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coloração de Nissl
núcleos e corpos nissl (retículo endoplasmático rugoso) são corados de roxo azul com violeta de cresilo.
Nissl coloração é usada para a coloração de Klüver-Barrera (KB).
- procedimento de Coloração
- considerações Importantes sobre a diferenciação
procedimento de Coloração
| 1 | Deparaffinization | Xileno | 3 alterações, 10 minuntes cada |
|---|---|---|---|
| 2 | Remoção do xileno | 100% de etanol | 3 trocas, 5 minutos cada |
| 3 | Hidratação | 95%, 70% etanol | 5 minutos cada |
| 4 | Lavar | água corrente | 2 minutos |
| 5 | Lavagem | Destilada água | |
| 6 | Coloração | 0,1% de violeta cresil solução | 10 minutos, 37℃ |
| 7 | Diferenciação | 95% etanol + algumas gotas de 10% solução de ácido acético | Cerca de 5 a 10 minutos. Deve ter-se o cuidado de não ser excessivamente diferenciado, uma vez que a descoloração prosseguirá na etapa seguinte. |
| 8 | 95%, etanol a 100% | aproximadamente 1 minuto cada. Diferenciar até que apenas os núcleos e os corpos Nissl sejam roxos azuis. | |
| 9 | verificação microscópica | ||
| 10 | Desidratação | 100% ehtanol | 2 alterações, de 5 minutos cada |
| 11 | Limpar | Xileno | 3 alterações, 10 minuntes cada |
| 12 | Aplicação |
0.1% violeta cresil solução aquosa (Filtrar antes do uso)
1g
1000ml
pH de violeta cresil
O método de coloração diferente, dependendo do pH da solução de coloração. A um pH próximo de 3.0, apenas os corpos Nissl, nucleoli e membranas nucleares estão manchados de azul pálido. Os núcleos das células gliais estão apenas ligeiramente manchados. À medida que o pH aumenta, a cor torna-se mais escura no geral, e o citoplasma das células nervosas, fibras nervosas e células gliais são co-manchadas. A co-coloração intensifica-se perto de um pH de 4,0. Por conseguinte, é necessário um tempo de diferenciação mais longo.
-
pH3.0 -
pH4.7
Tipos de violeta cresil
Três tipos de violeta cresil são atualmente utilizados no Laboratório da Neurológico.
| nome do produto | fabricante | disponibilidade |
|---|---|---|
| Acetato de Violeta cresil | EM CIÊNCIA | fora de estoque |
| acetato de Violeta cresil | SIGMA | Disponível comercialmente |
| violeta cresil (Acetato) | MERCK | Disponível comercialmente |
Diferenciação tempo varia dependendo do violeta cresil produto
O pH da solução de coloração varia dependendo do produto. Portanto, os métodos de coloração também diferem. É importante estar ciente de que o tempo necessário para a diferenciação difere entre produtos. No entanto, seja qual for o produto utilizado, a mesma imagem cromática manchada pode, em última análise, ser obtida através da diferenciação e observação da amostra ao microscópio.
| nome do produto | fabricante | pH de 0,1% violeta cresil solução | Diferenciação tempo em 95% etanol |
|---|---|---|---|
| Acetato de Violeta cresil | EM CIÊNCIA | 3.5 | por 10 a 30 segundos |
| acetato de Violeta cresil | SIGMA | 4.7 | 10min aproximadamente |
| violeta cresil (Acetato) | MERCK | 4.8 | 10min aproximadamente |
※ O valor do pH pode ser ajustada a partir de 3.5 para aproximadamente 3,8 adicionando uma quantidade adequada de 10% de ácido acético para a Sigma e a Merck coloração soluções, que vai encurtar o tempo necessário para a diferenciação com etanol a 95%. No entanto, não se recomenda a reutilização desta solução.considerações importantes sobre a diferenciação
fectuar a diferenciação até que o fundo fique branco. Ter os nucleóis e membranas nucleares dos núcleos das células nervosas claros e cromatina ligeiramente manchados é ideal.
acetato de Violeta cresil (Sigma C5042) pH4.7 foi utilizada em ambas as seções.fotografia da esquerda: 95% de diferenciação do etanol durante apenas 10 segundos. Com diferenciação insuficiente, toda a célula nervosa está manchada de azul, tornando impossível identificar o núcleo e os corpos Nissl.fotografia direita: 95% de diferenciação do etanol durante 10 minutos. Uma diferenciação suficiente permite que os núcleos e os corpos Nissl dos neurônios sejam claramente diferenciados.
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