análise do sangue e da medula óssea

limitações associadas às suspensões de células geradoras não se aplicam aos doentes com envolvimento do sangue ou da medula por perturbações linfoproliferativas crónicas. A subclassificação destas lesões depende fortemente da citometria de fluxo.42,44,49-51 leucemia linfocítica crónica (LLC) é essencialmente definida pelas suas características imunofenotípicas. Outras doenças linfoproliferativas de células B têm fenótipos característicos, se não sempre absolutamente específicos. Linfoma de células do manto muitas vezes pode ser reconhecido em sua fase leucêmica, embora o marcador mais específico, cyclin D1, é muito difícil de detectar por fluxo com as técnicas atuais. Leucemia de células cabeludas, por outro lado, não tem apenas uma característica, mas também altamente específicos phenotype42,50,52; ocasionalmente, pacientes com inexplicável pancitopenia pode ser determinado a ter leucemia de células cabeludas, quando apenas um pequeno número de células do sangue com o clássico fenótipo são identified52 (Fig. 15-3).a citometria de fluxo pode também detectar factores de prognóstico em pessoas com LLC. Reconhecendo que a LLC pode ser subdividida em um tipo de mau prognóstico associado a genes da região da imunoglobulina V não mutada e um fenótipo mutado com melhor prognóstico, vários estudos tentaram identificar substitutos de fluxo. O primeiro marcador encontrado para ser prognóstico foi CD38, embora a correlação com o estado mutacional ou prognóstico é imperfeita.53,54 proteína cinase 70 (ZAP 70) associada à cadeia Zeta parece ser um marcador substituto melhor, embora também não seja perfeito. ; no entanto, fornece informações prognósticas.55-57 no entanto, embora este ensaio esteja amplamente disponível, particularmente em laboratórios comerciais de referência, os cortes entre positivo e negativo podem ser arbitrários, e, portanto, a variabilidade significativa dos resultados pode existir entre os laboratórios.58,59 tentativas foram feitas para melhorar a reprodutibilidade,60 mas nem sempre é certo que um determinado ensaio dê os mesmos resultados que os da literatura clínica publicada. Outras tentativas foram feitas para definir subconjuntos prognosticamente significativos de pacientes com LLC usando outras combinações de marcadores,61 mas estas combinações não foram adotadas na prática de rotina.

o valor primário da citometria de fluxo na avaliação das leucemias crónicas é a sua capacidade de demonstrar clonalidade nas populações de células B com base na expressão restrita de um tipo de cadeia luminosa de imunoglobulina. Esta funcionalidade é particularmente útil na avaliação de pacientes com inexplicável lymphocytosis62,63 e também é útil para determinar o estágio de pacientes com células B linfoma não-Hodgkin,64,65, pois a presença de apenas 0,5% a 1% de um clonal de células B da população, ou até menos, pode ser demonstrado na medula ou do sangue de alguns pacientes. No entanto, a elevada sensibilidade da citometria de fluxo para a detecção de populações clonais tem demonstrado pequenas populações clonais de células B em alguns doentes sem linfoma ou leucemia óbvios.Deste modo, a descoberta de um pequeno clone da medula óssea deve ser interpretada com precaução na ausência de outra evidência de linfoma, análoga à descoberta de uma gammopatia monoclonal num doente sem evidência de mieloma.a citometria de fluxo

também foi utilizada extensivamente no estudo de doentes com mieloma. Uma limitação da citometria de fluxo é que as células plasmáticas estão sub-representadas nos aspirados de medula estudados por fluxo em comparação com a prevalência de células em filmes ou em biopsias; como resultado, esta técnica não pode ser utilizada para quantificar as células do mieloma e, portanto, não pode substituir a morfologia ao aplicar os critérios de diagnóstico tradicionais. No entanto, as células do plasma têm um fenótipo característico, incluindo uma expressão muito brilhante de CD38 e expressão de CD138,67,68 e, portanto, são fáceis de reconhecer. Com o uso de técnicas de permeabilização de membrana, é fácil demonstrar a restrição da imunoglobulina citoplásmica (Ig) da cadeia de luz.É mais significativo que as células plasmáticas neoplásicas tenham geralmente fenótipos anormais. Embora nenhuma anomalia fenotípica específica específica permita a distinção entre gamopatia monoclonal benigna e mieloma, a citometria de fluxo pode ainda ser útil para distinguir o mieloma da gamopatia monoclonal de significado indeterminado, ou para prever a progressão da gamopatia monoclonal de significado indeterminado ou mieloma fumegante.69-71 além disso, a avaliação citométrica do fluxo de células plasmáticas anormais no momento do diagnóstico do mieloma demonstrou ter significado prognóstico.Além disso, a detecção de células plasmáticas em circulação ou a persistência de um fenótipo anormal após a terapêutica, incluindo a detecção de uma doença residual mínima, é preditiva do resultado em doentes com mieloma.69,71,73-76

clonalidade das populações de células T também pode ser demonstrada por citometria de fluxo, embora o método seja mais complexo e não esteja tão amplamente disponível como o utilizado para as células B. Esta técnica baseia-se na demonstração da restrição do uso do gene v-beta nas leucemias das células T.77-79 neoplasias de células T também apresentam fenótipos anormais de células T, que mais frequentemente são caracterizados pela perda de um antígeno pan-T normal ou expressão de um antígeno de células T com intensidade anormal.44,80,81 porque certas populações pequenas, incomuns, e mesmo clonal de células T podem ser vistas em pequenos números em condições não neoplásicas, esta técnica tem sensibilidade mais limitada do que a demonstração de uma população clonal de células B. No entanto, quando as células T anormais representam mais do que uma pequena percentagem de células, citometria de fluxo multiparâmetro facilmente os demonstra e desempenha um papel significativo na categorização destes tumores pouco comuns.