diagnostic de laborator

diagnostic diferențial printre alte amebae

speciile Entamoeba patogene trebuie diferențiate de alte protozoare intestinale, cum ar fi ameba nepatogenă (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, iodamoeba buetschlii) și dientamoeba fragilis flagelat. Diferențierea morfologică între acestea este posibilă, dar potențial complicată, pe baza caracteristicilor morfologice ale chisturilor și trofozoitelor.

în cultură, caracteristicile diferențiale de creștere ale E. moshkovskii poate ajuta la distingerea acesteia de alte specii, dar metodele de cultură au limitări importante (lipsesc infecțiile mixte, contaminarea, disponibilitatea intensivă a forței de muncă, limitată). Din punct de vedere istoric, diferențierea E. dispar și E. histolytica s-a bazat pe analize izoenzimatice sau imunologice, dar acestea nu mai sunt favorizate de disponibilitatea metodelor moleculare eficiente și sunt rareori efectuate. Metodele moleculare sunt recomandate în prezent pentru a distinge speciile Entamoeba patogene.

detectarea microscopică

identificarea microscopică a chisturilor și trofozoitelor în scaun este metoda comună pentru diagnosticarea speciilor Entamoeba patogene. Acest lucru poate fi realizat folosind:

• scaun proaspăt: suporturi umede și preparate permanent colorate (de exemplu, tricrom).
• concentrate din scaun proaspăt: suporturi umede, cu sau fără pată de iod și preparate colorate permanent (de exemplu, tricrom). Deși sunt utile pentru chisturi, metodele de concentrare pot să nu fie utile pentru demonstrarea trofozoitelor.
• microscopia are, de asemenea, o sensibilitate scăzută dacă este analizată doar o probă de scaun și necesită personal instruit în diagnosticul morfologic. Colectarea și analiza a trei probe consecutive de scaun în decurs de zece zile îmbunătățește șansele de detectare. De asemenea, E. dispar, E. histolytica și E. moshkovskii nu se disting pe baza morfologiei.

Trofozoitele pot fi identificate și în aspirate sau probe de biopsie obținute în timpul colonoscopiei sau intervenției chirurgicale.

Imunodiagnostic

kiturile de imunoanaliză enzimatică (EIA) pentru detectarea anticorpilor Entamoeba histolytica, precum și kiturile EIA pentru detectarea antigenului sunt disponibile comercial în Statele Unite. Detectarea anticorpilor este cea mai utilă la pacienții cu boală extraintestinală (adică abces hepatic amebic) atunci când organismele nu se găsesc în general la examinarea scaunului. Detectarea anticorpilor are o valoare diagnostică limitată la pacienții din zonele extrem de endemice care sunt susceptibile de a avea expunere anterioară și seroconversie, dar poate fi mai utilă la pacienții din zonele în care Entamoeba spp patogenă. sunt rare. Detectarea antigenului în timpul infecțiilor active poate fi utilă ca adjuvant la diagnosticul microscopic în detectarea paraziților și poate distinge între infecțiile patogene și nepatogene.

detectarea anticorpilor

testul de hemaglutinare indirectă (IHA) a fost înlocuit cu truse de testare EIA disponibile în comerț pentru serodiagnosticul de rutină al amebiazei. Antigenul constă dintr-un extract solubil brut de organisme cultivate axenic. Testul EIA detectează anticorpi specifici pentru E. histolytica la aproximativ 95% dintre pacienții cu amebiasis extraintestinal, 70% dintre pacienții cu infecție intestinală activă și 10% dintre persoanele asimptomatice care trec chisturi de E. histolytica. Dacă anticorpii nu sunt detectabili la pacienții cu o prezentare acută a abcesului hepatic amebic suspectat, o a doua probă trebuie extrasă 7-10 zile mai târziu. Dacă al doilea specimen nu prezintă seroconversie, trebuie luați în considerare alți agenți. Detectabil E. anticorpii specifici histolytica pot persista ani de zile după tratamentul cu succes, astfel încât prezența anticorpilor nu indică neapărat o infecție acută sau actuală. De asemenea, pacienții care au trăit în zone extrem de endemice sunt probabil seropozitivi din cauza expunerilor anterioare. Specificitatea este de 95% sau mai mare: reacțiile fals pozitive apar rar.

deși a fost raportată detectarea anticorpilor IgM specifici pentru E. histolytica, sensibilitatea este de numai aproximativ 64% la pacienții cu boală invazivă curentă. Mai multe kituri EIA comerciale pentru detectarea anticorpilor sunt disponibile în Statele Unite. Nu există kituri Comerciale de detectare a anticorpilor pentru E. dispar sau E. moshkovskii sau E. Bangladesh.

detectarea antigenului

detectarea antigenului poate fi utilă ca adjuvant la diagnosticul microscopic în detectarea paraziților și pentru a distinge între infecțiile patogene și cele nepatogene. Cu toate acestea, utilitatea este limitată pentru exemplarele congelate sau fixe și pentru exemplarele post-tratament. Studii recente indică îmbunătățirea sensibilității și specificității testelor antigenului fecal cu utilizarea anticorpilor monoclonali care pot distinge între infecțiile E. histolytica și E. dispar. Este disponibil cel puțin un kit comercial care detectează numai infecția patogenă cu E. histolytica în scaun; sunt disponibile mai multe truse care detectează antigenele E. histolytica în scaun, dar nu exclud infecțiile cu E. dispar.

diagnostic Molecular

PCR convențional

în laboratoarele de diagnostic de referință, analiza moleculară prin teste PCR convenționale este metoda de alegere pentru discriminarea între E. histolytica și E. dispar. Unele teste, de asemenea, pot distinge E. moshkovskii.

PCR în timp Real

o abordare TaqMan în timp real PCR a fost validată la CDC și este utilizată pentru diagnosticul diferențial de laborator al amebiasisului. Testul vizează gena ARNr 18S cu sonde TaqMan specifice speciei într-un format duplex, făcând posibilă detectarea atât A E. histolyrica, cât și a E. disp în același vas de reacție.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, și colab. Compararea raționamentelor PCR în timp real pentru diagnosticul diferențial de laborator al amebiasisului. J Clin Microbiol 2005; 43:5491-5497.

siguranța Laboratorului

chisturile din probele de scaun nefixate sunt potențial infecțioase. Respectați precauțiile standard care se aplică specimenelor de scaun: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.