discussie

In een eerder artikel (Sinclair et al., 2016b) we hebben aangetoond dat het perineale aanhangsel van mannelijke en vrouwelijke breedvoetige mollen de voorhuid is en niet de penis of clitoris, die beide “interne organen” zijn met een histologische handtekening die duidelijk verschilt van de voorhuid. Histologie van uitwendige genitaliën van mannelijke en vrouwelijke breedvoetige mollen heeft objectieve anatomische criteria verschaft voor het definiëren van prepuce, penis en clitoris. Bijgevolg bevestigt histologisch onderzoek onze eerdere bevindingen, en dus bestaat het prominente perineale aanhangsel bij alle 4 onderzochte mollen (breedvoetige, sterneusige, harige staart en Japanse spitsmuizen) uit een haardragende voorhuid zonder penisachtige of clitorale histologische kenmerken. Dienovereenkomstig gelden de oude beschrijvende termen voor perineale aanhangsels van mannelijke en vrouwelijke mollen (peniform clitoris, penile clitoris, fallus, penis, clitoris en fallus-achtige clitoris) zeker niet voor deze soorten en kunnen ook niet van toepassing zijn voor Europese mollen. Dus, de nieuwe terminologie beschreven in Sinclair et al. is geverifieerd en zal worden gebruikt in de huidige paper (Sinclair et al., 2016b).

driedimensionale reconstructie en morfometrische analyse zijn gebruikt om een nauwkeurige beschrijving te verkrijgen van het patroon van elementen die de uitwendige genitaliën vormen van de onderzochte 4 mol-soorten. Penile/preputiale en clitorale / preputiale overlap bepaald door morfometrische en door 3 – dimensionale reconstructie benadrukken het punt dat de penis en clitoris, elk met hun unieke histologische handtekening, interne organen zijn die zich bevinden in (penis) of diep (clitoris) naar de preputiale ruimte, hoewel bij vrouwelijke sterneuzen en harige-staart mollen het distale aspect van de clitoris vrij projecteert in de preputiale ruimte. Morfometrische analyse van histologische secties toont ook aan dat, in alle 4 mol species, de penis urethra niet open aan de punt van de penis. In plaats daarvan bevindt de urethrale meatus zich op een aanzienlijke afstand proximaal tot de punt van de penis, vergelijkbaar met die van de muis (Rodríguez et al., 2011).

bij de meeste zoogdiersoorten zijn uitwendige genitaliën seksueel dimorf, waarbij de penis aanzienlijk groter is dan de clitoris. Het verschil in grootte en morfologie van mannelijke en vrouwelijke uitwendige genitaliën is toegeschreven aan androgeenwerking bij mannen en de afwezigheid daarvan bij vrouwen (Yamada et al., 2003). Echter, vrouwtjes van verschillende zoogdiersoorten vertonen diep masculinized externe genitaliën, met name de gevlekte hyena, verschillende soorten mollen en verschillende primaten (spinapen, brulapen, chimpansee en ringstaartmaki ‘ s) (Wislocki, 1936; Drea and Weil, 2008; Cunha et al., 2014). De fossa (Cryptoprocta ferox), een katachtig, vleesetend zoogdier endemisch op Madagaskar, is een speciaal geval voor zover masculinisatie van vrouwelijke uitwendige genitaliën wordt gezien bij jonge exemplaren, maar verdwijnt bij volwassen vrouwtjes (Hawkins et al., 2002). De vraag betreffende het mechanisme van masculinization van vrouwelijke externe genitaliën wordt over het algemeen benaderd als een kwestie van androgen actie, met verkenning naar een bron van androgenen, en indien mogelijk (zelden), met experimentele studies van de gevolgen van verschillende vormen van “androgen blokkade/ontbering”. Terwijl vrouwelijke foetussen van gevlekte hyena ‘ s worden blootgesteld aan endogene androgenen (Licht et al., 1998), de vorming en groei van de pendule penile clitoris van de gevlekte hyena is androgeen-onafhankelijk, hoewel de ontwikkeling van bepaalde interne fallische structuren androgeen-afhankelijk is (Cunha et al., 2014). Voorbijgaande masculinisatie van de clitoris van Fossa fossana wordt niet geassocieerd met verhoogde vrouwelijke androgeenspiegels (Hawkins et al., 2002). Voor muizen (en misschien ook andere knaagdieren) is de lengte van het perineale aanhangsel (voorhuid) van vrouwtjes ~57% die van mannetjes. De substantiële grootte van het wild-type vrouwelijke perineale aanhangsel (prepuce) is niet significant verschillend van dat van androgeen-ongevoelige xtfm/y muizen. Deze gegevens suggereren dat de basale grootte (lengte) van de muis perineal aanhangsel (voorhuid) in wijfjes androgen-onafhankelijk is, en de incrementele toename in grootte van de mannelijke muis perineal aanhangsel (voorhuid) androgen-afhankelijk is. Dit idee is consistent met Verordening van anogenitale Afstand in muizen, die door intra-uteriene positie wordt beà nvloed, maar niet in wijfjes onder een bepaald punt als resultaat van prenatale behandeling met een anti-androgen (vom Saal en Bronson, 1978; vom Saal, 1978; Mitchell et al., 2015). Zo is er precedent voor het idee dat bepaalde aspecten van mannelijke en vrouwelijke externe genitaliën androgeenonafhankelijk kunnen zijn (Cunha et al., 2014).

seksueel dimorfisme van uitwendige genitaliën binnen de vier onderzochte soorten mollen kan op verschillende manieren worden beoordeeld: (a) lengte/grootte van het perineale aanhangsel (preputiale Lengte), (b) AGD, (C) aanwezigheid of afwezigheid van een os penis/os clitoris, of (d) mannelijke trait score. Het vermoeden is dat mannelijke kenmerken bij mannen en / of vrouwen worden opgewekt tijdens pre – en postnatale ontwikkeling door androgenen waarvan de bron zou kunnen zijn de testes, foetale of maternale ovotestes, placenta of bijnier. Voor vrouwelijke mollen, masculinization is eerder toegeschreven aan androgenen afgeleid van de ovotestes aanwezig in verschillende Europese mol species (Talpa romana, T. occidentalis, en T. europaea), Condylura cristata( sterneus mol), Mogera wogura (Japanse Mol), en Neurotrichus gibbsii (Amerikaanse spitsmol) (Zurita et al., 2003; Jiménez et al., 1993; Sánchez et al., 1996; Barrionuevo et al., 2004; Matthews, 1935; Whitworth et al., 1999; Rubenstein et al., 2003; Carmona et al., 2008). Breedvoetsmol (Scapanus latimanus) en Japanse spitsmol (Urotrichus talpoides) hebben geen ovotestes, wat ook is gemeld voor de oostelijke mol (Scalopus aquaticus) en kustmol (Scapanus orarius) (Rubenstein et al., 2003; Carmona et al. In 1935 speculeerde Matthews dat in Talpa europaea de “interstitiële klier (van ovotestis) niet alleen homoloog was met de testis, maar dat het ook mannelijke hormonen produceerde die het algemene metabolisme en de vorm van het dier beïnvloeden” (Matthews, 1935). Deze speculatie werd vervolgens bevestigd in rapporten van Leydig-cellen en de productie van testosteron in de interstitiële klier van ovotestes van vrouwelijke mollen (Talpa occidentalis en Talpa europaea) (Jiménez et al., 1993; Whitworth et al., 1999; Zurita et al., 2003). Leydig-cellen in Ovotestes van Talpa occidentalis werden voor het eerst morfologisch herkend op 5 dagen postpartum (Barrionuevo et al., 2004) hoewel serumtestosteron in dit stadium nauwelijks aantoonbaar is (<0,020 ng / ml), maar stijgt tot 0,5 tot 0,8 ng/ml bij 30 dagen postnataal wanneer de serumtestosteronspiegels bij vrouwelijke Talpa occidentalis gelijk zijn aan of hoger zijn dan die bij mannen van dezelfde leeftijd (Zurita et al., 2003). Latere studies hebben circulerende testosteronspiegels gecorreleerd met het gewicht / volume van de interstitiële klier in Talpa occidentalis en Talpa europaea en hebben aangetoond dat ovarieel gewicht en serumtestosteron het hoogst zijn in het niet-broedseizoen versus het broedseizoen bij vrouwelijke Talpa occidentalis (Jiménez et al., 1993; Whitworth et al., 1999; Zurita et al., 2003). De postnatale stijging van de serumtestosteronspiegels bij vrouwelijke Talpa Eruopaea, Talpa occidentalis en Talpa romana wordt geassocieerd met de ontwikkeling van epididymes geassocieerd met de ovariale bursa in de buurt van de interstitiële klier (Zurita et al., 2003; Jiménez et al., 1993; Sánchez et al., 1996; Barrionuevo et al., 2004). Vrouwelijke epididymes in Talpa occidentalis blijven bestaan en groeien gedurende het hele juveniele en volwassen leven (Zurita et al, 2003).

nu, met ten minste 4 (A-d hierboven) manieren om seksueel dimorfisme van de uitwendige genitaliën van de Mol te beoordelen, kunnen we de relatie tussen ovotestes en seksueel dimorfisme van de uitwendige genitaliën van de Mol onderzoeken. Voor alle vier soorten mollen die in dit artikel worden onderzocht, is de correlatie discordant tussen de aanwezigheid/afwezigheid van ovotestes en de status van (A) preputiale Lengte, (b) AGD, (C) aanwezigheid of afwezigheid van een os penis/os clitoris, of (d) mannelijke trait score. In Tabel 2 zijn de in het groen aangegeven vermeldingen indicatief voor het samenvallen van de aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes en het aangegeven morfologische kenmerk. Vermeldingen in het rood wijzen op een gebrek aan consistentie tussen de aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes en het morfologische kenmerk. Zoals kan worden gezien, voor elke morfologische eigenschap is er ten minste één mol species die inconsistent is met androgen productie door de ovotestes.

Breedvoetige mol mannetjes en harige staart mannelijke en vrouwelijke mollen hebben bot (os penis of os clitoris) binnen uitwendige genitaliën. Uit studies bij ratten en muizen wordt de botvorming als androgeen-afhankelijk beschouwd, op zijn minst op één of andere manier. De os-penis komt voort uit een mesenchymale condensatie die verbeend wordt bij neonatale mannelijke muizen en ratten (Murakami, 1984; Murakami and Mizuno, 1986; Murakami, 1986; 1987; Glucksmann et al., 1976). Verrassend genoeg is een os penis en een os clitoris aanwezig in mannelijke en vrouwelijke wild-type muizen, respectievelijk (Weiss et al., 2012; Glucksmann et al., 1976), evenals in androgeen-ongevoelige xtfm/Y muizen (Yang et al., 2010; Murakami, 1987). Dit suggereert dat de eerste vorming van de OS penis en os clitoris evenals de ossificatie androgeen-onafhankelijk is. Echter, de os penis van volwassen mannelijke muizen is ongeveer 6,5 keer langer dan de os clitoris (Weiss et al., 2012). Aldus, is de postnatale groei van been binnen externe genitaliën androgen-afhankelijk (Glucksmann en kers, 1972; Glucksmann et al., 1976). Inderdaad, neonatale anti-androgeenbehandeling of neonatale castratie remt de toename in grootte en calcificatie van de os penis, terwijl neonatale behandeling van vrouwen met androgenen de groei van de OS clitoris bij ratten en muizen stimuleert (Glucksmann et al., 1976; Glucksmann and Cherry, 1972). We concluderen dat een prominente OS penis of os clitoris is indicatief voor androgeen actie. Bij het ontwikkelen van mannetjes is de bron van androgeen de testes, waarvan bekend is dat ze androgenen produceren tijdens foetale, neonatale en volwassen periodes (Bloch, 1967; Bloch et al., 1971; Feldman en Bloch, 1978).

een belangrijke observatie is de afwezigheid van een os penis en os clitoris in mannelijke en vrouwelijke sterneuzen (met ovotestes) en Japanse spitsmolletjes (zonder ovotestes). Gezien het feit dat mannetjes van deze twee molens functionerende testes hebben en normale mannelijke interne genitaliën ontwikkelen, kan de afwezigheid van botvorming in uitwendige genitaliën van mannelijke sterneuzen en Japanse spitsmuizen worden verklaard door het falen van de vorming van de botprecursor, die zoals hierboven besproken een androgeen-onafhankelijke gebeurtenis is (ten minste bij muizen). Afwezigheid van de bot voorloper kan verantwoordelijk zijn voor de afwezigheid van een OS penis en os clitoris in ster-nosed en Japanse spitsmuizen mollen, waardoor androgenen (of afgeleid van testes of ovotestes) irrelevant voor deze functie. De Europese mol (Talpa europaea) heeft een ovotestis en bezit een os penis maar de status van een os clitoris bij de wijfjes is onbekend (Schultz et al., 2016). De status van de os penis en os clitoris bij andere soorten Europese mollen (Talpa occidentalis en Talpa romana) met ovotestes is niet gemeld (Zurita et al., 2003; Matthews, 1935; Beolchini et al., 2000). Echter, als de afwezigheid van Bot in uitwendige genitaliën van Japanse spitsmolletjes wordt verwijderd uit Tabel 2, dan is de status van alle 4 uitwendige genitaliënkenmerken in harige-staart en Japanse spitsmolletjes in overeenstemming met de aanwezigheid/afwezigheid van ovotestes.

anogenitale afstand is een metriek die toeneemt van geboorte tot volwassenheid naarmate het dier groter wordt. Geslachtsverschillen in AGD kunnen bij de geboorte worden herkend in verschillende soorten, waaronder ratten en muizen. Postnataal, mannelijke en vrouwelijke AGDs toenemen, maar ze handhaven een geslacht verschil in het leven. AGD is verhoogd bij mannen in reactie op androgenen afgeleid van foetale en neonatale testes, wat impliceert vroege gevoeligheid van het perineale gebied voor androgenen (Callegari et al., 1987; Hotchkiss et al., 2007b; Vandenbergh and Huggett, 1995; Godet, 1946; Hotchkiss and Vandenbergh, 2005; Hotchkiss et al., 2007a). Inderdaad, AGD wordt verhoogd bij vrouwelijke muizen waarvan de intra-uteriene positie is tussen twee mannelijke foetussen, implicerend uitstekende gevoeligheid van het zich ontwikkelende perineum voor androgenen (vom saal et al., 1990). De gevoeligheid van het perineale gebied voor androgenen wordt gehandhaafd in volwassenheid, aangezien AGD aan androgens in volwassen ratten responsief blijft (Mitchell et al., 2015) die voorstellen dat definitieve AGD een functie van androgen blootstelling van prenatale aan volwassen stadia is.

anogenitale afstand werd gemeten bij drie molsoorten en is ook gerapporteerd voor de Europese mol (Matthews, 1935). De aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes versus AGD is niet consistent over de 3 mol soorten in Tabel 2. Gezien de afwezigheid van ovotestes in breedvoetige vrouwelijke mollen, was de verwachting dat AGD groter zou zijn bij mannen versus Vrouwen. Echter, AGD in breedvoet mollen was niet significant verschillend in mannen en vrouwen. Of vrouwelijke breedvoet mollen worden blootgesteld aan androgenen tijdens ontwikkeling via een andere bron dan maternale of foetale ovotestes, of AGD is geen betrouwbare indicator van androgeen actie tijdens ontwikkeling in deze MOL species. Voor deze 3 mol soorten (Tabel 2) is de correlatie tussen de aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes en AGD dus niet consistent.

seksueel dimorfisme in lengte van het perineale aanhangsel (prepuce) is een ander mogelijk androgeen-gereguleerd kenmerk. Voor preputiale lengte, is de correlatie tussen deze parameter en de aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes ook slecht. Gezien de afwezigheid van ovotestes bij vrouwelijke breedvoetige mollen, was de verwachting dat de voorhuid lengte groter zou moeten zijn bij mannen versus Vrouwen. De lengte van de voorhuid was echter niet statistisch verschillend bij beide geslachten. Omgekeerd, in sterneus vrouwelijke mollen, die geen ovotestes, de verwachting was dat prepuce lengte gelijk zou moeten zijn bij mannen versus vrouwen, maar in plaats daarvan prepuce lengte was groter bij mannen versus Vrouwen. Dit gebrek aan correspondentie tussen de aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes als potentiële bron van androgenen en preputial lengte doet de vraag rijzen of preputial lengte androgen-onafhankelijk is. Dit idee wordt ondersteund door gegevens van gevlekte hyena ‘ s en analyse van de grootte van het perineale aanhangsel (voorhuid) van xtfm/Y muizen zoals hierboven besproken. De lengte van de voorhuid (zoals AGD) is een metriek die evenredig toeneemt naarmate het dier groeit, en dus vermoedelijk onderhevig is aan groeiregulatie van geboorte tot volwassenheid. De substantiële groei van het perineale aanhangsel van de vrouwelijke muis (voorhuid) aan volwassen grootte wordt niet geassocieerd met andere androgen-afhankelijke eigenschappen zoals behoud en ontwikkeling van wolffian derivaten of vrouwelijke prostaat, die suggereren dat androgen niveaus in vrouwelijke muizenembryo ‘ s/pasgeborenen suboptimaal zijn voor ontwikkeling van mannelijke interne genitaliën, of de wijze van androgen blootstelling via lokale diffusie van de testes (wolffian kanaal) of via systemische androgenen is. Aldus, moeten wij het idee onderhouden dat preputial lengte in vrouwelijke mol ook androgen-onafhankelijk kan zijn.ratten en muizen hebben eigenlijk twee prepuces (Blaschko et al., 2013; Sinclair et al., 2016a). Het prominente perineale aanhangsel van ratten en muizen is de uitwendige voorhuid. De voorhuid van mollen lijkt homoloog te zijn met de uitwendige voorhuid van ratten en muizen, voor zover deze structuur in alle drie de groepen een volumineuze ruimte creëert waarin de penis is gehuisvest. De interne voorhuid van ratten en muizen is een flap van de huid integraal aan de penis, een configuratie vergelijkbaar met die van mensen (Blaschko et al., 2013; Sinclair et al., 2016a). We hebben onlangs gespeculeerd dat de uitwendige voorhuid beschermend is voor de penis, het verzekeren van reinheid en het beschermen van dit gevoelige orgaan (Sinclair et al., 2016b). Deze regeling lijkt geschikt voor zoogdieren die laag op de grond zijn gebouwd, zoals ratten, muizen, mollen en andere soorten.

in dit artikel hebben we een mannelijke trait score vastgesteld gebaseerd op de aanwezigheid bij mannen en de afwezigheid bij vrouwen van negen morfologische kenmerken (zie Fig. 6). Met behulp van deze metriek, breedvoet en harige staart mannelijke mollen vertonen alle 9 mannelijke kenmerken, terwijl mannelijke sterneuzen en Japanse spitsmuizen vertonen 8 van de 9 mannelijke kenmerken, alleen ontbreekt een os penis. Vrouwelijke mollen vertonen een reeks van mannelijke eigenschappen scores: nul voor vrouwelijke Japanse spitsmolletjes (volledige feminisatie) en verschillende graden van masculinisatie voor vrouwelijke breedvoetige mollen (scoren 3), vrouwelijke sterneus mollen (scoren 4), en vrouwelijke harige-staart mollen (scoren 5). Mannelijke eigenschap scores van 4 en 5 in vrouwelijke sterneuzen en harige-staart Mol en nul in vrouwelijke Japanse spitsmollen correleert met de aanwezigheid van ovotestes in vrouwelijke sterneuzen en harige-staart Mol en de afwezigheid van ovotestes in vrouwelijke Japanse spitsmollen. Echter, breedvoetige vrouwelijke mollen hebben een mannelijke eigenschap score van 3, maar ontbreken ovotestes. De interpretatie van mannelijke trait score bij vrouwelijke breedvoetige mollen is tweeledig: (A) of er is een alternatieve bron van androgenen, of (b) de functie in kwestie (grote prepuce grootte evenals een corpus cavernosum met een tunica albuginea) zijn androgeen-onafhankelijk. De mogelijkheid dat de prepuce lengte minstens gedeeltelijk androgeen-onafhankelijk is is hierboven besproken. Duidelijk, mannelijke eigenschap score is een complexe metriek met betrekking tot vele individuele functies, die kunnen verschillen in gevoeligheid voor androgenen evenals in hun”androgeen-programmering venster van gevoeligheid”.

samengevat is er een gebrek aan overeenstemming tussen de vier onderzochte morfologische kenmerken en de aanwezigheid/afwezigheid van ovotestes bij alle 4 molens. Voor elk kenmerk is er onenigheid in ten minste één mol soort.

het dogma van geslachtsdifferentiatie dat Jost verkondigt is dat androgenen een centrale rol spelen in de mannelijke ontwikkeling. In aanwezigheid van androgenen komt het mannelijke patroon van interne en externe genitaliën naar voren, terwijl bij afwezigheid van androgenen het vrouwelijke patroon zich ontwikkelt (Jost, 1953; 1965). Terwijl dit idee correct en toepasselijk is op ontwikkeling van externe genitaliën van mensen en vele andere species, zijn andere mechanismen mogelijk voor zover bepaalde aspecten van ontwikkeling van externe genitaliën androgen-onafhankelijk zijn getoond. Bijvoorbeeld, de vrouwelijke gevlekte hyena (Crocuta crocuta) heeft een hangende penis clitoris vergelijkbaar in grootte aan de penis. Behandeling van foetale gevlekte hyena ‘ s met een anti-androgene cocktail (flutamide plus finasteride) heeft minimale effecten op de vorming en groei in lengte van de penis en clitoris (Drea et al., 1998; Cunha et al., 2005). Ook gonadectomie van prepuberale hyena pups heeft minimaal effect op de lengte van de volwassen penis en clitoris (Glickman et al., 1998). Zo is de groei in lengte van de penis en clitoris van de gevlekte hyena androgeenonafhankelijk. Hoewel de mannelijke perineal aanhangsels en AGD in mannetjes versus wijfjes iets groter zijn, kan de aanzienlijke grootte van perineal aanhangsels (prepuce) in vrouwelijke ratten, muizen, en Mol ook androgen-onafhankelijk zijn zoals hierboven besproken. Gezien de onvolledige aard van de endocriene literatuur in mollen, is het moeilijk om af te leiden of de basislijngrootte van de vrouwelijke prepuce androgen-afhankelijk of androgen-onafhankelijk is, hoewel preputial grootte in volwassen vrouwelijke muizen androgen-onafhankelijk lijkt te zijn gebaseerd op onderzoek van androgen receptor mutant muizen.

bij vergelijking van de vier soorten mollen die in dit artikel worden onderzocht, is de mate van overeenstemming met ovotestes het hoogst voor harige-staart mollen en het laagst voor breedvoet mollen. Inderdaad is de harige staartmol de enige soort die volledige overeenstemming vertoont met ovotestes, ook al waren AGD-metingen niet mogelijk (Tabel 2). Het concentreren op been binnen de externe genitaliën, is het waarschijnlijk dat er gebeurtenissen in het spel anders dan androgen status zijn. Een belangrijke observatie is de afwezigheid van een os penis in mannelijke sterneuzen en Japanse spitsmol en de afwezigheid van een os clitoris in vrouwelijke sterneuzen, die ovotestes hebben. Echter, als de afwezigheid van Bot in uitwendige genitaliën van Japanse spitsmol is te wijten aan het falen van de vorming van de bot voorloper zoals hierboven besproken, dan is de afwezigheid van een os penis in Japanse spitsmol kan worden weggegooid uit Tabel 2. Dienovereenkomstig zou de status van uitwendige genitaliënkenmerken in harige-staart en Japanse spitsmuizen overeenkomen met de aanwezigheid/afwezigheid van ovotestes.

Prepuce lengte is het kenmerk met de grootste discordantie met de aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes, waardoor de mogelijkheid dat prepuce lengte is niet androgeen geregeld in vrouwelijke breedvoet en sterneuzen mol zoals hierboven besproken. We kunnen niet uitsluiten dat androgenen afgeleid van de ovotestes prepuce lengte kan regelen in harige-staart mol, terwijl verminderde prepuce lengte in vrouwelijke Japanse spitsmuizen mol kan worden toegeschreven aan een afwezigheid van ovotestes.

ten slotte kan de vorming en groeiregulatie van het perineale aanhangsel van de Mol (prepuce) androgeenafhankelijk of androgeenonafhankelijk zijn en kan per soort variëren. Het precedent voor dit idee wordt geïllustreerd in hyaeniden waarin bruine hyena ‘s, gestreepte hyena’ s en aardwolfs “standaard” seksueel dimorfisme van uitwendige genitaliën vertonen (Wells, 1968; Ewer, 1973), terwijl vrouwelijke gevlekte hyena ‘ s diep masculinized uitwendige genitaliën vertonen met een pendule penile clitoris van dezelfde grootte als die van de penis (Cunha et al., 2014). Aldus, kan de verordening van ontwikkeling en de groei van externe genitaliën (grootte evenals interne eigenschappen) radicaal tussen species binnen de zelfde phylogenetic groep verschillen. Shinohara et al hebben aangetoond dat de 12 talpide geslachten die zij onderzocht kunnen worden opgelost in 7 clades (Shinohara et al., 2003). Harige staartmolletjes (Parascalops breweri) en breedvoetige mollen (Scapanus latimanus) bevinden zich in de zeer fossoriële Noord-Amerikaanse clade. Sterneuzen mollen (Condylura cristata) wonen in de aquatische/fossorial Noord-Amerikaanse clade, en Japanse spitsmuizen mollen (Urotrichus talpoides) wonen in de semi-fossorial Japanse clade. Bijgevolg is de verwachting dat soorten binnen dezelfde klade soortgelijke kenmerken vertonen (aanwezigheid of afwezigheid van ovotestes, voorhoofdslengte, AGD, bot en/of mannelijke trait score), terwijl soorten in divergerende klades kunnen worden verwacht dat ze verschillen vertonen in deze kenmerken bij de vrouwtjes. Dienovereenkomstig, breedvoetige en harige-staart mol vrouwtjes (binnen dezelfde clade) zou worden verwacht dat soortgelijke kenmerken vertonen. Dit is niet het geval. Harige-staart mollen hebben ovotestes, breedvoet mollen niet, en er zijn grote verschillen in prepuce lengte (perineale hoogte), penis/clitoris lengte, en mannelijke trait score in deze twee soorten (Tabel 2). Interessant is dat het haarstaartmol vrouwtje een os clitoris, een vrije distale punt van de clitoris en een ovotestes heeft, terwijl het nauw verwante breedvoetmol vrouwtje alle 3 kenmerken mist. Misschien is het verlies van de ovotestes in de breedvoetige mol vrouwelijke is gekoppeld aan het verlies van de andere 2 mannelijke kenmerken. Harige staart en Japanse spitsmuizen wonen in afzonderlijke clades, en zou naar verwachting een grotere mate van divergentie in kenmerken vertonen, wat het geval is. Breedvoetige en Japanse spitsmuis mol vrouwtjes, woonachtig in afzonderlijke clades, beide ontbreken ovotestes en toch vertonen ook een hoge mate van divergentie van kenmerken. Sterneuzen en breedvoet mollen, ook in verschillende clades, vertonen een matige mate van congruentie van functies. Aldus, is de phylogenetic affiniteit een slechte voorspeller voor de meeste eigenschappen binnen mol externe genitaliën.