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イノシシ(Sus scrofa scrofa)精細管形態測定

ヒトおよび動物の健康

イノシシ(Sus scrofa scrofa)精細管形態測定

Deiler Sampaio CostaI,*;José Frederico Straggiotti SilvaII

ILaboratório de Saúde Animal;[email protected]
Iilaboratório of Reprodução Animal,Universidade Estadual do Norte Fluminense;Avenida Alberto Lamego,2000;28013-600;Campos dos Goytacazes-RJ-Brazil

ABSTRACT

このデータの目的は、成体のイノシシにおける精細管の形態と機能を分析することでした。 五つの動物の片側去勢によって除去された精巣を用いた。 精巣実質は、精細管の82.1±2.2%および管間組織の17.9±2.2%によって構成されていた。 管状の直径は249.2±33.0μ mであり、精巣のグラムあたりの精細管の長さは19.3±4.9mであった。 各セルトリ細胞は約13胚細胞をサポートしていました。 研究されたヒステメトリックパラメータは国内のイノシシに関連するものと非常に類似していたが、野生のイノシシの精子形成およびSertoli細胞指数は国内のイノシシよりも小さかった。

キーワード:精細管、イノシシ、Sus scrofa scrofa

要約

Objectivou-se com esta pesquisa estudar as características morphometricas e funcionais dos tubulos seminiferos de javalis adultos。 片側精巣切除に提出した五匹の動物の精巣を用いた。 精巣実質は82.1±2.2%の精細管と17.9±2.2%の管間組織で構成されていた。 管状の直径は249.2±33.0μ mであり、精巣のグラム当たりの精細管の長さは19.3±4.9mであった。精母有糸分裂の効率係数、減数分裂収量および精子形成の全収率は、それぞれ10.34、2.71および30.50であった。 各セルトリ細胞は約13の生殖細胞をサポートしていました。 本研究で研究した組織測定パラメータは家畜ブタで報告された値と非常に類似していたが,野生イノシシの精子形成の固有収量およびSertoli細胞の指標はそれらの動物と比較して比較的低いと結論した。

はじめに

精子形成は、性的に成熟した動物の精細管内で起こる組織化された複雑なプロセスです。 これは、増殖期、減数分裂期および分化期の3つの異なる段階に分けられる。 精子形成の一般的な組織はすべての哺乳類で類似しているが、精巣実質成分、精原体世代の数、精細管の細胞集団、精子の毎日の生産、Sertoli細胞速度および一般的な精子形成収量によって占有される体積割合として種の間で特定の特徴がある(França and Russell、1998)。

野生のイノシシ(Sus scrofa scrofa)は、もともとユーラシアとアフリカ大陸の大部分に広がっていた非国内の豚です。 ヨーロッパとフィリピンの大陸諸島にもこの種の豊富な人口がありました(Nowak、1999)。 人間の行動を通じて、野生のイノシシは栄養価とその肉のかなりの味のために他の大陸に拡散しました。 南アメリカでの正確な入り口はよく知られていません。 しかし、この種はアルゼンチンの自然条件によく適応し、大きな人口を形成していることが知られています。 この最初の生息地から、野生のイノシシはチリ、ブラジル、またウルグアイの南まで広がっている(Ciluzzo et al., 2001). ブラジルでのこの豚の商業生産は、リオグランデ-ド-スル州の農家が動物園とアルゼンチンから動物を買収して地元の市場で販売した1980年代に開始された。 消費者の肉の受け入れが大きくなると、生産は激化し、全国に広がった(Gimenez、2001)。 このように、1990年代の間に、リオグランデ-ド-スル州からの動物で、サンパウロ州の最初の農場が開始されました。 現在、これらの州は国内最大のイノシシ肉生産国であり、ミナスジェライス州、パラナ州、エスピリト-サント州、マト-グロッソ州、マト-グロッソ-ド-スル州は消費者市場ではまだ控えめな貢献をしている。

国内のイノシシは、その起源と品種とは無関係に2n=38の染色体を持ち、ヨーロッパの野生のイノシシは2n=36の染色体を持っています(Darre et al., 1992). ヨーロッパの野生のイノシシが国内のイノシシと同じ種に属しているという事実は、これらの亜種が種の正常な繁殖力を持つ雑種を交配させるこ, 2001; Gimenez、2001)とハイブリッド表現型は、純粋な動物の同定の間違いを可能にすることを、彼らの動物の動物工学指標を強化する方法として、この交雑繁殖を実 しかし、この種の結合を行うと、国内の豚のより良い成長条件を利用する意図であっても、独特の感覚刺激特性を示す肉を有する動物を作り出す(松岡ら。, 1991).

野生のイノシシの商業的可能性は、主に最後の十年で検討されているが、その生殖生物学を含む研究はまだ不足しています。 しかし、イノシシの最初の分娩は13ヶ月で起こり、年間2-9回の授乳(平均4回のブタ)の変動があり、分娩間隔は約7ヶ月であることが知られている(Gimenez、2001)。 同じ研究では、家畜のイノシシは、これらの動物農場の最近の移植のために、人工的な選択の短い時間によって容易に説明される野生のイノシシよりも アルゼンチンでは、野生のイノシシの繁殖期は4月から5月に始まり、10月に終わることが知られています(Ciluzzo et al., 2001). ブラジルの農場では、この種の繁殖に季節的な影響は観察されていない。

この研究は、この種の男性の生殖生理学に関する情報がまだ不足していたので、野生のイノシシの精細管の形態学的および機能的特性を研究す

材料と方法

専門農場”Yacan do Alto Agronegócios Ltda”(閉じ込めシステム)からの五大人のヨーロッパの野生のイノシシ(12.6±0.9ヶ月)は、この作品で使用されました。 動物を秤量し、1で鎮静させた。定期的な技術として一方的な去勢の業積のための外科切り傷ラインの麻酔の浸潤に堤出される会陰および陰嚢の皮のantisepsisの後の0ml/20kg azaperoneおよび。 手術後すぐに、精巣をそれぞれの精巣上体から分離し、秤量し、精巣動脈を0.9%の生理食塩水で灌流のために缶詰にし、リットル当たり5,000UIヘパリンを室温で五分間投与した。 この精巣の直後に、リン酸緩衝液0.05M、pH7.2中のグルタルアルデヒド4%固定液を20分間再び灌流した。 精巣実質サンプル、1.0-3.0ミリメートルの厚さは、臓器capitata四肢、培地第三および尾状四肢から採取した。 コレクションは常にtunica albugineaの近くで作られました。 このような断片は、少なくとも一時間のリン酸緩衝液中の新しいグルタルアルデヒド4%溶液に浸漬することによって再固定され、後でそれらの組織学的処理まで4º Cで保存された。サンプルをアルコール(70、80、90、95および100%)中で30分ごとに変化させた。

サンプルをアルコール(70、80、90、95および100%)中で脱水した。

サンプルを30分ごとに この後、断片をグリコールメタクリレート溶液i(Leica Histresin Emdeding Kit−Leica Instruments)で2時間浸潤させ、次いで、それらをグリコールメタクリレート溶液I Iに移し、そこで1 2分間静置した。 次に、精巣断片を、ファブリカントの推奨として、触媒を添加して同じ樹脂中に含有した。 断片は、完全に乾燥するまでシリカゲルを含むボトル中に保持した。 ミクロトームのガラスかみそりを用いて四つのマイクロメートルの厚さのカットを行った。 切片は、通常の技術として、トルイジンブルーホウ酸ナトリウム1%で染色した。組織学的切片を、デジタルカメラを備えたNikon E−6 0 0顕微鏡で撮影し、Imagej1.3 3sソフトウェア(Wayne Rasband−National Institute o f Health,USA)で分析した。</p><p>組織学的切片を、nikon e−6 0 0顕微鏡で撮影し、Imagej 精細管の平均直径は、サイクルステージとは無関係に、各精巣測定における20の横断面の直径から得られた。 管状直径が得られた同じセクションでは、腔境界までの基底膜を考慮して、精細上皮高さも測定した。 それぞれの横断面から二つの音符を求め,両者の平均を代表的な測定値として考慮した。 精巣実質成分の体積率は、400ポイントグリッドを使用して推定された。 各動物では、15のフィールドをランダムに調べた。 精細管および管間組織を計算した。

精細管細胞集団は、精子形成系統の異なる細胞型核をカウントすることによって推定されました,精細上皮サイクルのステージ1におけるSertoli細胞核小体とし、尿細管形態システムに従って特徴付けられます(Berndtson and Desjardins,1974). 各細胞型(セルトリ細胞、精原細胞、精母細胞および精子細胞)は、サイクルのステージ1で少なくとも10尿細管横断セクションでカウントされました。 カウントは、平均核直径とカットの厚さについて、Amann(1962)によって修正されたAbercrombie(1946)の式を使用して修正されました。 Sertoli細胞は不規則な核を提示したので,この量の補正は平均核小体直径から行われた。

精子形成固有収量は、補正された細胞数の中で見つかった割合に基づいて決定された。 以下の比率が計算されました: 精原性有糸分裂効率係数(プレレプトテン/レプトテンにおける一次精母細胞の数と精母細胞Aの数との間の割合)、減数分裂指数(丸みを帯びた精母細胞の数とパキテン一次精母細胞の数との間の割合)、一般的な精子形成効率(丸みを帯びた精母細胞とa型精母細胞の数との間の割合)、減数分裂前期における細胞損失発生(プレレプトテン/レプトテンにおける一次精母細胞の数とパキテン一次精母細胞の数との間の割合精子細胞数)。

Sertoli細胞は、異なる精細上皮細胞型に関連して能力をサポートし、以下の細胞割合から評価した:精母細胞A/Sertoli細胞;プレレプトテン-レプトテン/Sertoli細胞における一次精母細胞(I);pachytene/Sertoli細胞における精母細胞I;丸みを帯びた精子細胞/Sertoli細胞;および総胚細胞/Sertoli細胞。 すべての割合は、サイクルのステージ1の細胞数を使用して計算された。すべてのデータを”Excel for Windows”ソフトウェアで分析し、得られた結果をSampaio(1998)に従って平均±標準偏差として表しました。

すべてのデータを”Excel for Windows”ソフトウェアで分析し、得られた結果をSampaio(1998)に従って平均±標準偏差として表しました。

結果と議論

動物の体重(表1)は、閉じ込めシステムで野生のイノシシと一緒に働いていたAlmeida(2002)によって関連する値よりも約38%小さかった。 このような違いは,いずれの場合も農場と年齢の間の摂食管理の違いによるものと考えられた。 野生のイノシシは、同様の年齢の特殊な品種の豚に比べてかなり軽量でした。 しかし、非専門的な品種が使用された場合、アフリカの豚として、約34kgの重量を量る(Okwun et al.、1996)、および42kgの平均を持つベトナムの豚(Evans And Ko、1990)、それは違いがそれほど発散していないことに気づいた。 本研究の動物における精巣重量(表1)は、Almeida(2002)によって関連するものよりも約三倍小さかった。 この差の一部は動物群間の体重差によって説明されると考えられた。 一方、同じ年齢の同一種の個体では、精巣重量に対して最大5 0%の差が観察されることが一般的である(Berndtson e t a l., 1987).

白癬菌と縦隔によって占められている精巣百分位は約9.5%であった(表1)。 精巣重量からこの百分位数を差し引くと、約18.5gが得られ、これは精巣実質重量に対応した。 この器官の密度は約1.04であったので、精巣重量は体積に直接変換された(Costa et al., 2004). したがって、動物精巣実質平均値は18.4±3.7mlと考えられた(表1)。

精巣実質成分の体積密度は種によって大きく変化したが、一般に、精細管が占める百分位数は、ほとんどの哺乳類で60-90%(Setchell、1982)であった。 このデータで見つかった値82.1±2.2%(表1)は、Almeida(2002)によって報告された値と非常に類似しており、国内のイノシシについて報告された値と同様であった(Okwun et al. ら,1 9 9 6,FransaおよびRussell,1 9 9 8)。

管状径の平均値および精細上皮の高さを表1に示す。 プラスチック樹脂による組織学的処理による精細管線形収縮因子は5%(Amann、1981)で推定された。 管状の直径の価値は羊水体(180から300μ m)のほとんどのために典型的考慮されました(Roosen-Runge、1977)。 この実験で得られた結果は、この平均(249.2±33.0μ m)に挿入され、性的に成熟したイノシシに関連する結果に非常に近いものであった(Godinho and Cardoso、1979、França、1991)。 通常、管状直径は、精巣機能を研究する際に精子形成活性指標として使用される。 非季節性動物の平均管状直径は、性的成熟後に有意な変化を受けない(França and Russell、1998)。 この期間の後の精巣のサイズの増加は、尿細管の長さの増加によるものであり、その直径によるものではない(Attal and Courot、1963)。

この実験で野生のイノシシのために見つかった精細上皮の高さ(67。5μ m)を家畜に関連する間隔に挿入し、60-100μ m(França and Russell、1998)を挿入し、イノシシについて報告されたものと非常に類似していた(Okwun et al., 1996). これは、それぞれの細胞会合が異なるにもかかわらず、異なる段階で精細上皮周期の間で変化しなかった(Wrobel et al., 1995).

精細管の全長は、精巣の重量および精細管の容積に依存するパラメータである。 従って、より大きい精巣の重量および同じような精細管の容積率の動物はより小さい精巣の重量とのそれらの明らかな利点があります。 したがって、異なる精巣重量の動物間の比較は意味をなさない。 したがって、精巣のグラム当たりの精細管の長さに精細管の全長を変換すると、これらの比較が可能になる。 一般に、ほとんどの哺乳動物は、精巣1グラムあたり約10〜20mの精細管を提示する(França and Russell、1998)。 したがって、ほぼ20メートルの野生のイノシシは、そのパラメータの最大値を持つ種の中にあります。

イノシシの精細管細胞集団を表2に示す。 細胞量は、異なる種間および同じ種の個体間でさえも総数を比較するために使用した場合、結果の大きな変動があったために修正された(Cardoso、1981)。 このような変化は、主に、異なる著者間で実行不可能な比較を行うことができる使用される方法論の違いによるものであった。 しかし、修正されても、得られた結果は、異なるサンプリング、年齢、品種および遺伝的選択などの他の要因も最終的な結果の計数に干渉する可能性があるため、指標となる傾向としてのみ考慮されるべきである(França、1991)。 精母細胞Aの数はPiausイノシシの報告と同様であったが(França、1991)、他の発芽細胞およびSertoli細胞の個体群は、国内のイノシシの品種のほとんどに見られる値よりも常に小さかった(Godinho and Cardoso、1979、Wettermann and Desjardins、1979、França、1991)。

哺乳類の精子形成プロセス効率を推定するために最も使用される形式は、サイクルのステージ1の横断セクションの細胞型間の数値比率からで したがって、細胞損失が起こる段階を特定し、それらを百分位単位で定量化することを可能にすることに加えて、同じ種の個体間および異なる種間の比較研究を行うことが可能である(Russell et al., 1990).

この目的では、四つのレートが一般的に使用されています: 精原性有糸分裂効率係数,減数分裂指数,精子形成効率および減数分裂前期の細胞損失発生。 本研究の動物で得られた結果を表3に示す。

精原有糸分裂効率係数は、ステージ1では、各精原a1がプレレプトテン/レプトテンにおける10.34精母細胞Iの形成に関与し、研究種精原 França and Russell(1998)によってレビューされたデータを分析すると、調査された動物のほとんどが六つの精母細胞分化世代(A1-4、InおよびBまたはA1-3、In、B1-2)を保有していたことが注目され、この場合、理論的には一つの精母細胞A1は、その段階の間に細胞損失がなければ、前レプトテン/レプトテンで64個の精母細胞Iを形成する。 馬やウサギのような種は、5つの精母分化世代(それぞれA1-3、B1-2およびA1-2、In1-2、B)を有する。 したがって、プレレプトテン/レプトテンの32精母細胞Iは、一つの精母細胞A1から形成されるであろう。

イノシシのプレレプトテン/レプトテンで理論的に予想される精母細胞I数が64細胞であったことを考慮すると、その種の精原分裂中のおおよその84%の損失が考慮された。 細胞損失の約60-80%は、プレレプトテン/レプトテンで理論的に予想される精母細胞I数に関連して、França and Russell(1998)によってレビューされたほとんどの論文の動物で見

減数分裂指数から始めて、pachyteneの1つの精母細胞Iが2を生成していたことが確認できました。71丸みを帯びた精子細胞は、精子形成効率が32.5%であった場合、予想される理論的割合(1:4)と比較したときに32.5%の損失に等しい。 同様の結果は、成体のイノシシ(França、1991)、およびいくつかの種の家畜(França and Russell、1998)に見出された。 この実験における動物における減数分裂前期の間の精母細胞I個体群は、哺乳類の大多数に関連して一定のままであった(BerndtsonおよびDesjardins、1974、GodinhoおよびCardoso、1979、BillaspuriおよびGuraya、1986)。

イノシシの精子形成効率は約12%であり、すなわち、一つの精原体Aはわずか30.5丸みを帯びた精子細胞を産生した。 このプロセス収量が100%であったことを考慮すると、256丸みを帯びた精子細胞が産生されるであろう。 França(1991)によると、国内のイノシシは精子形成のより大きな本質的効率を示した(26.6%、野生のイノシシよりも12%)。 いくつかの著者は、生殖変化のない動物における精原性増殖期および精子形成過程の減数分裂中の変性および細胞損失を報告している(Berndtson and Desjardins、1974、Billaspuri and Guraya、1984、Roosen-Runge、1973)。 アポトーシスは、正常な発達中および多細胞生物の恒常性において基本的な役割を果たす(Jacobson et al., 1997). 精細上皮では、アポトーシスは通常、自発的に、または化学療法、高温、ホルモン障害および成長因子の減少などのいくつかの要因に応答して起こる(Blanco-Rodríguez and Martínez-Garcia、1998)。

増殖とアポトーシスとの間の平衡は、精細上皮における精子形成細胞数の調節において非常に重要な役割を果たす。 特に精原相では、アポトーシス調節恒常性機構は密度依存性と考えられ、減数分裂相に入る発芽細胞の量を利用可能なSertoli細胞によって支持され得る数に制限する(Huckins,1978,Sharpe,1994)。 Sertoli細胞指標は、それらの細胞が精細上皮において発芽細胞を支持するために有する能力の指標パラメータであり、すなわち、それらは、種におけるSertoli細胞の機能的効率を反映する(França and Russell,1998)。 したがって、Sertoli細胞がより多くの量の発芽細胞を支持する種は、そのパラメータの値が小さいものと比較して、より大きな毎日の精子産生を有する傾向

この研究では、各セルトリ細胞について7.27の丸い精子細胞が見出された(表3)。 この値は、Piausイノシシの見つかったものよりも約40%小さかった(12.4-França、1991)。 この差は、精母細胞の場合を除いて、他の指標について持続したが、Sertoli細胞によって支持された数は、França(1991)によって見出された値と類似していた。 結果は、国内のイノシシが提出された選択プロセスの反射であると思われ、それはおそらくより効率的なSertoli細胞で最高潮に達した。

この研究で研究された組織測定パラメータは、国内のイノシシの報告された値と非常に類似していたが、精子形成の本質的な効率とイノシシSertoli細胞

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