Blut- und Markanalyse

Einschränkungen bei der Erzeugung von Zellsuspensionen gelten nicht für Patienten mit Blut- oder Markbeteiligung durch chronische lymphoproliferative Erkrankungen. Die Subklassifizierung dieser Läsionen hängt stark von der Durchflusszytometrie ab.42,44,49-51 Chronische lymphatische Leukämie (CLL) wird im Wesentlichen durch ihre immunphänotypischen Eigenschaften definiert. Andere B-Zell-lymphoproliferative Erkrankungen haben charakteristische, wenn auch nicht immer absolut spezifische Phänotypen. Das Mantelzell-Lymphom kann oft in seiner leukämischen Phase erkannt werden, obwohl der spezifischste Marker, Cyclin D1, mit aktuellen Techniken nur sehr schwer zu erkennen ist. Umgekehrt hat die Haarzellenleukämie nicht nur ein Merkmal, sondern auch einen hochspezifischen Phänotyp42,50,52; Gelegentlich kann bei Patienten mit ungeklärter Panzytopenie eine Haarzellenleukämie festgestellt werden, wenn nur eine winzige Anzahl von Blutzellen mit dem klassischen Phänotyp identifiziert wird52 (Abb. 15-3).

Die Durchflusszytometrie kann auch prognostische Faktoren bei Personen mit CLL nachweisen. In der Erkenntnis, dass CLL in einen schlecht prognostizierten Typ unterteilt werden kann, der mit nicht mutierten Genen der Immunglobulin-V-Region assoziiert ist, und in einen mutierten Phänotyp mit besserer Prognose, haben mehrere Studien versucht, Flusssurrogate zu identifizieren. Der erste Marker, der sich als prognostisch erwies, war CD38, obwohl die Korrelation mit dem Mutationsstatus oder der Prognose unvollständig ist.53,54 Zeta-Chain-associated Protein Kinase 70 (ZAP 70) scheint ein besserer Ersatzmarker zu sein, obwohl auch er nicht perfekt ist; es liefert jedoch prognostische Informationen.55-57 Obwohl dieser Test jedoch weit verbreitet ist, insbesondere in kommerziellen Referenzlaboratorien, können Cutoffs zwischen positiv und negativ willkürlich sein, und daher kann eine signifikante Variabilität der Ergebnisse zwischen Laboratorien bestehen.58,59 Es wurden Versuche unternommen, die Reproduzierbarkeit zu verbessern,60 Es ist jedoch nicht immer sicher, dass ein bestimmter Assay die gleichen Ergebnisse liefert wie die in der veröffentlichten klinischen Literatur. Es wurden andere Versuche unternommen, prognostisch signifikante Teilmengen von Patienten mit CLL unter Verwendung anderer Kombinationen von Markern zu definieren,61 Diese Kombinationen wurden jedoch in der Routinepraxis nicht übernommen.

Der primäre Wert der Durchflusszytometrie bei der Beurteilung chronischer Leukämien ist ihre Fähigkeit, Klonalität in B-Zellpopulationen basierend auf der eingeschränkten Expression einer Art von Immunglobulin-Leichtkette nachzuweisen. Dieses Merkmal ist besonders wertvoll bei der Beurteilung von Patienten mit ungeklärter Lymphozytose62,63 und ist auch nützlich für die Bestimmung des Stadiums von Patienten mit B-Zell-Non-Hodgkin-Lymphom,64,65, da das Vorhandensein von nur 0,5% bis 1% einer klonalen B-Zell-Population oder sogar weniger im Mark oder Blut einiger Patienten nachgewiesen werden kann. Die hohe Empfindlichkeit der Durchflusszytometrie zum Nachweis klonaler Populationen hat jedoch gezeigt kleine klonale B-Zellpopulationen bei einigen Patienten ohne offensichtliches Lymphom oder Leukämie.66 Daher sollte der Befund eines kleinen Markklons in Ermangelung anderer Anzeichen eines Lymphoms mit Vorsicht interpretiert werden, analog zum Befund einer monoklonalen Gammopathie bei einem Patienten ohne Anzeichen eines Myeloms.

Die Durchflusszytometrie wurde auch in großem Umfang bei der Untersuchung von Patienten mit Myelom eingesetzt. Eine Einschränkung der Durchflusszytometrie besteht darin, dass Plasmazellen in Durchfluss untersuchten Markaspiraten im Vergleich zur Prävalenz von Zellen auf Filmen oder in Biopsien unterrepräsentiert sind; infolgedessen kann diese Technik nicht zur Quantifizierung von Myelomzellen verwendet werden und kann daher die Morphologie bei Anwendung herkömmlicher diagnostischer Kriterien nicht ersetzen. Plasmazellen haben jedoch einen charakteristischen Phänotyp, einschließlich sehr heller Expression von CD38 und Expression von CD138,67,68 und sind daher leicht zu erkennen. Unter Verwendung von Membranpermeabilisierungstechniken ist es einfach, eine zytoplasmatische Immunglobulin (Ig) -Leichtkettenrestriktion nachzuweisen.67 Es ist von größerer Bedeutung, dass neoplastische Plasmazellen normalerweise abnormale Phänotypen aufweisen. Obwohl keine einzige spezifische phänotypische Anomalie die Unterscheidung zwischen gutartiger monoklonaler Gammopathie und Myelom erlaubt, kann die Durchflusszytometrie dennoch hilfreich sein, um das Myelom von der monoklonalen Gammopathie unbestimmter Signifikanz zu unterscheiden oder das Fortschreiten der monoklonalen Gammopathie unbestimmter Signifikanz oder des schwelenden Myeloms vorherzusagen.69-71 Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die durchflusszytometrische Beurteilung abnormaler Plasmazellen zum Zeitpunkt der Diagnose des Myeloms prognostische Bedeutung hat.72 Darüber hinaus ist der Nachweis zirkulierender Plasmazellen oder das Fortbestehen eines abnormalen Phänotyps nach der Therapie, einschließlich des Nachweises einer minimalen Resterkrankung, prädiktiv für das Ergebnis bei Patienten mit Myelom.69,71,73-76

Die Klonalität von T-Zellpopulationen kann auch durch Durchflusszytometrie nachgewiesen werden, obwohl die Methode komplexer ist und nicht so weit verbreitet ist wie die für B-Zellen. Diese Technik basiert auf dem Nachweis der Einschränkung der Verwendung des V-Beta-Gens bei T-Zell-Leukämien.77-79 T-Zell-Malignome zeigen auch häufig abnormale T-Zell-Phänotypen, die am häufigsten durch den Verlust eines normalen Pan-T-Antigens oder die Expression eines T-Zell-Antigens mit abnormaler Intensität gekennzeichnet sind.44,80,81 Da bestimmte kleine, ungewöhnliche und sogar klonale T-Zellpopulationen unter nicht-neoplastischen Bedingungen in geringer Anzahl beobachtet werden können, ist diese Technik empfindlicher als der Nachweis einer klonalen B-Zellpopulation. Wenn jedoch abnormale T-Zellen mehr als einen sehr kleinen Prozentsatz der Zellen ausmachen, zeigt die Multiparameter-Durchflusszytometrie sie leicht und spielt eine bedeutende Rolle bei der Kategorisierung dieser ungewöhnlichen Tumoren.