Diagnostic de laboratoire

Diagnostic différentiel parmi les autres amibes

Les espèces d’Entamoeba pathogènes doivent être différenciées des autres protozoaires intestinaux tels que les amibes non pathogènes (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) et la Dientamoeba fragilis flagellée. La différenciation morphologique entre ceux-ci est possible, mais potentiellement compliquée, en fonction des caractéristiques morphologiques des kystes et des trophozoïtes.

En culture, les caractéristiques de croissance différentielles de E. moshkovskii peut aider à le distinguer des autres espèces, mais les méthodes de culture ont des limites importantes (infections mixtes manquantes, contamination, main-d’œuvre intensive, disponibilité limitée). Historiquement, la différenciation d’E. dispar et d’E. histolytica était basée sur des analyses isoenzymatiques ou immunologiques, mais celles-ci ne sont plus favorisées avec la disponibilité de méthodes moléculaires efficaces et sont rarement effectuées. Des méthodes moléculaires sont actuellement recommandées pour distinguer les espèces d’Entamoeba pathogènes.

Détection microscopique

L’identification microscopique des kystes et des trophozoïtes dans les selles est la méthode courante pour diagnostiquer les espèces d’Entamoeba pathogènes. Ceci peut être accompli en utilisant:

• Selles fraîches: supports humides et préparations colorées en permanence (par exemple, trichrome).
• Concentrés de selles fraîches : supports humides, avec ou sans coloration iodée, et préparations colorées en permanence (par exemple, trichrome). Bien qu’utiles pour les kystes, les méthodes de concentration peuvent ne pas être utiles pour démontrer les trophozoïtes.
• La microscopie a également une faible sensibilité si un seul échantillon de selles est analysé et nécessite un personnel formé au diagnostic morphologique. La collecte et l’analyse de trois échantillons de selles consécutifs dans les dix jours améliorent les chances de détection. De plus, E. dispar, E. histolytica et E. moshkovskii ne sont pas distinguables en fonction de la morphologie.

Les trophozoïtes peuvent également être identifiés dans des aspirats ou des échantillons de biopsie obtenus lors d’une coloscopie ou d’une intervention chirurgicale.

Immunodiagnostic

Des kits d’immunoessai enzymatique (EIA) pour la détection des anticorps Entamoeba histolytica ainsi que des kits d’EIA pour la détection des antigènes sont disponibles dans le commerce aux États-Unis. La détection d’anticorps est plus utile chez les patients atteints d’une maladie extra-intestinale (c’est-à-dire d’un abcès hépatique amibique) lorsque les organismes ne sont généralement pas trouvés lors de l’examen des selles. La détection d’anticorps a une valeur diagnostique limitée chez les patients de zones hautement endémiques susceptibles d’avoir déjà été exposés et séroconversion, mais peut être plus utile chez les patients de zones où Entamoeba spp est pathogène. sont rares. La détection d’antigènes lors d’infections actives peut être utile comme complément au diagnostic microscopique pour détecter les parasites et peut faire la distinction entre les infections pathogènes et non pathogènes.

Détection des anticorps

Le test d’hémagglutination indirecte (IHA) a été remplacé par des kits de test EIA disponibles dans le commerce pour le sérodiagnostic de routine de l’amibiase. L’antigène consiste en un extrait soluble brut d’organismes de culture axénique. Le test EIA détecte un anticorps spécifique pour E. histolytica chez environ 95% des patients atteints d’amibiase extra-intestinale, 70% des patients présentant une infection intestinale active et 10% des personnes asymptomatiques qui transmettent des kystes d’E. histolytica. Si les anticorps ne sont pas détectables chez les patients présentant une présentation aiguë d’abcès hépatique amibique suspecté, un deuxième échantillon doit être prélevé 7 à 10 jours plus tard. Si le deuxième échantillon ne présente pas de séroconversion, d’autres agents doivent être envisagés. Détectable E. les anticorps spécifiques à l’histolytique peuvent persister pendant des années après un traitement réussi, de sorte que la présence d’anticorps n’indique pas nécessairement une infection aiguë ou actuelle. En outre, les patients qui ont vécu dans des zones hautement endémiques sont susceptibles d’être séropositifs en raison d’expositions passées. La spécificité est de 95% ou plus: des réactions faussement positives se produisent rarement.

Bien que la détection d’anticorps IgM spécifiques à E. histolytica ait été rapportée, la sensibilité n’est que d’environ 64% chez les patients présentant une maladie invasive actuelle. Plusieurs kits EIA commerciaux pour la détection des anticorps sont disponibles aux États-Unis. Il n’existe pas de kits de détection d’anticorps commerciaux pour E. dispar ou E. moshkovskii ou E. bangladeshi.

Détection d’antigène

La détection d’antigène peut être utile en complément du diagnostic microscopique pour détecter les parasites et distinguer les infections pathogènes des infections non pathogènes. Cependant, l’utilité est limitée pour les échantillons congelés ou fixes et pour les échantillons post-traitement. Des études récentes indiquent une sensibilité et une spécificité améliorées des dosages d’antigènes fécaux avec l’utilisation d’anticorps monoclonaux capables de distinguer les infections à E. histolytica et à E. dispar. Au moins un kit commercial est disponible qui détecte uniquement l’infection pathogène d’E. histolytica dans les selles; plusieurs kits sont disponibles qui détectent les antigènes d’E. histolytica dans les selles mais n’excluent pas les infections d’E. dispar.

Diagnostic moléculaire

PCR conventionnelle

Dans les laboratoires de diagnostic de référence, l’analyse moléculaire par des dosages conventionnels basés sur la PCR est la méthode de choix pour discriminer E. histolytica et E. dispar. Certains essais permettent également de distinguer E. moshkovskii.

PCR en temps réel

Une approche de PCR en temps réel TaqMan a été validée au CDC et est utilisée pour le diagnostic différentiel en laboratoire de l’amibiase. Le test cible le gène de l’ARNr 18S avec des sondes TaqMan spécifiques à l’espèce dans un format duplex, ce qui permet de détecter à la fois E. histolyrica et E. dispar dans le même vaisseau réactionnel.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Comparaison des justifications de la PCR en temps réel pour le diagnostic différentiel en laboratoire de l’amibiase. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

Sécurité en laboratoire

Les kystes dans les échantillons de selles non fixés sont potentiellement infectieux. Respectez les précautions standard applicables aux échantillons de selles: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.