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⑫ Färbung

by admin

Nissl-Färbung

Kerne und Nissl-Körper (raues endoplasmatisches Retikulum) werden blauviolett mit Kresylviolett gefärbt.

Die Nissl-Färbung wird für die Klüver-Barrera (KB)-Färbung verwendet.

  • Färbeverfahren
  • Wichtige Überlegungen zur Differenzierung

Färbeverfahren

1 Deparaffinierung Xylol 3 Änderungen, jeweils 10 Minuten
2 Entfernung von Xylol 100% Ethanol 3 Wechsel, je 5 Minuten
3 Hydratation 95%, 70% Ethanol je 5 Minuten
4 Waschen Fließendes Leitungswasser 2 Minuten
5 Spülen Destilliert wasser
6 Färbung 0,1% Kresylviolettlösung 10 Minuten, 37 ℃
7 Differenzierung 95% Ethanol + ein paar Tropfen 10% Essigsäurelösung Ungefähr 5 bis 10 Minuten. Es sollte darauf geachtet werden, nicht zu stark zu differenzieren, da die Entfärbung im folgenden Schritt erfolgt.
8 Differenzierung 95%, 100% Ethanol Jeweils ca. 1 Minute. Differenzieren Sie, bis nur noch Kerne und Nissl-Körper blauviolett sind.
9 Mikroskopische Prüfung Schritt ⑦ & ⑧ kann wiederholt werden, wenn mehr Differenzierung erforderlich ist.
10 Dehydratisierung 100% ehtanol 2 Wechsel, je 5 Minuten
11 Clearing Xylol 3 Wechsel, je 10 Minuten
12 Deckglättung

0.1% cresylviolett wässrige Lösung (Filter vor Gebrauch)

Cresylviolett

1g

destilliertes Wasser

1000ml

pH von Cresylviolett

Die Färbemethode unterscheidet sich je nach pH-Wert der Färbelösung. Bei einem pH-Wert nahe 3,0 sind nur die Nissl-Körper, Nukleolen und Kernmembranen hellblau gefärbt. Gliazellenkerne sind nur sehr leicht angefärbt. Wenn der pH-Wert ansteigt, wird die Farbe insgesamt dunkler und das Zytoplasma von Nervenzellen, Nervenfasern und Gliazellen wird mitgefärbt. Die Co-Färbung intensiviert sich nahe einem pH-Wert von 4,0. Daher ist eine längere Differenzierungszeit erforderlich.


  • pH3.0

  • pH4.7

Arten von Kresylviolett

Im Labor für Neuropathologie werden derzeit drei Arten von Kresylviolett verwendet.

Produktname Hersteller Verfügbarkeit
Cresylviolettacetat EM SCIENCE nicht auf Lager
Cresylviolettacetat SIGMA Im Handel erhältlich
Cresylviolett (Acetat) MERCK Im Handel erhältlich

Differenzierungszeit unterscheidet sich je nach Cresylviolettprodukt

Der pH-Wert der Färbelösung unterscheidet sich je nach Produkt. Daher unterscheiden sich auch die Färbemethoden. Es ist wichtig zu wissen, dass die für die Differenzierung erforderliche Zeit zwischen den Produkten unterschiedlich ist. Unabhängig davon, welches Produkt verwendet wird, kann das gleiche gefärbte chromatische Bild letztendlich durch Differenzierung und Beobachtung der Probe unter einem Mikroskop erhalten werden.

Produktname Hersteller pH-Wert der 0,1% igen Cresylviolettlösung Differenzierungszeit in 95% igem Ethanol
Cresylviolettacetat EM SCIENCE 3.5 für 10 bis 30 Sekunden
Cresylviolettacetat SIGMA 4,7 ungefähr 10 min
Cresylviolett (Acetat) MERCK 4,8 ungefähr 10 min

※ Der pH-Wert kann von 3,5 bis ungefähr 3,8 eingestellt werden, indem den Sigma- und Merck-Färbelösungen eine geeignete Menge 10% iger Essigsäure zugesetzt wird, wodurch die für die Differenzierung mit 95% igem Ethanol erforderliche Zeit verkürzt wird. Es wird jedoch nicht empfohlen, diese Lösung wiederzuverwenden.

Wichtige Überlegungen zur Differenzierung

Führen Sie eine Differenzierung durch, bis der Hintergrund weiß wird. Ideal ist es, die Nukleolen und Kernmembranen der Nervenzellkerne klar und Chromatin schwach gefärbt zu haben.

In beiden Abschnitten wurde Kresylviolettacetat (Sigma C5042) pH4,7 verwendet.

Linkes Foto: 95% Ethanoldifferenzierung für nur 10 Sekunden. Bei unzureichender Differenzierung ist die gesamte Nervenzelle blau gefärbt, so dass der Kern und die Nissl-Körper nicht identifiziert werden können.

Rechtes Foto: 95% ige Ethanoldifferenzierung für 10 Minuten. Durch ausreichende Differenzierung können die Kerne und Nissl-Körper von Neuronen klar unterschieden werden.