analiza krwi i szpiku

ograniczenia związane z wytwarzaniem zawiesin komórkowych nie dotyczą pacjentów z zajęciem krwi lub szpiku przez przewlekłe zaburzenia limfoproliferacyjne. Subklasyfikacja tych zmian opiera się głównie na cytometrii przepływowej.42,44,49-51 przewlekła białaczka limfocytowa (ang. Chronic lymphocytic leukemia, CLL) jest zasadniczo definiowana przez jej cechy immunofenotypowe. Inne zaburzenia limfoproliferacyjne limfocytów B mają charakterystyczne, jeśli nie zawsze absolutnie specyficzne, fenotypy. Chłoniak z komórek płaszcza często można rozpoznać w fazie białaczki, chociaż najbardziej specyficzny marker, cyklina D1, jest bardzo trudny do wykrycia przez przepływ z obecnymi technikami. Z kolei białaczka włochatokomórkowa ma nie tylko charakterystyczny, ale także wysoce specyficzny fenotyp42, 50,52; czasami u pacjentów z niewyjaśnioną pancytopenią można określić białaczkę włochatokomórkową, gdy zidentyfikowano tylko niewielką liczbę komórek krwi o klasycznym fenotypie52 (Fig. 15-3).

cytometria przepływowa może również wykrywać czynniki prognostyczne u osób z PBL. Uznając, że PBL można podzielić na typ słabego rokowania związany z nieutwardzonymi genami regionu immunoglobuliny V i lepiej rokującym zmutowanym fenotypem, kilka badań próbowało zidentyfikować surogaty przepływu. Pierwszym markerem prognostycznym był CD38, chociaż korelacja ze statusem mutacyjnym lub rokowaniem jest niedoskonała.53,54 Zeta-Chain-associated protein kinase 70 (ZAP 70) wydaje się być lepszym markerem zastępczym, chociaż też nie jest idealny; dostarcza jednak informacji prognostycznych.55-57 jednakże, nawet jeśli ten test jest powszechnie dostępny, szczególnie w komercyjnych laboratoriach referencyjnych, odcięcia między dodatnimi i ujemnymi mogą być arbitralne, a zatem wśród laboratoriów może istnieć znaczna zmienność wyników.58,59 próbowano poprawić odtwarzalność, 60 ale nie zawsze jest pewne, że dany test da takie same wyniki jak te w opublikowanej literaturze klinicznej. Inne próby były podejmowane w celu określenia istotnych prognostycznie podzbiorów pacjentów z PBL przy użyciu innych kombinacji markerów, 61 ale te kombinacje nie zostały przyjęte w rutynowej praktyce.

podstawową wartością cytometrii przepływowej w ocenie przewlekłych białaczek jest jej zdolność do wykazywania klonalności w populacjach limfocytów B w oparciu o ograniczoną ekspresję jednego typu łańcucha lekkiego immunoglobuliny. Ta cecha jest szczególnie cenna w ocenie pacjentów z niewyjaśnioną limfocytozą62, 63,a także jest przydatna do określania stopnia zaawansowania pacjentów z chłoniakiem nieziarniczym z komórek B,64, 65, ponieważ obecność zaledwie 0,5% do 1% populacji klonalnych komórek B, lub nawet mniej, może być wykazana w szpiku lub krwi niektórych pacjentów. Jednakże wysoka czułość cytometrii przepływowej do wykrywania populacji klonalnych wykazała małe populacje klonalnych komórek B u niektórych pacjentów bez oczywistego chłoniaka lub białaczki.Z tego względu stwierdzenie klonu szpiku małego należy interpretować ostrożnie w przypadku braku innych objawów chłoniaka, analogicznie do stwierdzenia gammopatii monoklonalnej u pacjenta bez objawów szpiczaka.

cytometria przepływowa była również szeroko stosowana w badaniu pacjentów ze szpiczakiem. Jednym z ograniczeń cytometrii przepływowej jest to, że komórki plazmatyczne są niedostatecznie reprezentowane na aspiratorach szpiku badanych przez przepływ w porównaniu z występowaniem komórek na filmach lub w biopsjach; w rezultacie technika ta nie może być stosowana do ilościowego oznaczania komórek szpiczaka, a zatem nie może zastąpić morfologii przy stosowaniu tradycyjnych kryteriów diagnostycznych. Jednak komórki plazmatyczne mają charakterystyczny fenotyp, w tym bardzo jasną ekspresję CD38 i ekspresję CD138,67,68 i dlatego są łatwe do rozpoznania. Z wykorzystaniem technik permeabilizacji błony łatwo jest wykazać ograniczenie łańcucha lekkiego immunoglobuliny cytoplazmatycznej (IG).Większe znaczenie ma fakt, że nowotworowe komórki plazmatyczne mają zwykle nieprawidłowe fenotypy. Chociaż żadna specyficzna nieprawidłowość fenotypowa nie pozwala na rozróżnienie między łagodną gammopatią monoklonalną a szpiczakiem, cytometria przepływowa może nadal być pomocna w odróżnianiu szpiczaka od gammopatii monoklonalnej o nieokreślonym znaczeniu lub w przewidywaniu postępu gammopatii monoklonalnej o nieokreślonym znaczeniu lub tlącego się szpiczaka.Ponadto wykazano, że ocena cytometryczna przepływu nieprawidłowych komórek plazmatycznych w momencie rozpoznania szpiczaka ma znaczenie prognostyczne.Ponadto, wykrywanie krążących komórek osocza lub utrzymywanie się nieprawidłowego fenotypu po leczeniu, w tym wykrywanie minimalnej choroby resztkowej, jest czynnikiem predykcyjnym wyników leczenia u pacjentów ze szpiczakiem.69,71,73-76

Klonalność populacji limfocytów T można również wykazać za pomocą cytometrii przepływowej, chociaż metoda ta jest bardziej złożona i nie jest tak szeroko dostępna, jak ta stosowana w przypadku limfocytów B. Technika ta opiera się na demonstracji ograniczenia użycia genu v-beta w białaczkach limfocytów T.77-79 nowotwory złośliwe komórek T często wykazują nieprawidłowe fenotypy komórek T, które najczęściej charakteryzują się utratą normalnego antygenu pan-T lub ekspresją antygenu limfocytów T przy nieprawidłowym natężeniu.44,80,81 ponieważ niektóre małe, niezwykłe, a nawet klonalne populacje limfocytów T mogą być obserwowane w małych ilościach w Warunkach nienowotworowych, technika ta ma bardziej ograniczoną czułość niż demonstracja klonalnej populacji limfocytów B. Jednakże, gdy nieprawidłowe komórki T stanowią więcej niż bardzo mały procent komórek, Wieloparametrowa cytometria przepływowa łatwo je demonstruje i odgrywa znaczącą rolę w kategoryzacji tych rzadkich nowotworów.