bloed-en Beenmerganalyse

Beperkingen die gepaard gaan met het genereren van celsuspensies zijn niet van toepassing op patiënten met betrokkenheid van bloed of merg door chronische lymfoproliferatieve aandoeningen. De subclassificatie van deze letsels baseert zwaar op cytometry stroom.42,44,49-51 chronische lymfatische leukemie (CLL) wordt hoofdzakelijk bepaald door zijn immunophenotypic kenmerken. Andere B-cel lymfoproliferatieve aandoeningen hebben karakteristieke, zo niet altijd absoluut specifieke fenotypen. Mantelcellymfoom kan vaak in zijn leukemic fase worden erkend, hoewel de meest specifieke teller, cyclin D1, zeer moeilijk is om door stroom met huidige technieken te ontdekken. Haarcelleukemie, omgekeerd, heeft niet alleen een kenmerk, maar ook een zeer specifieke fenotype42, 50, 52; af en toe, patiënten met onverklaarbare pancytopenie kan worden vastgesteld om haarcelleukemie te hebben wanneer slechts een klein aantal bloedcellen met het klassieke fenotype worden geà dentificeerd 52 (Fig. 15-3).

flowcytometrie kan ook prognostische factoren detecteren bij personen met CLL. Erkennend dat CLL kan worden onderverdeeld in een slecht-prognose type geassocieerd met niet-mutated immunoglobuline V regio genen en een beter-prognose gemuteerd fenotype, hebben verschillende studies geprobeerd om stroom surrogaten te identificeren. De eerste marker die prognostisch bleek te zijn was CD38, hoewel de correlatie met of mutationele status of prognose onvolmaakt is.53,54 Zeta-chain-associated protein kinase 70 (ZAP 70) lijkt een betere surrogaatmarker te zijn, hoewel het ook niet perfect is; het geeft echter wel prognostische informatie.Hoewel deze test echter op grote schaal beschikbaar is, met name in commerciële referentielaboratoria, kan het verschil tussen positief en negatief willekeurig zijn en kan er dus een aanzienlijke variabiliteit in de resultaten tussen laboratoria bestaan.Er zijn 58,59 pogingen gedaan om de reproduceerbaarheid te verbeteren,60 maar het is niet altijd zeker dat een bepaalde test dezelfde resultaten zal opleveren als die in de gepubliceerde klinische literatuur. Andere pogingen zijn gedaan om prognostisch significante subgroepen van patiënten met CLL te definiëren met behulp van andere combinaties van markers,61 maar deze combinaties zijn niet aangenomen in de routinepraktijk.

de primaire waarde van flowcytometrie bij de beoordeling van chronische leukemieën is het vermogen om clonaliteit aan te tonen in B-celpopulaties op basis van beperkte expressie van één type lichte immunoglobulineketen. Deze eigenschap is met name waardevol bij de evaluatie van patiënten met onverklaarbare lymfocytose62,63 en is ook nuttig voor het bepalen van het stadium van patiënten met B-cel non-Hodgkin lymfoom,64,65 omdat de aanwezigheid van slechts 0,5% tot 1% van een klonale B-cel populatie, of zelfs minder, kan worden aangetoond in het merg of bloed van sommige patiënten. Nochtans, heeft de hoge gevoeligheid van cytometry stroom voor het ontdekken van klonale populaties kleine klonale B-celpopulaties in sommige patiënten zonder duidelijke lymfoom of leukemie aangetoond.Derhalve dient de bevinding van een kleine beenmergkloon met voorzichtigheid te worden geïnterpreteerd in afwezigheid van andere aanwijzingen voor lymfoom, analoog aan het vinden van een monoklonale gammopathie bij een patiënt zonder aanwijzingen voor myeloom.

flowcytometrie is ook uitgebreid gebruikt in het onderzoek bij patiënten met myeloom. Één cytometry beperking van stroom is dat plasmacellen op mergaspiraten ondervertegenwoordigd zijn die door stroom worden bestudeerd vergeleken met het overwicht van cellen op films of in biopsieën; dientengevolge, kan deze techniek niet worden gebruikt om myelomacellen te kwantificeren en kan dus morfologie niet vervangen wanneer het toepassen van traditionele kenmerkende criteria. Plasmacellen hebben echter een karakteristiek fenotype, met inbegrip van zeer heldere expressie van CD38 en expressie van CD138, 67 en 68 en zijn dus gemakkelijk te herkennen. Met het gebruik van membraan-permeabilization technieken, is het gemakkelijk om cytoplasmic immunoglobulin (IG) licht-keten beperking aan te tonen.Het is van meer betekenis dat neoplastische plasmacellen gewoonlijk abnormale fenotypen hebben. Hoewel geen enkele specifieke fenotypische afwijking onderscheid tussen goedaardige monoklonale gammopathie en myeloom toelaat, kan de cytometrie van de stroom nog nuttig zijn om myeloom van monoklonale gammopathie van Onbepaalde betekenis te onderscheiden, of om vooruitgang van monoklonale gammopathie van Onbepaalde betekenis of smeulende myeloom te voorspellen.Bovendien is aangetoond dat flow cytometrische beoordeling van abnormale plasmacellen op het moment van de diagnose van myeloom prognostische significantie heeft.Daarnaast is detectie van circulerende plasmacellen of persistentie van een abnormaal fenotype na behandeling, inclusief detectie van minimale residuele ziekte, voorspellend voor de uitkomst bij patiënten met myeloom.69,71,73-76

Clonaliteit van t-celpopulaties kan ook worden aangetoond door middel van flowcytometrie, hoewel de methode complexer is en niet zo algemeen beschikbaar is als die welke wordt gebruikt voor B-cellen. Deze techniek is gebaseerd op demonstratie van beperking van V-BÃ ta gengebruik in T-cel leukemias.77-79 T-cel maligniteiten tonen ook vaak abnormale T-cel fenotypen, die meestal worden gekenmerkt door verlies van een normaal pan-t antigeen of expressie van een T-cel antigeen bij abnormale intensiteit.44,80,81 omdat bepaalde kleine, ongebruikelijke, en zelfs clonale t-celpopulaties in kleine aantallen in niet-neoplastische voorwaarden kunnen worden gezien, heeft deze techniek beperktere gevoeligheid dan demonstratie van een clonale B-celpopulatie. Nochtans, wanneer de abnormale cellen van T meer dan een zeer klein percentage cellen vertegenwoordigen, toont de cytometry multiparameterstroom hen gemakkelijk aan en speelt een significante rol in het categoriseren van deze ongewone tumors.