laboratoriediagnos

differentialdiagnos bland andra amebae

patogena Entamoeba-arter måste differentieras från andra intestinala protozoer, såsom den icke-patogena amebaen (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) och flagellaten Dientamoeba fragilis. Morfologisk differentiering bland dessa är möjlig, men potentiellt komplicerad, baserat på morfologiska egenskaper hos cyster och trofozoiter.

i kultur, differentiella tillväxtegenskaper hos E. moshkovskii kan hjälpa till att skilja det från andra arter, men odlingsmetoder har viktiga begränsningar (saknas blandade infektioner, förorening, arbetsintensiv, begränsad tillgänglighet). Historiskt sett baserades differentiering av E. dispar och E. histolytica på isoenzymatisk eller immunologisk analys, men dessa gynnas inte längre med tillgången till effektiva molekylära metoder och utförs sällan. Molekylära metoder rekommenderas för närvarande för att skilja patogena Entamoeba-arter.

mikroskopisk detektion

mikroskopisk identifiering av cyster och trofozoiter i avföringen är den vanliga metoden för att diagnostisera patogena Entamoeba-arter. Detta kan åstadkommas med hjälp av:

• färsk avföring: våta fästen och permanent färgade preparat (t.ex. trikrom).
• koncentrat från färsk avföring: våta fästen, med eller utan jodfläck, och permanent färgade preparat (t.ex. trikrom). Även om det är användbart för cyster, kan koncentrationsmetoder inte vara användbara för att demonstrera trofozoiter.
• mikroskopi har också en låg känslighet om endast ett avföringsprov analyseras och kräver personal utbildad i morfologisk diagnos. Insamling och analys av tre på varandra följande avföringsprover inom tio dagar förbättrar risken för upptäckt. E. dispar, E. histolytica och E. moshkovskii kan inte särskiljas baserat på morfologi.

trofozoiter kan också identifieras i aspirat eller biopsiprover erhållna under koloskopi eller kirurgi.

Immunodiagnos

enzymimmunanalys (EIA) kit för Entamoeba histolytica antikroppsdetektering samt EIA kit för antigendetektering är kommersiellt tillgängliga i USA. Antikroppsdetektering är mest användbar hos patienter med extraintestinal sjukdom (dvs. amebisk leverabscess) när organismer i allmänhet inte finns vid avföringsundersökning. Antikroppsdetektering är av begränsat diagnostiskt värde på patienter från mycket endemiska områden som sannolikt har tidigare exponering och serokonversion, men kan vara mer användbar på patienter från områden där patogen Entamoeba spp. är sällsynta. Antigendetektering under aktiva infektioner kan vara användbart som ett komplement till mikroskopisk diagnos vid detektering av parasiter och kan skilja mellan patogena och icke-patogena infektioner.

Antikroppsdetektering

det indirekta hemagglutinationstestet (Iha) har ersatts av kommersiellt tillgängliga MKB-testsatser för rutinmässig serodiagnos av amebiasis. Antigen består av ett rålösligt extrakt av axeniskt odlade organismer. MKB-testet detekterar antikroppsspecifik för E. histolytica hos cirka 95% av patienterna med extraintestinal amebiasis, 70% av patienterna med aktiv tarminfektion och 10% av asymptomatiska personer som passerar cyster av E. histolytica. Om antikroppar inte kan detekteras hos patienter med en akut presentation av misstänkt amebisk leverabscess, ska ett andra prov dras 7-10 dagar senare. Om det andra provet inte visar serokonversion, bör andra medel övervägas. Detekterbar E. histolytica-specifika antikroppar kan kvarstå i flera år efter framgångsrik behandling, så närvaron av antikroppar indikerar inte nödvändigtvis akut eller aktuell infektion. Dessutom är patienter som har bott i mycket endemiska områden sannolikt seropositiva på grund av tidigare exponeringar. Specificitet är 95% eller högre: falskt positiva reaktioner uppträder sällan.

även om detektion av IgM-antikroppar specifika för E. histolytica har rapporterats är känsligheten endast cirka 64% hos patienter med nuvarande invasiv sjukdom. Flera kommersiella MKB-kit för antikroppsdetektering finns i USA. Inga kommersiella antikroppsdetekteringssatser finns för E. dispar eller E. moshkovskii eller E. Bangladesh.

Antigendetektering

Antigendetektering kan vara användbar som ett komplement till mikroskopisk diagnos vid detektering av parasiter och för att skilja mellan patogena och icke-patogena infektioner. Verktyget är dock begränsat för frysta eller fasta prover och för prover efter behandling. Nya studier indikerar förbättrad känslighet och specificitet av fekala antigenanalyser med användning av monoklonala antikroppar som kan skilja mellan E. histolytica och E. dispar-infektioner. Minst ett kommersiellt kit finns tillgängligt som endast upptäcker patogen E. histolytica-infektion i avföring; flera kit finns tillgängliga som upptäcker E. histolytica-antigener i avföring men utesluter inte E. dispar-infektioner.

molekylär diagnos

konventionell PCR

i referensdiagnoslaboratorier är molekylär analys med konventionella PCR-baserade analyser den metod som valts för att skilja mellan E. histolytica och E. dispar. Vissa analyser kan också skilja E. moshkovskii.

realtids-PCR

en Taqman realtids-PCR-metod har validerats vid CDC och används för differentiell laboratoriediagnos av amebiasis. Analysen riktar sig mot 18S rRNA-genen med artspecifika TaqMan-sonder i ett duplexformat, vilket gör det möjligt att upptäcka både E. histolyrica och E. dispar i samma reaktionskärl.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Jämförelse av realtids PCR-rationaler för differentiell laboratoriediagnos av amebiasis. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

Laboratoriesäkerhet

cystor i ofixerade avföringsprover är potentiellt infektiva. Observera standardföreskrifter som gäller för avföringsprover: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.