Diagnostyka laboratoryjna

diagnostyka różnicowa wśród innych gatunków Entamoeba patogennych należy odróżnić od innych pierwotniaków jelitowych, takich jak nonpathogenic amebae (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) i flagellate dientamoeba fragilis. Różnicowanie morfologiczne między nimi jest możliwe, ale potencjalnie skomplikowane, na podstawie cech morfologicznych torbieli i trofozoitów.

w kulturze, różnicowa charakterystyka wzrostu E. moshkovskii może pomóc w odróżnieniu go od innych gatunków, ale metody hodowli mają istotne ograniczenia(brak mieszanych infekcji, skażenia, pracochłonne, ograniczona dostępność). Historycznie różnicowanie E. dispar i E. histolytica było oparte na analizie izoenzymatycznej lub immunologicznej, ale nie są one już faworyzowane dostępnością skutecznych metod molekularnych i są rzadko wykonywane. Metody molekularne są obecnie zalecane do rozróżniania patogennych gatunków Entamoeby.

wykrywanie mikroskopowe

mikroskopowa identyfikacja torbieli i trofozoitów w stolcu jest powszechną metodą diagnozowania patogennych gatunków Entamoeby. Można to osiągnąć za pomocą:

• świeży stolec: mokre Uchwyty i trwale barwione preparaty(np. trichrom).
• Koncentraty ze świeżego stolca: mokre, z bejcą jodową lub bez, oraz preparaty trwale barwione (np. trichrom). Chociaż przydatne w przypadku torbieli, metody koncentracji mogą nie być przydatne do wykazania trofozoitów.
• mikroskopia ma również niską czułość, jeśli analizowana jest tylko jedna próbka kału i wymaga personelu przeszkolonego w diagnostyce morfologicznej. Pobranie i analiza trzech kolejnych próbek kału w ciągu dziesięciu dni zwiększa szanse na wykrycie. Również E. dispar, E. histolytica i E. moshkovskii nie są rozróżniane na podstawie morfologii.

trofozoity można również zidentyfikować w próbkach aspiracyjnych lub biopsji uzyskanych podczas kolonoskopii lub operacji.

Immunodiagnostyka

zestawy testów immunoenzymatycznych (EIA) do wykrywania przeciwciał Entamoeba histolytica oraz zestawy EIA do wykrywania antygenów są dostępne na rynku w Stanach Zjednoczonych. Wykrywanie przeciwciał jest najbardziej przydatne u pacjentów z chorobą pozajelitową (to znaczy, amebic ropień wątroby), gdy organizmy nie są na ogół znaleźć na badanie stolca. Wykrywanie przeciwciał ma ograniczoną wartość diagnostyczną u pacjentów z obszarów wysoce endemicznych, które mogą mieć wcześniejszą ekspozycję i serokonwersję, ale może być bardziej przydatne u pacjentów z obszarów, w których patogenne Entamoeba spp. są rzadkie. Wykrywanie antygenu podczas aktywnych infekcji może być przydatne jako uzupełnienie diagnostyki mikroskopowej w wykrywaniu pasożytów i może odróżniać patogenne i niepatogenne infekcje.

wykrywanie przeciwciał

Test pośredniej hemaglutynacji (IHA) został zastąpiony komercyjnie dostępnymi zestawami testów EIA do rutynowej serodiagnostyki amebiazy. Antygen składa się z surowego rozpuszczalnego ekstraktu organizmów hodowanych aksenicznie. Test EIA wykrywa przeciwciało specyficzne dla E. histolytica u około 95% pacjentów z amebiazą pozajelitową, 70% pacjentów z aktywnym zakażeniem jelitowym i 10% bezobjawowych osób, które przechodzą torbiele E. histolytica. Jeśli przeciwciała nie są wykrywalne u pacjentów z ostrym rozpoznaniem ropnia amebicznego wątroby, drugą próbkę należy pobrać 7-10 dni później. Jeśli drugi okaz nie wykazuje serokonwersji, należy rozważyć zastosowanie innych środków. Wykrywalne E. przeciwciała specyficzne dla histolytica mogą utrzymywać się przez lata po udanym leczeniu, więc obecność przeciwciał niekoniecznie wskazuje na ostre lub obecne zakażenie. Ponadto, pacjenci, którzy żyli na obszarach wysoce endemicznych, prawdopodobnie będą seropozytywni z powodu wcześniejszych ekspozycji. Swoistość wynosi 95% lub więcej: reakcje fałszywie dodatnie rzadko występują.

chociaż zgłaszano wykrywanie przeciwciał IgM swoistych dla E. histolytica, czułość wynosi tylko około 64% u pacjentów z aktualną chorobą inwazyjną. W Stanach Zjednoczonych dostępnych jest kilka komercyjnych zestawów EIA do wykrywania przeciwciał. Nie istnieją komercyjne zestawy do wykrywania przeciwciał dla E. dispar lub E. moshkovskii lub E. bangladeshi.

wykrywanie antygenu

wykrywanie antygenu może być przydatne jako uzupełnienie diagnostyki mikroskopowej w wykrywaniu pasożytów i rozróżnianiu patogennych i niepatogennych zakażeń. Jednakże użyteczność jest ograniczona dla próbek zamrożonych lub stałych oraz dla próbek po obróbce. Ostatnie badania wskazują na poprawę czułości i swoistości testów antygenu kału z wykorzystaniem przeciwciał monoklonalnych, które mogą odróżnić zakażenia E. histolytica i E. dispar. Dostępny jest co najmniej jeden komercyjny zestaw, który wykrywa tylko patogenne zakażenie E. histolytica w stolcu; dostępnych jest kilka zestawów, które wykrywają antygeny E. histolytica w stolcu, ale nie wykluczają zakażeń E. dispar.

diagnostyka molekularna

konwencjonalne PCR

w referencyjnych laboratoriach diagnostycznych, analiza molekularna za pomocą konwencjonalnych testów opartych na PCR jest metodą z wyboru dla rozróżnienia między E. histolytica i E. dispar. Niektóre testy również można wyróżnić E. moshkovskii.

Real-Time PCR

a TaqMan real-time PCR approach has been validated at CDC and is used for differential laboratory diagnosis of amebiasis. Test celuje w Gen 18s rRNA za pomocą specyficznych dla gatunku sond TaqMan w formacie duplex, umożliwiając wykrycie zarówno E. histolyrica, jak i E. dispar w tym samym naczyniu reakcyjnym.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Porównanie rationales w czasie rzeczywistym PCR dla różnicowej diagnostyki laboratoryjnej amebiasis. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

bezpieczeństwo laboratoryjne

torbiele w niezmieszanych próbkach kału są potencjalnie zakaźne. Należy przestrzegać standardowych środków ostrożności, które mają zastosowanie do próbek kału: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.