realização de HPLC

Introdução

cromatografia líquida de Alta eficiência é, basicamente, um altamente melhor forma de coluna de cromatografia. Em vez de um solvente ser permitido gotejar através de uma coluna sob gravidade, ele é forçado através sob altas pressões de até 400 atmosferas. Isso faz com que seja muito mais rápido.também lhe permite utilizar um tamanho de partículas muito menor para o material de embalagem de colunas, o que dá uma área de superfície muito maior para interacções entre a fase estacionária e as moléculas que passam por ela. Isto permite uma separação muito melhor dos componentes da mistura.a outra grande melhoria em relação à cromatografia em coluna diz respeito aos métodos de detecção que podem ser utilizados. Estes métodos são altamente automatizados e extremamente sensíveis.

a coluna e o solvente

Existem duas variantes em uso em HPLC, dependendo da polaridade relativa do solvente e da fase estacionária.

HPLC de fase Normal

isto é essencialmente o mesmo que já terá lido na cromatografia em camada fina ou cromatografia em coluna. Embora seja descrito como “normal”, não é a forma mais comumente usada de HPLC.a coluna é cheia de pequenas partículas de sílica e o solvente é não-polar – hexano, por exemplo. Uma coluna típica tem um diâmetro interno de 4,6 mm (e pode ser inferior a isso), e um comprimento de 150 a 250 mm.

compostos polares na mistura que está sendo passada através da coluna irá colar mais tempo para a sílica polar do que os compostos não polares vai. Os não polares passarão mais rapidamente pela coluna.

HPLC de fase reversa

neste caso, o tamanho da coluna é o mesmo, mas a sílica é modificada para torná-la não polar, anexando longas cadeias de hidrocarbonetos à sua superfície – tipicamente com 8 ou 18 átomos de carbono neles. Utiliza – se um solvente polar-por exemplo, uma mistura de água e um álcool como o metanol.

neste caso, haverá uma forte atração entre o solvente polar e as moléculas polares na mistura sendo passada através da coluna. Não haverá tanta atração entre as cadeias de hidrocarbonetos ligadas à sílica (a fase estacionária) e as moléculas polares na solução. Moléculas polares na mistura, portanto, passará a maior parte do seu tempo se movendo com o solvente.compostos não polares na mistura tendem a formar atrações com os grupos de hidrocarbonetos por causa das forças de dispersão de van der Waals. Eles também serão menos solúveis no solvente por causa da necessidade de quebrar ligações de hidrogênio como eles se encaixam entre as moléculas de água ou metanol, por exemplo. Por conseguinte, gastam menos tempo em solução no solvente e isso irá atrasá-los no seu caminho através da coluna.

isso significa que agora são as moléculas polares que irão viajar através da coluna mais rapidamente.

HPLC de fase reversa é a forma mais comumente usada de HPLC.