efectuarea HPLC

introducere

cromatografia lichidă de înaltă performanță este în esență o formă extrem de îmbunătățită de cromatografie pe coloană. În loc ca un solvent să fie lăsat să picure printr-o coloană sub gravitație, acesta este forțat să treacă sub presiuni mari de până la 400 de atmosfere. Asta o face mult mai rapidă.

de asemenea, vă permite să utilizați o dimensiune a particulelor mult mai mică pentru materialul de ambalare a coloanei, ceea ce oferă o suprafață mult mai mare pentru interacțiunile dintre faza staționară și moleculele care curg Pe lângă ea. Aceasta permite o separare mult mai bună a componentelor amestecului.

cealaltă îmbunătățire majoră față de cromatografia pe coloane se referă la metodele de detecție care pot fi utilizate. Aceste metode sunt foarte automatizate și extrem de sensibile.

coloana și solventul

în mod confuz, există două variante utilizate în HPLC în funcție de polaritatea relativă a solventului și de faza staționară.

Normal phase HPLC

Acest lucru este, în esență, la fel cum veți fi citit deja în cromatografia în strat subțire sau cromatografia pe coloană. Deși este descris ca fiind” normal”, nu este cea mai frecvent utilizată formă de HPLC.

coloana este umplută cu particule minuscule de silice, iar solventul este non-polar – hexan, de exemplu. O coloană tipică are un diametru interior de 4,6 mm (și poate fi mai mic decât acesta) și o lungime de 150 până la 250 mm.

compușii polari din amestecul trecut prin coloană se vor lipi mai mult de siliciul polar decât compușii nepolari. Prin urmare, cele nepolare vor trece mai repede prin coloană.

Faza inversată HPLC

în acest caz, dimensiunea coloanei este aceeași, dar silica este modificată pentru a o face nepolară prin atașarea lanțurilor lungi de hidrocarburi la suprafața sa-de obicei cu 8 sau 18 atomi de carbon în ele. Se utilizează un solvent polar-de exemplu, un amestec de apă și un alcool, cum ar fi metanolul.

în acest caz, va exista o atracție puternică între solventul polar și moleculele polare din amestecul care trece prin coloană. Nu va fi la fel de multă atracție între lanțurile de hidrocarburi atașate la silice (faza staționară) și moleculele polare din soluție. Prin urmare, moleculele polare din amestec își vor petrece cea mai mare parte a timpului mișcându-se cu solventul.

compușii nepolari din amestec vor tinde să formeze atracții cu grupurile de hidrocarburi din cauza forțelor de dispersie van der Waals. De asemenea, vor fi mai puțin solubili în solvent din cauza necesității de a rupe legăturile de hidrogen pe măsură ce se strecoară între moleculele de apă sau metanol, de exemplu. Prin urmare, petrec mai puțin timp în soluție în solvent și acest lucru îi va încetini pe drum prin coloană.

asta înseamnă că acum moleculele polare vor călători mai repede prin coloană.

Faza inversată HPLC este cea mai frecvent utilizată formă de HPLC.