barwienia
barwienia Nissl
jądra i ciała Nissl (szorstkie retikulum endoplazmatyczne) są barwione na niebiesko fioletowo z fioletem kresylu.
barwienie Nissl stosuje się do barwienia Klüver-Barrera (KB).
- procedura barwienia
- Ważne uwagi dotyczące różnicowania
procedura barwienia
| 1 | Deparaffinizacja | ksylen | 3 zmiany, po 10 minut każda |
|---|---|---|---|
| 2 | usuwanie ksylenu | 100% etanolu | 3 zmiany po 5 minut każda |
| 3 | nawodnienie | 95%, 70% etanolu | 5 minut każda |
| 4 | mycie | bieżąca woda z kranu | 2 minuty |
| 5 | płukanie | destylowana woda | |
| 6 | barwienie | 0,1% roztwór fioletu cresyl | 10 minut, 37℃ |
| 7 | różnicowanie | 95% etanol + kilka kropli 10% roztworu kwasu octowego | > około 5 do 10 minut. Należy uważać, aby nie przesadzić, ponieważ odbarwianie będzie postępować w następnym kroku. |
| 8 | różnicowanie | 95%, 100% etanolu | około 1 minuty każdy. Różnicować aż tylko jądra i ciała nissl będą niebiesko-fioletowe. |
| 9 | Kontrola mikroskopowa | krok ⑦ & may może być powtórzony, jeśli konieczne jest większe różnicowanie. | |
| 10 | odwodnienie | 100% ehtanolu | 2 zmiany po 5 minut każda |
| 11 | Oczyszczanie | ksylen | 3 zmiany po 10 minut każda |
| 12 | coverslipping |
0.1% wodny roztwór cresyl violet (Filtruj przed użyciem)
1G
1000 mL
pH fioletu cresyl
metoda barwienia różni się w zależności od pH roztworu barwienia. Przy pH bliskim 3,0 jedynie ciała Nissl, jądra i błony jądrowe są zabarwione na bladoniebiesko. Jądra komórek glejowych są tylko bardzo lekko zabarwione. Wraz ze wzrostem pH kolor staje się ciemniejszy, a cytoplazma komórek nerwowych, włókien nerwowych i komórek glejowych są współbarwione. Współbarwienie nasila się blisko pH 4,0. Dlatego wymagany jest dłuższy czas różnicowania.
pH3.0
pH4.7
rodzaje fiołka kresylowego
trzy rodzaje fiołka kresylowego są obecnie stosowane w laboratorium neuropatologii.
| Nazwa produktu | producent | dostępność |
|---|---|---|
| octan Cresyl Violet | EM SCIENCE | brak w magazynie |
| octan Cresyl Violet | SIGMA | dostępny w handlu |
| fiolet kresylowy (octan) | Merck | dostępny w handlu |
czas różnicowania różni się w zależności od produktu fioletowego kresylu
pH roztworu barwiącego różni się w zależności od produktu. Dlatego też metody barwienia również się różnią. Ważne jest, aby mieć świadomość, że czas potrzebny na różnicowanie różni się między produktami. Jednakże, niezależnie od tego, jaki produkt zostanie użyty, ten sam barwiony obraz chromatyczny można ostatecznie uzyskać poprzez różnicowanie i obserwację próbki pod mikroskopem.
| Nazwa produktu | producent | pH 0,1% roztworu fioletu cresyl | czas różnicowania w 95% etanolu |
|---|---|---|---|
| octan fioletu Cresyl | EM SCIENCE | 3.5 | przez 10 do 30 sekund |
| octan fioletu Cresyl | SIGMA | 4, 7 | około 10 minut |
| fiolet Cresyl (octan) | MERCK | 4, 8 | 10min około |
pH pH można regulować od 3,5 do około 3,8 przez dodanie odpowiedniej ilości 10% kwasu octowego do roztworów barwienia Sigma i Merck, co skróci czas potrzebny do różnicowania z 95% etanolem. Nie zaleca się jednak ponownego stosowania tego rozwiązania.
Ważne uwagi dotyczące różnicowania
wykonuj różnicowanie, dopóki tło nie zmieni koloru na biały. Posiadanie jasnych jąder i błon jądrowych jąder komórek nerwowych i słabo zabarwionych chromatyny jest idealne.
w obu sekcjach zastosowano octan fioletu Cresylu (Sigma C5042) pH4.7.
lewe zdjęcie: 95% etanolu różnicowanie tylko przez 10 sekund. Przy niedostatecznym różnicowaniu Cała komórka nerwowa jest zabarwiona na niebiesko, co uniemożliwia identyfikację jąder i ciał Nissl.
prawe zdjęcie: 95% etanolu przez 10 minut. Wystarczające różnicowanie pozwala na wyraźne różnicowanie jąder i ciał Nissl neuronów.
Leave a Reply