これらの試験は、クラミジア16S rRNAの種特異的配列にハイブリダイズ化学発光DNAプローブを採用しています。 DNA-rRNAハイブリッドが形成されると、それは磁気ビーズ上に吸着され、化学発光応答はルミノメーターで定量的に検出される。 積極的に分裂クラミジアは104s rRNAのコピーまで含まれているので、ペース2テストは理論的には抗原検出システムよりも敏感でなければなりません。 DNA増幅標準に対するPACE2の感度はまだ十分に評価されていないが、ある研究では77-93パーセントであることが報告されている48。

核酸増幅技術（NAAT）に基づく試験の開発は、in vitro細胞培養技術が臨床標本からの生物の培養および単離のための卵黄嚢に取って代わって以来、クラミジア診断の分野で最も重要な進歩となっている。 NAATは、少なくとも20-30パーセントより感度が高く（単一の遺伝子コピーと同じくらい少ない検出が可能）、100パーセント特異的である49,50。 それは通常臨床心配を追求しない無症候性の個人の伝染のために選別するのに尿のような非侵襲的なサンプルを使用する機会を提供します。 これは、女性のクラミジア感染症の大部分および男性の感染症のかなりの割合が無症候性であるため、重要な利点である。 ＤＮＡ増幅技術の中で最も広く知られているものはＰＣＲである。 ＰＣＲは、プライマーの設計に応じて、属、種、群、または株特異的であり得る。 C.trachomatisの診断のために目標とされる遺伝子はMOMPの遺伝子、内因性プラスミド、ホスホリパーゼの遺伝子および16Sおよび23S rRNAの遺伝子です。 すべての核酸増幅技術は核酸標的を検出するので、これらは、陽性の結果を得るために標的生物の生存率または無傷の状態のいずれにも依存しない。 したがって、サンプルの輸送は重要な問題ではない49。 それが十分に調査されなかったが、doxycyclineとの療法の後の文化否定的な、PCRの肯定的な状態のための”窓”は3wk29まで持続するようです。 この時間の後で、忍耐強い標本は文化およびPCRの陰性に両方なります。

Cの検出のためのPCRテスト。 roche-Amplicor(Roche-Amplicor)によって開発されたtrachomatisは、米国でFDAによって承認された最初のPCR試験であった51。 1993年以来、Amplicor PCRは泌尿生殖器および尿検体の両方について比較的よく評価されており、全体的な感度および特異性はそれぞれ90および99から100パーセントである51。 Amplicor PCRは頚部、男性のurethralおよび男性の尿検体のために承認されます。分子生物学技術の爆発により、ｍ２ ０ ０ ０システム（Ａｂｂｏｔｔ）、ならびに鎖変位増幅（ＳＤＡ）（ＢＥＣＴＯＮ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，Ｎｊにより開発されたＢ Ｄ Ｐｒｏｂｅｔｅｃ ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）および転写媒介増幅（ＴＭＡ）（ＧＥＮ−Ｐｒｏｂｅ，ＩｎｃによるＡＰＴＩＭＡ ｓｙｓｔｅｍ。、サンディエゴ）はC.trachomatisのために利用できるようになりました。 先進国で普及したが、高い最初および維持費は資源悪い設定の使用を防ぐ。

Cの負担。 生殖管内のトラコマチス生物（クラミジア負荷）は、定量的リアルタイムPCRによって検出することができ、生殖管分泌物の10から百万以上の生物/mlまで変化 これは、クラミジア負荷が高い人と低い人を日常的に区別しない、異なる核酸増幅試験の性能に影響を与える可能性があります。 クラミジア負荷の違いは、臨床症状の存在、感染の伝達性および持続性、および慢性後遺症を発症するリスクと関連していることが報告されている53。 したがって、クラミジア感染症の診断と治療における定量化の重要な役割があります。

NAATsは、性器のクラミジア感染症および淋菌感染症のスクリーニングおよび診断のための最も敏感な検査である54,55,56。 しかし、有病率の低い地域での性能に関する疑問が報告されている57,58。 2002年、CDCは、テストの陽性予測値が<90%である場合、C.trachomatisのすべての陽性Naatを確認することを推奨しました59。 しかし、NAATメソッドの真の特異性は>99percent54,55であることがわかります。

CDCはまた、確認のためのいくつかの可能な戦略を提案しています59これには、(i)最初の試験と同等またはそれ以上の感度を有する異なるNAATを有する第二の試験、(ii)元の試験片上の異なる核酸配列を標的とする第一の試験と同等またはそれ以上の感度を有する異なるNAATを行う、(iii)元の試験片上で元の試験を繰り返す、および(iv)再試験のために患者を戻すことが含まれる。

しかし、記載されている制限は、ほとんどの臨床医が同じ評価のために二つのサンプルを収集しないこと、また別のサンプルを収集するために患者を戻すことが可能であり、ほとんどの実験室は二つの異なるNaatを実行する施設/能力を持っていないことである。

確認テストの概念は新しいものではありません57。 但し;それはNAATの肯定的なサンプルの処理を複雑にし、既に高いスクリーニングテストに費用を加える。 また、おそらくより良い試料調製、自動化、または目標濃度によって、NAATsの感度を改善する余地がまだあります。（ii）非特異的試験白血球エステラーゼ（LE）試験は、尿検体との使用のための急速な計深器試験である。

（ii）非特異的試験

白血球エステラーゼ（LE）試験は、尿検体との使用のための急速な計深器試験である。 このテストは多形核（PMN）細胞によって作り出される酵素の検出によって尿路感染症を検出するように設計されています。 肯定的なLEの試験結果はC.trachomatisおよびN.の淋病を含むいくつかの異なった代理店によって引き起こされる伝染と起こります。

c.trachomatis感染の検出に対するLEテストの感度は31から100パーセントまで広く変化し、特異性は83から100パーセント60の範囲である。 LEテストは青年の男性のための最もよいスクリーニングテストとして考慮され、ほとんどのレポートに従って、不満足な性能による女性か高齢者からの

(iii)迅速なケアポイント(POC)テスト

また、C.trachomatisのための”ポイント*オブ*ケア”テストと呼ばれる迅速なテストは、主に膜捕捉またはラテックス免疫拡散 急速なテストは医者のオフィスで行われ、洗練された装置を要求しないし、そして約30分に完了することができる。 結果は視覚的に読み取られ、したがって定性的である。 いくつかのキットが市販されていますが、どれもよく評価されていません。 一般に、急速なテストは実験室行われたEIAsよりかなりより少なく敏感、特定です。 PCRと比較して、Clearviewテストの感度と特異性（Unipath Ltd.、英国）は、それぞれ53.8と99.1パーセントであり、子宮頸部スワブ標本であり、31.1と95.2パーセントはフィリピン人女性から膣スワブ標本であった61。 急速なテストは結果が忍耐強い管理にすぐに要求されるときだけ慣習的な実験室試験上の利点を提供する。 急速なテストは偽陽性の結果のために潜在性による低流行の人口またはasymptomatic個人で使用されるべきではないです。 迅速な試験の結果は常に推定とみなされ、陽性であれば、実験室で実施された試験によって確認されるべきである。結論として、文化は100パーセント特異的であるが、その推定感度は50パーセントと低くなる可能性がある。

結論として、文化は100パーセント特異的であるが、その推定感度は50パーセントと低くなる可能性がある。 実験室の大半は含まれる費用、時間および技術的な難しさのために文化から動いた。 したがって、診断金本位制としての培養の代わりに、拡張金本位制/定義された参照標準、すなわち、二つの非培養技術と一般的に一貫した結果は、研究ツール43として有用であると考えられている。

(iv)血清学

血清学的検査は、一般的にc.trachomatisによって引き起こされる生殖器感染症の診断には有用ではない。 Cによって誘発される抗体。 trachomatisの伝染は長く住んでいて、肯定的な抗体テストは現在の伝染と前を区別しません。