Labordiagnostik

Differentialdiagnose unter anderen Amöben

Pathogene Entamöbenarten müssen von anderen Darmprotozoen wie den nichtpathogenen Amöben (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) und den Flagellaten Dientamoeba fragilis unterschieden werden. Morphologische Differenzierung unter diesen ist möglich, aber möglicherweise kompliziert, basierend auf morphologischen Eigenschaften der Zysten und Trophozoiten.

In Kultur, differentielle Wachstumsmerkmale von E. moshkovskii kann bei der Unterscheidung von anderen Arten helfen, aber Kulturmethoden haben wichtige Einschränkungen (fehlende Mischinfektionen, Kontamination, arbeitsintensiv, begrenzte Verfügbarkeit). In der Vergangenheit basierte die Differenzierung von E. dispar und E. histolytica auf isoenzymatischen oder immunologischen Analysen, die jedoch aufgrund der Verfügbarkeit wirksamer molekularer Methoden nicht mehr bevorzugt werden und selten durchgeführt werden. Zur Unterscheidung pathogener Entamöbenarten werden derzeit molekulare Methoden empfohlen.

Mikroskopischer Nachweis

Die mikroskopische Identifizierung von Zysten und Trophozoiten im Stuhl ist die übliche Methode zur Diagnose pathogener Entamöbenarten. Dies kann mit Folgendem erreicht werden:

• Frischer Stuhl: nasse Halterungen und dauerhaft gefärbte Präparate (z. B. Trichrom).
• Konzentrate aus frischem Stuhl: nasse Präparate mit oder ohne Jodfärbung und dauerhaft gefärbte Präparate (z. B. Trichrom). Obwohl für Zysten nützlich, sind Konzentrationsmethoden möglicherweise nicht nützlich, um Trophozoiten nachzuweisen.
• Die Mikroskopie hat auch eine geringe Empfindlichkeit, wenn nur eine Stuhlprobe analysiert wird, und erfordert in der morphologischen Diagnose geschultes Personal. Die Sammlung und Analyse von drei aufeinanderfolgenden Stuhlproben innerhalb von zehn Tagen verbessert die Erkennungschancen. Auch E. dispar, E. histolytica und E. moshkovskii sind aufgrund der Morphologie nicht unterscheidbar.

Trophozoiten können auch in Aspiraten oder Biopsieproben identifiziert werden, die während einer Koloskopie oder Operation erhalten wurden.

Immundiagnostik

Enzymimmunoassay (EIA)-Kits zum Nachweis von Entamoeba histolytica-Antikörpern sowie EIA-Kits zum Nachweis von Antigenen sind in den USA kommerziell erhältlich. Der Antikörpernachweis ist am nützlichsten bei Patienten mit extraintestinaler Erkrankung (d. H. Amöbenleberabszess), wenn Organismen bei der Stuhluntersuchung im Allgemeinen nicht gefunden werden. Der Antikörpernachweis ist bei Patienten aus stark endemischen Gebieten, in denen wahrscheinlich eine vorherige Exposition und Serokonversion vorliegt, von begrenztem diagnostischem Wert, kann jedoch bei Patienten aus Gebieten, in denen pathogene Entamoeba spp. sind selten. Der Antigennachweis während aktiver Infektionen kann als Ergänzung zur mikroskopischen Diagnose beim Nachweis von Parasiten nützlich sein und zwischen pathogenen und nichtpathogenen Infektionen unterscheiden.

Antikörpernachweis

Der indirekte Hämagglutinationstest (IHA) wurde durch kommerziell erhältliche EIA-Testkits zur routinemäßigen Serodiagnose von Amöbiasis ersetzt. Antigen besteht aus einem rohen löslichen Extrakt von axenisch kultivierten Organismen. Der EIA-Test erkennt Antikörper spezifisch für E. histolytica bei etwa 95% der Patienten mit extraintestinaler Amöbiasis, 70% der Patienten mit aktiver Darminfektion und 10% der asymptomatischen Personen, die Zysten von E. histolytica passieren. Wenn bei Patienten mit akutem Verdacht auf Amöbenleberabszess keine Antikörper nachweisbar sind, sollte 7-10 Tage später eine zweite Probe entnommen werden. Wenn die zweite Probe keine Serokonversion zeigt, sollten andere Mittel in Betracht gezogen werden. Nachweisbares E. histolytica-spezifische Antikörper können nach erfolgreicher Behandlung jahrelang bestehen bleiben, so dass das Vorhandensein von Antikörpern nicht unbedingt auf eine akute oder aktuelle Infektion hinweist. Auch Patienten, die in stark endemischen Gebieten gelebt haben, sind wahrscheinlich aufgrund früherer Expositionen seropositiv. Die Spezifität beträgt 95% oder höher: Falsch positive Reaktionen treten selten auf.

Obwohl über den Nachweis von IgM-Antikörpern berichtet wurde, die spezifisch für E. histolytica sind, liegt die Sensitivität bei Patienten mit aktueller invasiver Erkrankung nur bei etwa 64%. In den USA sind mehrere kommerzielle EIA-Kits zum Antikörpernachweis erhältlich. Es gibt keine kommerziellen Antikörpernachweiskits für E. dispar oder E. moshkovskii oder E. bangladeshi.

Antigennachweis

Der Antigennachweis kann als Ergänzung zur mikroskopischen Diagnose beim Nachweis von Parasiten und zur Unterscheidung zwischen pathogenen und nichtpathogenen Infektionen nützlich sein. Der Nutzen ist jedoch für gefrorene oder fixierte Proben und für Nachbehandlungsproben begrenzt. Neuere Studien zeigen eine verbesserte Empfindlichkeit und Spezifität von fäkalen Antigen-Assays mit der Verwendung von monoklonalen Antikörpern, die zwischen E. histolytica und E. dispar Infektionen unterscheiden können. Es ist mindestens ein kommerzielles Kit verfügbar, das nur pathogene E. histolytica-Infektionen im Stuhl nachweist; Es sind mehrere Kits verfügbar, die E. histolytica-Antigene im Stuhl nachweisen, aber E. dispar-Infektionen nicht ausschließen.

Molekulare Diagnostik

Konventionelle PCR

In Referenzdiagnoselabors ist die molekulare Analyse mittels konventioneller PCR-basierter Assays die Methode der Wahl zur Unterscheidung zwischen E. histolytica und E. dispar. Einige Assays können auch E. moshkovskii unterscheiden.

Echtzeit-PCR

Ein TaqMan-Echtzeit-PCR-Ansatz wurde am CDC validiert und wird für die Differentiallabordiagnose von Amöbiasis verwendet. Der Assay zielt mit speziesspezifischen TaqMan-Sonden im Duplexformat auf das 18S-rRNA-Gen ab, wodurch sowohl E. histolyrica als auch E. dispar im selben Reaktionsgefäß nachgewiesen werden können.

K.M., K. M., K. M., K. M., K. M., K.M., K.M., K.M., K.M., K.M., K.M., K.M., K.M., K.M., K.M., et al. Vergleich von Echtzeit-PCR-Begründungen für die Differentiallabordiagnose von Amöbiasis. J Clin Microbiol 2005;43:5491-5497.

Laborsicherheit

Zysten in nicht fixierten Stuhlproben sind potentiell infektiös. Beachten Sie die Standardvorkehrungen, die für Stuhlproben gelten: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.