Articles

– färgning av CNS

by admin

nissl-färgning

kärnor och nissl-kroppar (grov endoplasmatisk retikulum) färgas blålila med kresylviolett.

Nissl-färgning Används för färgning av Kl Jacobver-Barrera (KB).

  • Färgningsförfarande
  • viktiga överväganden angående differentiering

Färgningsförfarande

1 Deparaffinisering Xylene 3 förändringar, 10 minuntes vardera
2 avlägsnande av xylen 100% etanol 3 förändringar, 5 minuter vardera
3 hydrering 95%, 70% etanol 5 minuter vardera
4 tvätt rinnande kranvatten 2 minuter
5 sköljning destillerad vatten
6 färgning 0,1% cresyl violett lösning 10 minuter, 37 kg
7 differentiering 95% etanol + några droppar 10% ättiksyralösning cirka 5 till 10 minuter. Försiktighet bör vidtas för att inte överdifferentiera eftersom avfärgning fortsätter i följande steg.
8 differentiering 95%, 100% etanol cirka 1 minut vardera. Differentiera tills endast kärnor och nissl-kroppar är blålila.
9 mikroskopisk kontroll steg &
10 dehydrering 100% ehtanol 2 förändringar, 5 minuter vardera
11 Clearing Xylene 3 förändringar, 10 minuntes vardera
12 täckglas

0.1% cresyl violett vattenlösning (Filter före användning)

cresyl violett

1g

destillerat vatten

1000ml

pH för cresyl violett

färgningsmetoden skiljer sig beroende på pH för färgningslösningen. Vid ett pH nära 3,0 färgas endast nissl-kropparna, nukleolerna och kärnmembranen ljusblå. Glialcellkärnor är bara mycket lätt färgade. När pH ökar blir färgen mörkare totalt sett och cytoplasman hos nervceller, nervfibrer och gliaceller samfärgas. Samfärgning intensifieras nära ett pH på 4,0. Därför krävs en längre differentieringstid.


  • pH3.0

  • pH4.7

typer av cresyl violett

tre typer av cresyl violett används för närvarande i laboratoriet för neuropatologi.

Produktnamn tillverkare tillgänglighet
Cresyl Violet Acetate EM SCIENCE slut i lager
Cresyl Violet acetate Sigma tillgänglig kommersiellt
cresyl Violet (acetat) Merck tillgänglig kommersiellt

differentieringstiden varierar beroende på cresyl Violet produkten

färglösningens pH varierar beroende på produkten. Därför skiljer sig färgningsmetoderna också. Det är viktigt att vara medveten om att den tid som krävs för differentiering skiljer sig mellan produkterna. Oavsett vilken produkt som används kan emellertid samma färgade kromatiska bild i slutändan erhållas genom differentiering och observation av provet under ett mikroskop.

Produktnamn tillverkare pH av 0,1% cresyl violett lösning Differentieringstid i 95% etanol
Cresyl Violett acetat EM SCIENCE 3.5 i 10 till 30 sekunder
Cresyl Violett acetat SIGMA 4,7 10min ungefär
Cresyl violett (acetat) MERCK 4,8 10min approximativt

XXL pH kan justeras från 3,5 till ca 3,8 genom att tillsätta en lämplig mängd 10% ättiksyra till sigma-och Merck-färglösningarna, vilket förkortar den tid som behövs för differentiering med 95% etanol. Det rekommenderas dock inte att återanvända denna lösning.

viktiga överväganden angående differentiering

utför differentiering tills bakgrunden blir vit. Att ha nukleolerna och kärnmembranen i nervcellkärnorna klara och kromatin svagt färgade är idealisk.

Cresyl Violett acetat (Sigma C5042) pH4.7 användes i båda sektionerna.

vänster fotografi: 95% etanoldifferentiering i endast 10 sekunder. Med otillräcklig differentiering färgas hela nervcellen blå, vilket gör det omöjligt att identifiera kärnan och Nissl-kropparna.

höger fotografi: 95% etanoldifferentiering i 10 minuter. Tillräcklig differentiering gör det möjligt att tydligt differentiera kärnorna och nissl-kropparna hos neuroner.