laboratoriumdiagnose

differentiële diagnose onder andere amebae

pathogene Entamoeba-soorten moeten worden onderscheiden van andere intestinale protozoa zoals de nietpathogene amebae (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) en het flagellaatdientamoeba fragilis. Morfologische differentiatie tussen deze is mogelijk, maar potentieel ingewikkeld, gebaseerd op morfologische kenmerken van de cysten en trophozoieten.

in kweek, differentiële groeikarakteristieken van E. moshkovskii kan helpen bij het onderscheiden van andere soorten, maar cultuurmethoden hebben belangrijke beperkingen (ontbrekende gemengde infecties, besmetting, arbeidsintensieve, beperkte beschikbaarheid). Historisch gezien was differentiatie van E. dispar en E. histolytica gebaseerd op ISO-enzymatische of immunologische analyse, maar deze zijn niet langer favoriet met de beschikbaarheid van effectieve moleculaire methoden en worden zelden uitgevoerd. Moleculaire methoden worden momenteel aanbevolen om pathogene Entamoeba-soorten te onderscheiden.

microscopische detectie

microscopische identificatie van cysten en trofozoieten in de ontlasting is de gebruikelijke methode voor het diagnosticeren van pathogene Entamoeba-soorten. Dit kan worden bereikt met:

• verse ontlasting: natte bergingsmiddelen en permanent bevlekte preparaten (bv. trichroom).
• concentraten afkomstig van verse ontlasting: natte bergingsmiddelen, met of zonder jodiumvlek, en permanent bevlekte preparaten (bv. trichroom). Hoewel nuttig voor cysten, kunnen concentratiemethoden niet nuttig zijn voor het aantonen van trophozoieten.de microscopie van
• heeft ook een lage gevoeligheid als slechts één stoelgangmonster wordt geanalyseerd, en vereist personeel dat is opgeleid in morfologische diagnose. Het verzamelen en analyseren van drie opeenvolgende ontlasting monsters binnen tien dagen verbetert de kans op detectie. Ook E. dispar, E. histolytica en E. moshkovskii zijn niet te onderscheiden op basis van morfologie.

trophozoieten kunnen ook worden geïdentificeerd in aspiraten of biopsiemonsters die tijdens colonoscopie of chirurgie worden verkregen.

Immunodiagnose

Enzyme immunoassay (EIA) kits voor Entamoeba histolytica antilichaamdetectie en EIA kits voor antigeendetectie zijn commercieel beschikbaar in de Verenigde Staten. De opsporing van antilichamen is het nuttigst in patiënten met extraintestinale ziekte (d.w.z., amebic leverabces) wanneer organismen over het algemeen niet op stoelgangonderzoek worden gevonden. Antilichaamdetectie is van beperkte diagnostische waarde bij patiënten uit zeer endemische gebieden die waarschijnlijk eerder zijn blootgesteld en seroconversie hebben, maar kan van meer nut zijn bij patiënten uit gebieden waar pathogene Entamoeba spp. zijn zeldzaam. Antigeendetectie tijdens actieve besmettingen kan nuttig zijn als aanvulling op microscopische diagnose in het ontdekken van parasieten en kan tussen pathogene en nietpathogene besmettingen onderscheiden.

Antilichaamdetectie

de indirecte hemagglutinatietest (IHA) is vervangen door in de handel verkrijgbare EIA-testkits voor routinematige serodiagnose van amebiasis. Antigeen bestaat uit een ruw oplosbaar extract van axenisch gekweekte organismen. De EIA-test detecteert antilichaam specifiek voor E. histolytica bij ongeveer 95% van de patiënten met extraintestinale amebiasis, 70% van de patiënten met actieve darminfectie en 10% van de asymptomatische personen die cysten van E. histolytica passeren. Als antilichamen niet aantoonbaar zijn bij patiënten met een acute presentatie van een vermoedelijk amebisch leverabces, moet 7-10 dagen later een tweede monster worden getrokken. Indien het tweede monster geen seroconversie vertoont, moeten andere middelen worden overwogen. Detecteerbare E. histolytica – specifieke antilichamen kunnen blijven bestaan voor jaren na een succesvolle behandeling, zodat de aanwezigheid van antilichamen niet noodzakelijkerwijs wijzen op acute of huidige infectie. Ook, patiënten die in hoogst endemische gebieden hebben geleefd zullen waarschijnlijk seropositief zijn toe te schrijven aan vroegere blootstellingen. De specificiteit is 95% of hoger: vals-positieve reacties komen zelden voor.

hoewel detectie van IgM-antilichamen specifiek voor E. histolytica is gemeld, is de gevoeligheid slechts ongeveer 64% bij patiënten met huidige invasieve ziekte. Verscheidene commerciële EIA kits voor antilichaamopsporing zijn beschikbaar in de Verenigde Staten. Er bestaan geen commerciële antilichaamdetectiekits voor E. dispar of E. moshkovskii of E. bangladeshi.

Antigeendetectie

Antigeendetectie kan nuttig zijn als aanvulling op de microscopische diagnose bij het opsporen van parasieten en om onderscheid te maken tussen pathogene en nietpathogene infecties. Echter, nut is beperkt voor bevroren of vaste specimens en voor nabehandeling specimens. Recente studies wijzen op een verbeterde gevoeligheid en specificiteit van fecale antigeentests met het gebruik van monoklonale antilichamen die onderscheid kunnen maken tussen E. histolytica en E. dispar infecties. Er is ten minste één commerciële kit beschikbaar die alleen pathogene E. histolytica-infectie in de ontlasting detecteert; er zijn verschillende kits beschikbaar die E. histolytica-antigenen in de ontlasting detecteren, maar E. dispar-infecties niet uitsluiten.

moleculaire diagnose

conventionele PCR

in laboratoria voor referentiediagnose is moleculaire analyse met conventionele PCR-gebaseerde assays de voorkeursmethode voor het onderscheid tussen E. histolytica en E. dispar. Sommige analyses kunnen ook E. moshkovskii onderscheiden.

Real-Time PCR

een TaqMan real-time PCR-benadering is gevalideerd bij CDC en wordt gebruikt voor differentiële laboratoriumdiagnose van amebiasis. De test richt zich op het 18S rRNA-gen met soortspecifieke Taqman-sondes in een duplex-formaat, waardoor zowel E. histolyrica als E. dispar in hetzelfde reactievat kunnen worden gedetecteerd.Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Vergelijking van real-time PCR rationales voor differentiële laboratoriumdiagnose van amebiasis. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

laboratoriumveiligheid

cysten in niet-gefixeerde ontlasting zijn mogelijk infectieus. Neem de standaard voorzorgsmaatregelen in acht die van toepassing zijn op ontlastingsmonsters: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.