Diagnóstico Laboratorial

diagnóstico Diferencial entre outras amebae

Patogênicos Entamoeba espécies deve ser diferenciada de outras protozooses intestinais, tais como a não patogênicas amebae (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) e os flagelados Dientamoeba fragilis. A diferenciação morfológica entre estes é possível, mas potencialmente complicada, com base nas características morfológicas dos quistos e trofozoitos.na cultura, as características de crescimento diferencial de E. moshkovskii pode ajudar a distingui-lo de outras espécies, mas os métodos de cultura têm limitações importantes (falta de infecções mistas, contaminação, mão-de-obra intensiva, disponibilidade limitada). Historicamente, a diferenciação de E. dispar e E. histolytica foi baseada em análise isoenzimática ou imunológica, mas estes não são mais favorecidos com a disponibilidade de métodos moleculares eficazes e são raramente realizados. Os métodos moleculares são atualmente recomendados para distinguir as espécies patogênicas de Entamoeba.

detecção microscópica

identificação microscópica de quistos e trofozoitos nas fezes é o método comum para diagnosticar espécies patogênicas de Entameba. Isto pode ser conseguido utilizando:

• fezes frescas: suportes húmidos e preparações permanentemente coradas (por exemplo, trícromo).Concentrados de fezes frescas: suportes húmidos, com ou sem nódoas de iodo e preparações permanentemente coradas (por exemplo, trícromo). Embora útil para cistos, os métodos de concentração podem não ser úteis para demonstrar trofozoitos.
• Microscopia também tem uma baixa sensibilidade se apenas uma amostra de fezes é analisada, e requer pessoal treinado no diagnóstico morfológico. A recolha e análise de três amostras consecutivas de fezes no prazo de dez dias melhora as possibilidades de detecção. Além disso, E. dispar, E. histolytica, e E. moshkovskii não são distinguíveis com base na morfologia.

Trofozoitos também podem ser identificados em amostras de aspiração ou biopsia obtidas durante a colonoscopia ou cirurgia.

Imunodiagnose

Immunoassay Enzyme (EIA) kits para detecção de anticorpos de Entamoeba histolytica, bem como kits EIA para detecção de antigénios estão disponíveis comercialmente nos Estados Unidos. A detecção de anticorpos é mais útil em doentes com doença extra-intestinal (isto é, abcesso hepático amébico) quando os organismos não são geralmente encontrados no exame das fezes. A detecção de anticorpos tem um valor de diagnóstico limitado em doentes de áreas altamente endémicas susceptíveis de terem exposição e seroconversão anteriores, mas pode ser mais utilizada em doentes de áreas onde Entamoeba spp.patogénicas. são raros. A detecção de antigénios durante infecções activas pode ser útil como adjuvante do diagnóstico microscópico na detecção de parasitas e pode distinguir entre infecções patogénicas e não patogênicas.

deteção de anticorpos

o teste de hemaglutinação indireta (IHA) foi substituído por kits de teste EIA comercialmente disponíveis para serodiagnose de rotina da amebíase. O antigénio consiste num extracto solúvel bruto de organismos cultivados axenicamente. O teste EIA detecta anticorpos específicos para E. histolítica em aproximadamente 95% dos doentes com amebíase extra-intestinal, 70% dos doentes com infecção intestinal activa e 10% das pessoas assintomáticas que estão a passar quistos de E. histolytica. Se os anticorpos não forem detectáveis em doentes com uma apresentação aguda de abcesso hepático amébico suspeito, deve ser colhida uma segunda amostra 7-10 dias depois. Se o segundo espécime não apresentar seroconversão, devem ser considerados outros agentes. Detectável E. os anticorpos histolíticos específicos podem persistir durante anos após um tratamento bem sucedido, pelo que a presença de anticorpos não indica necessariamente infecção aguda ou actual. Além disso, é provável que os doentes que tenham vivido em áreas altamente endémicas sejam seropositivos devido a exposições passadas. Especificidade igual ou superior a 95%: raramente ocorrem reacções falso-positivas.embora tenha sido notificada a detecção de anticorpos IgM específicos da E. histolytica, a sensibilidade é apenas de cerca de 64% em doentes com doença invasiva actual. Vários kits comerciais de EIA para detecção de anticorpos estão disponíveis nos Estados Unidos. Não existem kits comerciais de detecção de anticorpos para E. dispar ou E. moshkovskii ou E. bangladeshi.a detecção do antigénio

A detecção do antigénio pode ser útil como adjuvante do diagnóstico microscópico na detecção de parasitas e na distinção entre infecções patogénicas e não patogénicas. No entanto, a utilidade é limitada para espécimes congelados ou fixos e para espécimes pós-tratamento. Estudos recentes indicam uma maior sensibilidade e especificidade dos testes do antigénio fecal com o uso de anticorpos monoclonais que podem distinguir entre infecções por E. histolytica e E. dispar. Está disponível pelo menos um kit comercial que detecta apenas a infecção patogénica por E. histolytica nas fezes; estão disponíveis vários kits que detectam antigénios E. histolytica nas fezes, mas não excluem infecções por E. dispar.a análise molecular por testes convencionais baseados em PCR é o método de escolha para a discriminação entre E. histolytica e E. dispar. Alguns ensaios também podem distinguir E. moshkovskii.

PCR em tempo Real

Uma abordagem TaqMan em tempo real PCR foi validada no CDC e é utilizada para o diagnóstico laboratorial diferencial de amebíase. O ensaio tem como alvo o gene rRNA 18S com sondas TaqMan específicas a espécies num formato duplex, tornando possível detectar tanto E. histolyrica como E. dispar no mesmo recipiente de reacção.Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvevara GS, et al. Comparação dos racionais da PCR em tempo real para diagnóstico laboratorial diferencial de amebíase. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

a segurança laboratorial

quistos em amostras de fezes não fixas são potencialmente infecciosos. Observe as precauções padrão aplicáveis às amostras de fezes: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.