analiza sângelui și a măduvei

limitările asociate generării suspensiilor celulare nu se aplică pacienților cu afectare a sângelui sau a măduvei prin tulburări limfoproliferative cronice. Subclasificarea acestor leziuni se bazează în mare măsură pe citometria în flux.42,44,49-51 leucemia limfocitară cronică (CLL) este definită în esență de caracteristicile sale imunofenotipice. Alte tulburări limfoproliferative cu celule B au fenotipuri caracteristice, dacă nu întotdeauna absolut specifice. Limfomul cu celule de manta poate fi adesea recunoscut în faza leucemică, deși cel mai specific marker, ciclina D1, este foarte dificil de detectat prin flux cu tehnicile actuale. Leucemia cu celule păroase, dimpotrivă,are nu numai o caracteristică,ci și un fenotip foarte specific42, 50, 52; ocazional, pacienții cu pancitopenie inexplicabilă pot fi determinați să aibă leucemie cu celule păroase atunci când sunt identificate doar un număr mic de celule sanguine cu fenotipul clasic52 (Fig. 15-3).

citometria în flux poate detecta, de asemenea, factori de prognostic la persoanele cu LLC. Recunoscând că LLC poate fi împărțită într-un tip de prognostic slab asociat cu genele regiunii imunoglobulinei v nemutate și un fenotip mutant cu prognostic mai bun, mai multe studii au încercat să identifice surogatele de flux. Primul marker găsit a fi prognostic a fost CD38, deși corelația fie cu starea mutațională, fie cu prognosticul este imperfectă.53,54 proteina kinază asociată lanțului Zeta 70 (ZAP 70) pare a fi un marker surogat mai bun, deși nu este perfect; cu toate acestea, oferă informații prognostice.55-57 cu toate acestea, chiar dacă acest test este disponibil pe scară largă, în special în laboratoarele comerciale de referință, limitele dintre pozitiv și negativ pot fi arbitrare și, prin urmare, pot exista variabilități semnificative ale rezultatelor între laboratoare.Au fost făcute 58,59 încercări de îmbunătățire a reproductibilității, 60 dar nu este întotdeauna sigur că un anumit test va da aceleași rezultate ca și cele din literatura clinică publicată. Alte încercări au fost făcute pentru a defini subseturi semnificative prognostic de pacienți cu LLC folosind alte combinații de markeri,61 dar aceste combinații nu au fost adoptate în practica de rutină.

valoarea primară a citometriei în flux în evaluarea leucemiilor cronice este capacitatea sa de a demonstra clonalitatea în populațiile de celule B pe baza expresiei restrânse a unui tip de lanț ușor de imunoglobulină. Această caracteristică este deosebit de valoroasă în evaluarea pacienților cu limfocitoză inexplicabilă62,63 și,de asemenea,este utilă pentru determinarea stadiului pacienților cu limfom non-Hodgkin cu celule B, 64, 65, deoarece prezența a doar 0,5% până la 1% dintr-o populație clonală de celule B, sau chiar mai puțin, poate fi demonstrată în măduva sau sângele unor pacienți. Cu toate acestea, sensibilitatea ridicată a citometriei în flux pentru detectarea populațiilor clonale a demonstrat populații mici de celule B clonale la unii pacienți fără limfom evident sau leucemie.66 astfel, găsirea unei clone de măduvă mică trebuie interpretată cu precauție în absența altor dovezi de limfom, analog cu găsirea unei gamapatii monoclonale la un pacient fără dovezi de mielom.

citometria în flux a fost, de asemenea, utilizată pe scară largă în studiul pacienților cu mielom. O limitare a citometriei în flux este că celulele plasmatice sunt subreprezentate pe aspirații de măduvă studiați prin flux comparativ cu prevalența celulelor pe filme sau în biopsii; ca urmare, această tehnică nu poate fi utilizată pentru a cuantifica celulele mielomului și, prin urmare, nu poate înlocui morfologia atunci când se aplică criterii tradiționale de diagnostic. Cu toate acestea, celulele plasmatice au un fenotip caracteristic,incluzând expresia foarte strălucitoare a CD38 și expresia CD138,67, 68 și astfel sunt ușor de recunoscut. Cu ajutorul tehnicilor de permeabilizare a membranei, este ușor să se demonstreze restricția lanțului ușor al imunoglobulinei citoplasmatice (Ig).67 este mai important ca celulele plasmatice neoplazice să aibă de obicei fenotipuri anormale. Deși nu există o singură anomalie fenotipică specifică care să permită distincția între gamopatia monoclonală benignă și mielomul, citometria în flux poate fi totuși utilă pentru a distinge mielomul de gamopatia monoclonală cu semnificație nedeterminată sau pentru a prezice progresia gamapatiei monoclonale cu semnificație nedeterminată sau mielomul mocnit.69-71 mai mult, evaluarea citometrică în flux a celulelor plasmatice anormale la momentul diagnosticării mielomului s-a dovedit a avea semnificație prognostică.72 în plus, detectarea celulelor plasmatice circulante sau persistența unui fenotip anormal după tratament, inclusiv detectarea bolii reziduale minime, este predictivă a rezultatului la pacienții cu mielom.69,71,73-76

Clonalitatea populațiilor de celule T poate fi demonstrată și prin citometrie în flux, deși metoda este mai complexă și nu este la fel de disponibilă ca cea utilizată pentru celulele B. Această tehnică se bazează pe demonstrarea restricției utilizării genei v-beta în leucemiile cu celule T.77-79 malignitățile celulelor T prezintă, de asemenea, adesea fenotipuri anormale ale celulelor T, care cel mai adesea se caracterizează prin pierderea unui antigen pan-t normal sau expresia unui antigen al celulelor T la intensitate anormală.44,80,81 deoarece anumite populații mici, neobișnuite și chiar clonale de celule T pot fi observate în număr mic în condiții non-neoplazice, această tehnică are o sensibilitate mai limitată decât demonstrarea unei populații clonale de celule B. Cu toate acestea, atunci când celulele T anormale reprezintă mai mult de un procent foarte mic de celule, citometria cu flux multiparametru le demonstrează cu ușurință și joacă un rol semnificativ în clasificarea acestor tumori mai puțin frecvente.