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Coloration Nissl
Les noyaux et les corps nissl (réticulum endoplasmique rugueux) sont colorés en violet bleu avec du violet crésylique.
La coloration Nissl est utilisée pour la coloration Klüver-Barrera (KB).
- Procédure de coloration
- Considérations importantes concernant la différenciation
Procédure de coloration
| 1 | Deparaffinisation | Xylène | 3 changements, 10 minuntes chacun |
|---|---|---|---|
| 2 | Élimination du xylène | 100% éthanol | 3 changements, 5 minutes chacun |
| 3 | Hydratation | 95%, 70% éthanol | 5 minutes chacun |
| 4 | Lavage | Eau courante du robinet | 2 minutes |
| 5 | Rinçage | Distillé eau | |
| 6 | Coloration | Solution de violet de crésyle à 0,1% | 10 minutes, 37℃ |
| 7 | Différenciation | éthanol à 95% + quelques gouttes de solution d’acide acétique à 10% | Environ 5 à 10 minutes. Il faut veiller à ne pas surdifférencier puisque la décoloration se fera à l’étape suivante. |
| 8 | Différenciation | 95%, 100% éthanol | Environ 1 minute chacun. Différencier jusqu’à ce que seuls les noyaux et les corps de nissl soient bleu violet. |
| 9 | Vérification microscopique | L’étapeStep& may peut être répétée si une différenciation plus poussée est nécessaire. | |
| 10 | Déshydratation | 100% d’ehtanol | 2 changements de 5 minutes chacun |
| 11 | Compensation | xylène | 3 changements de 10 minutes chacun |
| 12 |
0.solution aqueuse de violet de crésyle à 1% (Filtre avant utilisation)
1g
1000ml
pH du violet de crésyle
La méthode de coloration diffère en fonction du pH de la solution de coloration. À un pH proche de 3,0, seuls les corps de Nissl, les nucléoles et les membranes nucléaires sont colorés en bleu pâle. Les noyaux des cellules gliales ne sont que très légèrement colorés. À mesure que le pH augmente, la couleur devient globalement plus foncée et le cytoplasme des cellules nerveuses, des fibres nerveuses et des cellules gliales est co-coloré. La co-coloration s’intensifie proche d’un pH de 4,0. Par conséquent, un temps de différenciation plus long est nécessaire.
-
pH3.0 -
pH4.7
Types de violet de crésyle
Trois types de violet de crésyle sont actuellement utilisés en Laboratoire de neuropathologie.
| nom du produit | fabricant | disponibilité |
|---|---|---|
| Acétate de Violet de crésyle | EM SCIENCE | en rupture de stock |
| Acétate de violet de crésyle | SIGMA | Disponible dans le commerce |
| Violet de crésyle (Acétate) | MERCK | Disponible dans le commerce |
Le temps de différenciation diffère selon le produit violet de crésyle
Le pH de la solution de coloration diffère selon le produit. Par conséquent, les méthodes de coloration diffèrent également. Il est important de savoir que le temps nécessaire à la différenciation diffère d’un produit à l’autre. Cependant, quel que soit le produit utilisé, la même image chromatique colorée peut finalement être obtenue par différenciation et observation de l’échantillon au microscope.
| nom du produit | fabricant | pH d’une solution de violet de crésyle à 0,1% | Temps de différenciation dans de l’éthanol à 95% |
|---|---|---|---|
| Acétate de violet de crésyle | EM SCIENCE | 3.5 | pendant 10 à 30 secondes |
| Acétate de violet de crésyle | SIGMA | 4,7 | 10 min environ |
| Violet de crésyle (acétate) | MERCK | 4,8 | 10 min environ |
※ Le pH peut être ajusté de 3,5 à environ 3,8 en ajoutant une quantité appropriée d’acide acétique à 10% aux solutions de coloration Sigma et Merck, ce qui raccourcira le temps nécessaire à la différenciation avec de l’éthanol à 95%. Cependant, il n’est pas recommandé de réutiliser cette solution.
Considérations importantes concernant la différenciation
Effectuez la différenciation jusqu’à ce que l’arrière-plan devienne blanc. Il est idéal que les nucléoles et les membranes nucléaires des noyaux des cellules nerveuses soient clairs et que la chromatine soit faiblement colorée.
L’acétate de violet de crésyle (Sigma C5042) pH4.7 a été utilisé dans les deux sections.
Photo de gauche : Différenciation de l’éthanol à 95% pendant seulement 10 secondes. Avec une différenciation insuffisante, toute la cellule nerveuse est colorée en bleu, ce qui rend impossible l’identification du noyau et des corps de Nissl.
Photo de droite: Différenciation de l’éthanol à 95% pendant 10 minutes. Une différenciation suffisante permet de différencier clairement les noyaux et les corps de Nissl des neurones.
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