rezumat

studiul de față a fost conceput pentru a evalua stresul oxidativ, precum și efectul terapeutic al Agaricus blazei Muril (A. Blazei) la șobolani cu diabet indus de streptozotocină. Am folosit 25 de șobolani Wistar, iar DM a fost indusă prin injectarea streptozotocinei (70 mg/Kg i.p.). Agaricus blazei Muril a fost administrat zilnic începând cu 40 de zile de la debutul bolii. A. Blazei a fost testat ca extract apos pentru compoziția sa fitochimică, iar activitatea sa antioxidantă in vitro a fost, de asemenea, evaluată. Activitățile de lipoperoxidare (LPO) și superoxid dismutază (SOD), catalază și glutation peroxidază au fost măsurate în țesutul pulmonar, precum și prezența sintazei de oxid nitric inductibil (iNOS), prin imunohistochimie. De asemenea, a fost efectuat un studiu anatomopatologic. Screeningul fitochimic al lui A. Blazei a detectat prezența alcaloizilor și saponinelor. Extractul a prezentat o activitate antioxidantă semnificativă în testele DPPH-scavenging și hipoxantină/xantină oxidază. LPO pulmonară a crescut la animalele diabetice (; ) comparativ cu grupul de control (), urmată de o reducere a grupului tratat cu A. Blazei (; ). iNOS a fost găsit crescut în plămâni la șobolanii diabetici și redus în grupul tratat cu A. Blazei. Țesutul pulmonar la șobolanii diabetici a prezentat modificări oxidative legate de tratamentul cu streptozotocină. Tratamentul cu A. Blazei a redus în mod eficient stresul oxidativ și a contribuit la recuperarea țesuturilor.

1. Introducere

diabetul zaharat (DM) este o boală metabolică endocrină cu incidență și relevanță clinică în creștere, cu rate ridicate de morbiditate și mortalitate . Printre complicațiile sale cronice se numără tulburările vasculare micro și macro legate de sistemele renale, cardiovasculare și nervoase . Cu toate acestea, în ultimele două decenii, au fost raportate și modificări ale funcției respiratorii în studiile clinice și experimentale. Scăderi ale funcției pulmonare de-a lungul anilor, legate de scăderea măsurătorilor volumelor și capacității pulmonare, au fost evidențiate la pacienții diabetici cu control metabolic afectat . Modificările structurale ale membranei bazale a endoteliului capilar pulmonar sunt, de asemenea, prezente în DM, cu o îngroșare a membranei Alveole-capilare și reducerea capacității difuzionale . Mai mult, pacienții diabetici sunt mai susceptibili la infecții pulmonare, în special tuberculoza, care are o incidență de patru ori mai mare în această populație . Deși toate aceste modificări au fost evidențiate în studii clinice și experimentale, puține studii au investigat principalele mecanisme fiziopatologice care implică complicații pulmonare legate de DM.

există 4 căi asociate cu complicațiile cronice ale DM, și anume calea poliolului, activarea protein kinazei C (PKC), fluxul crescut în calea hexozaminei și calea produselor finale avansate de glicozilare (AGE). Deși prezintă diferit în fiecare caz, stresul oxidativ (OS) este implicat în cele patru căi citate mai sus .

există o mulțime de dovezi care arată că creșterea oxidului nitric (NO), formată prin acțiunea sintazei de oxid nitric inductibil (iNOS) este unul dintre factorii responsabili atât pentru patogeneză, cât și pentru complicațiile rezultate din DM . Utilizarea antioxidanților exogeni poate reprezenta un mare potențial terapeutic pentru tratamentul DM

basidiomicetul Agaricus blazei Murill (A. Blazei), cunoscut popular sub numele de „ciupercă solară”, este originar din Brazilia și cultivat pe scară largă în Japonia datorită proprietăților sale medicinale. Această ciupercă este utilizată în mod tradițional în tratamentul aterosclerozei, hepatitei, hiperlipidemiei, dermatitei și cancerului și s-a dovedit că are efecte imunomodulatoare și antimutagene atât in vivo, cât și in vitro. Polizaharidele-glican și glican-glican sunt responsabile pentru funcția de stimulare imunologică și antitumorală .

A. Blazei s-a dovedit deja a fi benefic în rezistența la insulină legată de diabetul de tip 2, dar niciun studiu nu a arătat potențialul antioxidant al A. Blazei in vivo în DM . Astfel, acest studiu a fost conceput pentru a evalua stresul oxidativ, precum și efectul terapeutic al A. Blazei în țesutul pulmonar al animalelor cu DM indus de streptozotocină.

2. Metode

2.1. Ciuperci

ciupercile uscate la aer din specia Agaricus blazei Murill (tip C) au fost un cadou de la Dr.Luiz Ant Inktiknio Graciollo, Departamentul de inginerie al Universității de Stat din s Inktiko Paulo (UNESP), Brazilia.

2.2. Prepararea extractului apos A. blazei

părțile uscate la aer (100 g) au fost măcinate și apa extrasă a fost preparată prin perfuzie (1/10 ciupercă/solvent). Infuzia a stat la temperatura camerei timp de 30 de minute. După răcire și filtrare, extractul a fost congelat și concentrat prin liofilizare timp de cinci zile peste noapte, pentru a obține extractul apos A. blazei.

2.3. Produse chimice și reactivi

2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH), hipoxantină, xantin oxidază, trolox și acid salicilic au fost achiziționate de la Sigma (St.Louis, SUA).

2.4. Screening fitochimic

analiza fitochimică (flavonoide, tanini, antrachinone, alcaloizi, saponine, cumarine și glicozide cardiace) A. blazei a fost efectuată conform metodelor descrise de Harborne . Analizele cromatografiei în strat subțire au fost efectuate în urma sistemelor și dezvoltatorilor indicați de Wagner și Bladt .

2.5. Testul hipoxantină / xantină oxidază

metoda utilizată pentru a testa capacitatea de curățare a radicalilor hidroxil a extractelor s-a bazat pe metoda lui Owen și colab. . Pe scurt, extractul a fost dizolvat în tamponul de testare(hipoxantină, Fe (III), EDTA și acid salicilic) la o concentrație de 2,0 mg/mL și diluat corespunzător (în trei exemplare) în tampon de testare la un volum final de 1.0 mL oferind un interval de 0,1-2,0 mg/mL. A fost adăugată o alicotă de 5 L de xantin oxidază dizolvată în 3,2 m (NH4)2SO4 pentru a iniția reacția. Eprubetele de probă au fost incubate timp de 3 ore la 37 CTC, moment în care reacția a fost completă. O alicotă de 30 L din amestecul de reacție a fost analizată de HPLC folosind condiții cromatografice descrise de Owen și colab. . Analiza cromatografică s-a realizat cu ajutorul unui gradient pe bază de metanol/apă/acid acetic cu o coloană de fază inversă de la zimbbondapak C18 și detecție la 325 nm. Echipamentul HPLC avea un modul de separare 2695 și un detector UV 2487. Hidroxilarea acidului salicilic și a hipoxantinei a fost monitorizată la A = 325 și, respectiv, a = 278 nm. Cantitatea de dihidroxifenoli (acid 2,5-dihidroxibenzoic și acid 2,3-dihidroxibenzoic) (2,5-DHBA și 2,3-DHBA) produsă de atacul radicalului hidroxil (OH•) asupra acidului salicilic a fost determinată din curbele standard preparate cu dihidroxifenolii Puri respectivi.

2.6. Testul de curățare a DPPH

curățarea radicalului liber DPPH a fost măsurată folosind o metodă modificată descrisă de Yamaguchi și colab. în care diferitele extracte de plante metanolice au fost adăugate la tamponul Tris-HCl (100 mM), pH 7,0, conținând 250 mM DPPH dizolvat în metanol. Au fost testate cel puțin șase diluții diferite ale fiecărui extract și lăsate să stea 20 de minute în întuneric, înainte ca absorbanța să fie măsurată la 517 nm folosind un spectrofotometru Shimadzu model UV-1602pc (Kyoto, Japonia). Experimentul a fost realizat în trei exemplare. Activitatea antioxidantă (AOA) a fost exprimată ca IC50 (concentrație inhibitoare în g/mL de probe sau controale pozitive necesare pentru a reduce absorbția DPPH cu 50% comparativ cu controlul negativ). Cu cât IC50 este mai mic, cu atât este mai mare AOA .

2.7. Animale și protocol Experimental

protocolul experimental utilizat a respectat normele stabilite de Comitetul de cercetare etică și sănătate al Grupului de cercetare și Studii Postuniversitare al Spitalului de Cl din Porto Alegre, precum și principiile de cercetare care implică animale (NAS). S-au folosit doar șobolani masculi Wistar, obținuți din colonia de reproducere a Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare din cadrul Institutului de cercetare și dezvoltare. Greutatea medie a animalelor la începutul studiului a fost de 200-300 de grame. Acestea au fost ținute sub un ciclu de lumină/întuneric de 12 : 12 ore (lumină de la 7 A.M. la 7 p. m.) într-un mediu cu temperatură controlată (22 XT. 4 XT. c).

DM a fost indusă printr-o singură injecție de streptozotocin i.p. (STZ, Sigma Chemical Company, St .Louis, MO, EUA) la o doză de 70 mg / Kg greutate corporală. STZ a fost dizolvat în tampon citrat de sodiu (0,1 M, pH 4.5) și administrat în regiunea abdominală stângă a animalului la aproximativ 10 minute după dizolvare în soluția tampon. Animalele din grupul de control au primit doar NaCl 0,9% i. p.la același volum al tamponului utilizat pentru dizolvarea STZ. Extractul A. blazei a fost diluat la concentrația de 0,1 g/mL (10%) într-o soluție de apă distilată și lăsat timp de 2 ore la temperatura camerei . Calea de administrare a fost gavajul gastric cu o soluție finală de 2 mL și tratamentul a fost inițiat începând cu a 40-a zi de inducere a diabetului zaharat. Animalele au fost randomizate în diferite grupuri: control (CO), diabetic tratat cu NaCl (DM) și diabetic tratat cu A. blazei (DM + A. blazei). Probele de sânge au fost colectate din plexul retro-orbital cu o zi înainte de inducție și la 2 și 30 de zile după începerea experimentului. La sfârșitul celor 60 de zile de studiu, animalele au fost induse la eutanasie prin exsanguinare, după anestezie cu xilasină și ketamină. Sângele din plexul retro-orbital a fost prelevat și plămânul drept a fost disecat și păstrat în formaldehidă 4% pentru analize histologice. Plămânul stâng a fost îndepărtat și congelat la -80 CTC pentru analize suplimentare.

2.8. Analize serice

probele de sânge au fost plasate într-o eprubetă cu heparină (Lichemină) pentru a evita coagularea. Materialul a fost apoi centrifugat la 1.800 g timp de 15 minute. Precipitatul a fost aruncat și plasma îndepărtată.

pentru determinarea nivelului de glucoză, colesterol și trigliceride s-a utilizat testul enzimatic colorimetric (Kit Labtest, Bio Diagnoticstica) și s-a măsurat absorbanța în spectrofotometru (CARY 3e-UV-vizibil Spectrofotometru Varian). Animalele cu o concentrație de glucoză peste 250 mg/dL au fost considerate diabetice.

2.9. Analize biochimice ale stresului oxidativ și ale testului Antioxidant

plămânii au fost omogenizați cu 9 mL tampon fosfat (KCL 140 mM, fosfat 20 mM, pH 7,4) pe gram de țesut. Concentrația proteică în aceste omogenate pulmonare a fost determinată utilizând o soluție standard de albumină bovină conform Lowry și colab. .

Lipoperoxidarea pulmonară a fost determinată prin metoda substanțelor reactive ale acidului tiobarbituric (TBA-RS) .activitatea superoxid dismutazei (SOD) în țesutul pulmonar a fost determinată folosind o tehnică bazată pe inhibarea formării adrenocromului în autoxidarea epinefrinei . Activitatea catalazei (CAT) în țesutul pulmonar a fost determinată așa cum este descris în altă parte și determinarea peroxidazei glutation dependente de seleniu în țesutul pulmonar a fost obținută printr-o tehnică constând în măsurarea oxidării NADPH de către glutation reductază .

2.10. Studiu histologic

pentru analiza histologică probele au fost încorporate în parafină de două ori. Folosind un Microtom, blocurile de parafină au fost tăiate în secțiuni seriate de 3 M. În faza de colorare, diapozitivele au fost scufundate în hematoxilină-eozină și picrosirius. În faza de deshidratare, structurile au trecut prin trei recipiente cu alcool absolut și două recipiente cu xilol. Citirea a fost efectuată cu microscopie luminoasă (Nikon Labophot) la 100. Analiza a fost efectuată de 2 patologi care nu cunoșteau detaliile studiului.

2.11. Detectarea imunohistochimică a inos

reacțiile imunohistochimice au fost efectuate în secțiunile țesutului pulmonar prin tehnica complexului streptavidin-biotin peroxidază (StreptABC, DAKO). Lamelele au fost acoperite anterior cu o soluție de silan (APTS, Sigma) diluată în acetonă 4%. Secțiunile groase de 3 m au fost obținute folosind un Microtom mecanic. Secțiunile au fost apoi deparaffinizate și scufundate succesiv în xilol și etanol și supuse recuperării antigenice prin iradierea căldurii în oala sub presiune (Eterna, Nigro) folosind tampon citrat (10 mM, pH 6,0) timp de 15 minute. Blocarea peroxidazei a fost efectuată utilizând o soluție de peroxid de hidrogen la 3%, urmată de incubarea cu anticorp primar împotriva NOS-2 (iNOS, 1 : 40, Santa Cruz). Reacțiile au fost marcate cu soluție de diaminobenzidină (Dab, Sigma) la 60 mg% și contracarate cu Hematoxilina lui Harris (Merck). Pentru fiecare reacție a fost utilizat un control pozitiv pentru țesutul despre care se știa că este pozitiv pentru anticorpul testat. De asemenea, au fost utilizate două controale negative, primul prin absența anticorpului primar și al doilea prin eliminarea anticorpului secundar în timpul etapelor de reacție. Cazurile au fost considerate inos-pozitive atunci când colorația brună de intensitate cel puțin moderată a fost vizibilă în citoplasma celulară și în mai mult de 10% din celule.

2.12. Analiza Statistica

datele sunt prezentate ca deviatie standard medie (sd) si au fost analizate prin intermediul softului statistic SPSS 15.0. Variabilele au fost testate pentru normalitate prin testul Kolmogorov-Smirnov. Analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) a fost utilizată pentru diferențele intergrup. Testul post-hoc Student Newman-Keuls a fost utilizat pentru variabilele parametrice și Kruskal-Wallis pentru cele neparametrice. Nivelul de semnificație folosit a fost .

3. Rezultate

3.1. Analizele fitochimice

analizele fitochimice ale lui A. blazei au indicat prezența saponinelor și alcaloizilor. Nu au fost detectați alți metaboliți secundari, cum ar fi antrachinonele, glicozidele cardiace, cumarinele, flavonoidele, acizii fenolici și taninurile.

3.2. Hipoxantină / xantin oxidază in Vitro

activitatea antioxidantă in vitro a extractului a fost determinată prin monitorizarea producției de acizi hidroxil benzoici (DHBA) ca produs al atacului radical hidroxil asupra acidului salicilic în testul hipoxantină-xantină oxidază. Reducerea produșilor de oxidare totală în funcție de concentrația extractului apos A. blazei adăugat la test a dus la o capacitate antioxidantă in vitro într-o manieră dependentă de doză. Extractul apos de A. blazei a redus formarea ambelor specii DHBA la 45.2% în cea mai mare concentrație utilizată (2 mg/mL). Valoarea IC50 a fost calculată și s-a constatat că este de 0,99 mg/mL. Un al doilea tip de ciupercă (Lentinula edodes) pentru care autorii nu au găsit prezența alcaloizilor a fost utilizat ca probă de control (IC50 de 1,95 mg/mL). Trolox (vitamina E) a fost utilizat ca martor pozitiv și a prezentat o IC50 de 0,34 mg/mL (Figura 1).

Figura 1

inhibarea generării de specii reactive de oxigen prin extracte apoase ale părților aeriene ale Agaricus blazei (), Lentinula edodes () și Trolox, utilizate ca martor pozitiv () utilizând sistemul hipoxantină / xantin oxidază. Punctele de date sunt prezentate ca medie a SD-ului de la 0XT, = 3.

3.3. DPPH-test de curățare

efectul de curățare a radicalilor liberi al extractului apos A. blazei, L. extractul apos edodoes, precum și troloxul, ca control pozitiv, au fost testate, folosind testul de curățare a radicalilor liberi DPPH . Valorile IC50 pentru extractul apos de A. blazei și pentru extractul de L. edodes sunt prezentate în tabelul 1. Rezultatele efectului de curățare a radicalilor liberi al trolox (IC50 = 0,02 mg/mL), utilizat ca control pozitiv, au fost utilizate pentru validarea testului. Deși capacitățile de curățare a radicalilor liberi ale extractelor au fost mai mici (concentrația mai mare este necesară pentru a reduce absorbanța DPPH cu 50%) decât efectul trolox, A. extractul apos blazei (cu cel mai mare conținut de flavanonă) a prezentat o activitate antioxidantă promițătoare cu un IC50 de 1,77 mg/mL. L. edodes, pe de altă parte, a avut cea mai mică activitate de curățare (IC50 = 3,22 mg/mL), ceea ce este în concordanță cu absența alckloidelor la această specie de ciuperci.

probă inhibarea DPPH (%) concentrație 0,1 g/ml 0,25 mg/ml 0.5 mg/mL 1 mg/mL 2 mg/mL IC50 (mg/mL) Trolox 91.27 93.53 96.71 99.03 99.89 0.02 ± 0.00 Agaricus blazei 7.28 10.77 17.09 46.32 48.81 1.77 ± 0.08 Lentinula edodes 2.19 4.68 8.33 18.56 30.63 3.22 ± 0.12

deviația standard medie a trei determinări individuale. Rezultatele s-au bazat pe valorile măsurate la 20 de minute. Trolox a fost folosit ca control pozitiv. * DPPH: 2,2-difenil-1-picrilhidrazil.

Tabelul 1

inhibarea valorilor DPPH*, IC50 pentru testul DPPH al extractelor apoase de Agaricus blazei și Lentinula edodes ciuperci și trolox.

3.4. Greutatea corporală și analizele serice

greutatea corporală a animalelor diabetice a fost semnificativ redusă, iar animalele tratate cu A. Blazei au slăbit și mai mult (Tabelul 2). Extractul A. Blazei a redus aparent glicemia la șobolanii diabetici (), dar curba glicemică a fost similară la animalele diabetice și tratate. Cu toate acestea, A. Blazei a redus semnificativ nivelul total de colesterol și trigliceride (). Grupurile DM și DM + A. Blazei au avut dimensiuni diferite ale eșantionului datorită mortalității mai mari a animalelor din grupul DM în timpul experimentului.

N Weight (g) Glucose (mg/dL) Total Cholesterol (mg/dL) Triglycerides (mg/dL) CO 5 442.00 ± 10.95 244.17 ± 68.01 28.35 ± 4.62 61.33 ± 33.43 DM 8 306.22 ± 32.11† 482.37 ± 36.81* 42.88 ± 6.44* 161.00 ± 76.80## DM + A. Blazei 12 282.00 44.11# 468.19 62.46# 33.99 5.23** 45.87 10.61** datele apar la M A. Co: control, d: diabet zaharat în D + A. blazei: diabet zaharat+ Agaricus blazei. CO versus de. D versus D + A. Blazei. CO versus de. , D versus D + A. Blazei. CO versus de.

Tabelul 2

modificări ale greutății corporale și ale nivelurilor plasmatice ale glucozei, colesterolului și trigliceridelor.

3.5. Analiza biochimică și stresul oxidativ

A. Blazei au redus semnificativ () nivelurile de lipoperoxidare determinate de TBA-RS (Tabelul 3). Cu toate acestea, activitatea enzimelor antioxidante SOD și CAT nu a prezentat diferențe între grupuri. Activitatea enzimei GPx a fost semnificativ crescută în grupul diabetic și redusă în grupul tratat cu A. Blazei ().

TBARS (nmoles/mg of protein) SOD (U/mg de proteín) CAT (pmoles/mg de protein) GPx (nmoles/mg de protein) CO 0.18 ± 0.02 76.33 ± 3.39 0.10 ± 0.04 0.41 ± 0.07 DM 0.43 ± 0.09* 69.32 ± 11.73 0.18 ± 0.07 1.10 ± 0.53* DM + A. Blazei 0.33 ± 0.04** 74.84 ± 8.75 0.15 ± 0.03 0.45 ± 0.09**

Data appear as mean ± SD. CO: Control, DM: Diabetes Mellitus and DM + A. Blazei: Diabetes Mellitus+ Agaricus blazei. CO versus DM. DM versus DM + A. Blazei.

Table 3

Biochemical analyses of oxidative stress in lung tissue.

3.6. Analiza histologică

diabetul zaharat indus de STZ a provocat leziuni vasculare grave țesutului pulmonar (Figura 2(c)), unde au fost evidențiate și modificări alveolare, cum ar fi ruptura septului. Colorarea Picrosirius a evidențiat o expansiune a țesutului conjunctiv în spațiul alveolocapilar al grupului diabetic (Figura 2(d)) și o revenire aparentă a acestui model în grupul tratat cu Ab (Figura 2(f)).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

Figure 2 histologia țesutului pulmonar colorat de HE (A, c și e) și picrosirius (b, d și f). Mărire 100: (a) și (b): Control, (c) și (d): diabet zaharat, (e) și (f): diabet zaharat tratat cu Agaricus blazei.

3.7. Analiza imunohistochimică a iNOS

Figura 3 arată distribuția iNOS în țesutul pulmonar așa cum este detectată prin imunohistochimie. Pata pozitivă în maro observată în epiteliul bronșic pulmonar și endoteliul capilar din grupul DM a indicat pozitivitatea iNOS. colorarea iNOS a fost mai puțin evidentă în A. Blazei group and absent in the CO group.

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figure 3

iNOS immunohistochemistry in lung tissue. Magnification 400: There was no staining in the control group (a); reduction in the treated group (b) versus DM (c).

4. Discuție

rezultatele efectului de curățare a radicalilor liberi al extractului apos A. blazei în testul hipoxantină / xantin oxidază in vitro și în testul de curățare a radicalilor liberi DPPH au arătat o activitate antioxidantă semnificativă in vitro. În ambele teste extractul a exprimat o activitate antioxidantă mai mare, în comparație cu extractul apos de L. edodes, care este o altă specie de ciupercă și care prezintă doar saponine, dar nu alcaloizi, sau flavonoide sau tanini. A fost sugerat de Ribeiro și colab. că activitatea antioxidantă ar putea fi legată de prezența alcaloizilor în ciupercă. Cu alte cuvinte, concentrațiile mai mari de alcaloizi generează o activitate antioxidantă mai bună .

principala constatare a acestui studiu a fost reducerea lipoperoxidării pulmonare la șobolani cu diabet indus de streptozotocină după tratamentul cu Agaricus blazei. Studiile anterioare au arătat un efect de reducere a glicemiei, care scade rezistența la insulină și îmbunătățește eliberarea celulelor pancreatice . Cu Toate Acestea, A. Tratamentul Blazei a arătat aici un efect benefic în ceea ce privește variabilele legate de stresul oxidativ, în ciuda faptului că nu reduce hiperglicemia.

Kim și colab. au fost descrise efectele antidiabetogene ale-glucanilor extrași din A. Blazei și oligosacharidele sale hidrolizate enzimatic, evaluând efectele in vitro și in vivo în cultura celulelor pancreatice și la animalele cu diabet indus de streptozotocină. După tratamentul cu-glucani și oligosacharidă, animalele au prezentat reduceri ale glicemiei, trigliceridelor și colesterolului și ale activității aterosclerotice . În studiul nostru, tratamentul a fost efectuat folosind un extract brut de A. Blazei, fără a izola niciunul dintre compușii săi, iar aceasta este probabil explicația lipsei acțiunii antiglicemice.

extractul de A. Blazei a demonstrat activitate antioxidantă in vitro și in vivo, totuși tratamentul a redus semnificativ greutatea animalelor. Acest fapt ar putea fi explicat datorită dozelor mari de extract de A. blazei utilizate în acest experiment, diferit de dozele utilizate în alte studii care nu demonstrează reducerea greutății . Cu toate acestea, într-un studiu de evaluare a toxicității subcronice de 90 de zile a unui extract apos la șobolani, nu au existat modificări consistente legate de tratament ale semnelor clinice, greutății corporale și consumului alimentar la doza de 2654 mg kg-1 pentru șobolanii masculi, o doză mai mare decât cea utilizată în studiul nostru . Au fost necesare mai multe studii pentru a evalua efectul toxic al A. Blazei în aceste doze, cu analiza variabilelor specifice.

GPx a fost semnificativ crescut în grupul diabetic și a fost semnificativ redus după tratamentul cu A. Blazei. Această creștere a GPx poate explica nivelurile diminuate de glutation redus, deoarece este principalul substrat care își reglează activitatea. Gumieniczek și colab. s-a demonstrat că în DM experimental stresul oxidativ pulmonar este prezent datorită reducerii activității enzimei antioxidante și creșterii lipoperoxidării. Astfel de modificări sunt mai semnificative după săptămâni după inducție. În timpul DM există o scădere a activității Cu,Zn-SOD și o creștere a activității catalazei . În studiul nostru, nici SOD, nici activitatea catalazei nu au fost modificate în nici unul dintre grupurile diferite. O posibilă explicație pentru descoperirile noastre care diferă de cele ale Gumieniczek este că în studiul nostru analiza enzimelor antioxidante a fost efectuată mai devreme.

în modelul nostru experimental au fost observate numeroase modificări histologice în sistemul pulmonar. Aceste modificări sunt în concordanță cu cele raportate în literatura de specialitate , în special în ceea ce privește creșterea țesutului conjunctiv și îngroșarea laminei bazale observate prin tehnica colorării picrosirius. După tratamentul cu A. Blazei, astfel de modificări au devenit mai puțin evidente. Formarea legării intra – și intermoleculare cu colagen, care rezultă din procesul de glicozilare, duce la modificări structurale ale proteinelor tisulare, cum ar fi creșterea rigidității, rezistența la digestia proteolitică și matricea extracelulară (inclusiv fibronectina, procollagenul XV2, colagenul de tip III, IV și VI și laminina) . În studiul nostru, principalul factor pentru reversia acestui proces după tratamentul cu A. Blazei poate fi explicat prin reducerea daunelor rezultate din stresul oxidativ demonstrat prin reducerea lipoperoxidării pulmonare.

o stare hiperglicemică pe termen lung este legată de modificări ale expresiei iNOS în mai multe țesuturi . În analiza imunohistochimică a studiului nostru, iNOS a crescut semnificativ în țesutul pulmonar al șobolanilor diabetici și a scăzut semnificativ atunci când animalele au fost tratate cu A. Blazei. Studiile au demonstrat că expresia ARNm a oxidului nitric endotelial sintază (eNOS) este redusă, în timp ce iNOS poate fi crescută împreună cu generarea de guanozin monofosfat ciclic (c-GMP) .

într-un studiu publicat recent, lipoperoxidarea, activitatea superoxid dismutazei și distribuția izoformelor inos și eNOS au fost evaluate în țesutul pulmonar al șobolanilor diabetici. S-a observat o creștere a stresului oxidativ concomitent cu creșterea iNOS în țesutul pulmonar al șobolanilor diabetici, care a fost inversată în grupul tratat cu acid antioxidant-lipoic . Aceste constatări sunt în acord cu cele raportate în lucrarea de față, cum ar fi stresul oxidativ crescut observat, modificările pulmonare histologice și efectul unei terapii antioxidante în acest model DM.

studiul de față demonstrează efectul benefic al extractului apos A. Blazei asupra variabilelor de stres oxidativ și morfopatologiei pulmonare în diabetul indus de streptozotocină. Aceste constatări pot contribui semnificativ la o mai bună înțelegere a fiziopatologiei pulmonare în MD. Studiul nostru este, de asemenea, relevant și în ceea ce privește potențialul terapeutic al A. Blazei.

recunoaștere

această lucrare a fost susținută de granturi din partea agențiilor braziliene „Fundo de Incentvo pesquisa e Eventos (FIPE) do Hospital de Cl Inktificas de Porto Alegre (HCPA)” și „laborat Okticrio de Hepatologia e Fisiologia Experimental da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (HCPA / UFRGS)”.