Diagnóstico de laboratorio

Diagnóstico diferencial entre otras amebas

Las especies de Entamoeba patógenas deben diferenciarse de otros protozoos intestinales como las amebas no patógenas (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) y la Dientamoeba flagelada fragilis. La diferenciación morfológica entre estos es posible, pero potencialmente complicada, con base en las características morfológicas de los quistes y trofozoitos.

En cultivo, características diferenciales de crecimiento de E. moshkovskii puede ayudar a distinguirlo de otras especies, pero los métodos de cultivo tienen limitaciones importantes (ausencia de infecciones mixtas, contaminación, uso intensivo de mano de obra, disponibilidad limitada). Históricamente, la diferenciación de E. dispar y E. histolytica se basó en análisis isoenzimáticos o inmunológicos, pero estos ya no se favorecen con la disponibilidad de métodos moleculares efectivos y rara vez se realizan. Actualmente se recomiendan métodos moleculares para distinguir especies de Entamoeba patógenas.

Detección microscópica

La identificación microscópica de quistes y trofozoitos en las heces es el método común para diagnosticar especies de Entamoeba patógenas. Esto se puede lograr utilizando:

• Taburete fresco: monturas húmedas y preparaciones teñidas permanentemente (por ejemplo, tricrómico).
• Concentrados de heces frescas: monturas húmedas, con o sin tinción de yodo, y preparaciones teñidas permanentemente (por ejemplo, tricrómico). Aunque son útiles para los quistes, los métodos de concentración pueden no ser útiles para demostrar trofozoitos.
• La microscopía también tiene una baja sensibilidad si solo se analiza una muestra de heces, y requiere personal capacitado en diagnóstico morfológico. La recolección y el análisis de tres muestras de heces consecutivas en un plazo de diez días mejora las posibilidades de detección. Además, E. dispar, E. histolytica y E. moshkovskii no son distinguibles según su morfología.

Los trofozoitos también se pueden identificar en aspirados o muestras de biopsia obtenidas durante una colonoscopia o cirugía.

Inmunodiagnóstico

Los kits de inmunoensayo enzimático (EIA) para la detección de anticuerpos histolíticos de Entamoeba, así como los kits de EIA para la detección de antígenos, están disponibles comercialmente en los Estados Unidos. La detección de anticuerpos es más útil en pacientes con enfermedad extraintestinal (es decir, absceso hepático amebiano) cuando, por lo general, no se encuentran organismos en el examen de las heces. La detección de anticuerpos tiene un valor diagnóstico limitado en pacientes de áreas altamente endémicas que probablemente tengan exposición previa y seroconversión, pero puede ser más útil en pacientes de áreas donde Entamoeba spp es patógena. son raros. La detección de antígenos durante infecciones activas puede ser útil como complemento del diagnóstico microscópico para detectar parásitos y puede distinguir entre infecciones patógenas y no patógenas.

Detección de anticuerpos

La prueba de hemaglutinación indirecta (IHA) ha sido reemplazada por kits de prueba de EIA disponibles en el mercado para el serodiagnóstico de rutina de amebiasis. El antígeno consiste en un extracto soluble bruto de organismos cultivados axénicamente. La prueba de EIA detecta anticuerpos específicos para E. histolítica en aproximadamente el 95% de los pacientes con amebiasis extraintestinal, el 70% de los pacientes con infección intestinal activa y el 10% de las personas asintomáticas que pasan quistes de E. histolytica. Si los anticuerpos no son detectables en pacientes con una presentación aguda de absceso hepático amebiano sospechoso, se debe extraer una segunda muestra 7-10 días después. Si la segunda muestra no muestra seroconversión, se deben considerar otros agentes. Detectable E. los anticuerpos específicos de histolítica pueden persistir durante años después del tratamiento exitoso, por lo que la presencia de anticuerpos no indica necesariamente una infección aguda o actual. Además, es probable que los pacientes que han vivido en áreas altamente endémicas sean seropositivos debido a exposiciones pasadas. La especificidad es del 95% o superior: rara vez se producen reacciones positivas falsas.

Aunque se ha notificado la detección de anticuerpos IgM específicos para E. histolytica, la sensibilidad es de solo un 64% en pacientes con enfermedad invasiva actual. En los Estados Unidos hay disponibles varios kits comerciales de EIA para la detección de anticuerpos. No existen kits comerciales de detección de anticuerpos para E. dispar, E. moshkovskii o E. bangladeshi.Detección de antígenos

La detección de antígenos

puede ser útil como complemento del diagnóstico microscópico para detectar parásitos y distinguir entre infecciones patógenas y no patógenas. Sin embargo, la utilidad es limitada para muestras congeladas o fijas y para muestras de postratamiento. Estudios recientes indican una mejor sensibilidad y especificidad de los ensayos de antígenos fecales con el uso de anticuerpos monoclonales que pueden distinguir entre infecciones por E. histolytica y E. dispar. Hay al menos un kit comercial disponible que detecta solo la infección patógena por E. histolytica en las heces; hay varios kits disponibles que detectan antígenos de E. histolytica en las heces, pero no excluyen las infecciones por E. dispar.

Diagnóstico molecular

PCR convencional

En los laboratorios de diagnóstico de referencia, el análisis molecular mediante ensayos convencionales basados en PCR es el método de elección para discriminar entre E. histolytica y E. dispar. Algunos ensayos también pueden distinguir E. moshkovskii.

PCR en tiempo real

Un enfoque de PCR en tiempo real de TaqMan ha sido validado en los CDC y se utiliza para el diagnóstico diferencial de laboratorio de la amebiasis. El ensayo se dirige al gen 18S rRNA con sondas TaqMan específicas de la especie en un formato dúplex, lo que permite detectar E. histolyrica y E. dispar en el mismo recipiente de reacción.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Comparación de las razones de la PCR en tiempo real para el diagnóstico diferencial de laboratorio de amebiasis. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

Seguridad en el laboratorio

Los quistes en muestras de heces no fijadas son potencialmente infecciosos. Observe las precauciones estándar que se aplican a las muestras de heces: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.