HPLCを実施

導入

高速液体クロマトグラフィーは、基本的にカラムクロマトグラフィーの高度に改良された形 重力の下でコラムを通って滴るようにされる溶媒の代りにそれは400まで大気の高圧の下で強制される。 それはそれをはるかに高速にします。

また、固定相とそれを過ぎて流れる分子との間の相互作用のためにはるかに大きな表面積を与えるカラム充填材料のための非常に小さい粒 これにより、混合物の成分のはるかに良好な分離が可能になる。

カラムクロマトグラフィー上の他の主要な改善は、使用することができる検出方法に関係しています。 これらの方法は非常に自動化され、非常に敏感です。カラムと溶媒

紛らわしいことに、溶媒と固定相の相対極性に応じてHPLCで使用されている二つの変異体があります。

カラムと溶媒

紛らわしいことに、hplcで使用されている二つの変異体があります。

通常相HPLC

これは、薄層クロマトグラフィーまたはカラムクロマトグラフィーですでに読んでいるのと本質的に同じです。 それは「通常」と記載されていますが、それはHPLCの最も一般的に使用される形態ではありません。

カラムには小さなシリカ粒子が充填されており、溶媒は非極性ヘキサンなどです。 典型的なカラムの内径は4.6mm（それより小さい場合もあります）、長さは150-250mmです。

カラムを通過する混合物中の極性化合物は、非極性化合物よりも極性シリカに長く付着します。 したがって、非極性のものは、列をより迅速に通過します。

逆相HPLC

この場合、カラムのサイズは同じですが、シリカは、その表面に長い炭化水素鎖を結合することによって非極性にするように修飾されています-典型的には8または18個の炭素原子のいずれかを含む。 極性溶媒、例えば、水とメタノールのようなアルコールとの混合物が使用される。この場合、カラムを通過する混合物中の極性溶媒と極性分子との間に強い引力が存在する。

この場合、極性溶媒と極性分子との間に強い引力 シリカ（固定相）に結合した炭化水素鎖と溶液中の極性分子との間にはあまり魅力がありません。 したがって、混合物中の極性分子は、溶媒と共に移動する時間の大部分を過ごすことになる。混合物中の非極性化合物は、ファンデルワールス分散力のために炭化水素基と引力を形成する傾向がある。

混合物中の非極性化合物は、炭化水素基と引力を形成する傾向がある。 それらはまた、例えば、水またはメタノール分子の間で圧搾される際に水素結合を破壊する必要があるため、溶媒中での溶解性も低下する。 従ってそれらは溶媒の解決のより少ない時間を使い、これはコラムを通って方法でそれらを遅らせる。

それは今、カラムをより迅速に移動する極性分子であることを意味します。

これは、極性分子がカラムをより迅速に移動することを意味し逆相HPLCは、HPLCの最も一般的に使用される形態である。