⑫ kleuring
Nissl kleuring
kernen en Nissl-lichamen (ruw endoplasmatisch reticulum) zijn blauwpaars gekleurd met cresylviolet.
Nissl kleuring wordt gebruikt voor Klüver-Barrera (KB) kleuring.
- Kleuring procedure
- Belangrijke overwegingen met betrekking tot differentiatie
Kleuring procedure
| 1 | Deparaffinization | Xyleen | 3 wijzigingen 10 minuntes elke | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 2 | Verwijderen van xyleen | 100% ethanol | 3 wijzigingen, 5 minuten | ||||
| 3 | Hydratatie | 95%, 70% ethanol | 5 minuten | ||||
| 4 | Wassen | Stromend water | 2 minuten | ||||
| 5 | Spoelen | Gedistilleerd water | 6 | kleuring | 0,1% cresylviolet-oplossing | 10 minuten, 37℃ | |
| 7 | differentiatie | 95% ethanol + enkele druppels 10% azijnzuuroplossing | ongeveer 5 tot 10 minuten. Zorg moet worden genomen niet te overdifferentieren aangezien ontkleuring zal doorgaan in de volgende stap. | 8 | differentiatie | 95%, 100% ethanol | elk ongeveer 1 minuut. Differentiëren totdat alleen kernen en Nissl lichamen blauw paars zijn. |
| 9 | microscopische controle | stap ⑦ & ⑧ kan worden herhaald indien meer differentiatie nodig is. | |||||
| 10 | Uitdroging | 100% ethanol | 2 wijzigingen, 5 minuten | ||||
| 11 | Wissen | Xyleen | 3 wijzigingen 10 minuntes elke | ||||
| 12 | Afdekken |
0.1% cresylviolet-waterige oplossing (Filter vóór gebruik)
1g
1000ml
pH van cresylviolet
de kleuringsmethode verschilt afhankelijk van de pH van de kleuringsoplossing. Bij een pH dicht bij 3,0 zijn alleen de Nissl-lichamen, nucleoli en nucleaire membranen Lichtblauw gekleurd. Gliacelkernen zijn slechts zeer licht bevlekt. Naarmate de pH toeneemt, wordt de kleur donkerder over het algemeen, en het cytoplasma van zenuwcellen, zenuwvezels, en gliacellen worden mede-bevlekt. Co-kleuring intensiveert dicht bij een pH van 4,0. Daarom is een langere differentiatietijd nodig.
-
pH3.0 -
pH4.7
typen cresylviolet
drie typen cresylviolet worden momenteel gebruikt in het laboratorium voor neuropathologie.
| naam van het product | fabrikant | beschikbaarheid |
|---|---|---|
| Cresyl Violet Acetaat | EM WETENSCHAP | uit voorraad |
| Cresyl Violet acetaat | SIGMA | te koop |
| Cresyl violet (Acetaat) | MERCK | te koop |
Differentiatie in tijd verschilt afhankelijk van de cresyl violet product
De pH van de kleurstofoplossing verschilt afhankelijk van het product. Daarom verschillen de kleuringsmethoden ook. Het is belangrijk om te beseffen dat de tijd die nodig is voor differentiatie tussen producten verschilt. Ongeacht het product dat wordt gebruikt, kan hetzelfde gekleurde chromatische beeld uiteindelijk worden verkregen door differentiatie en observatie van het monster onder een microscoop.
| Productnaam | fabrikant | pH van 0,1% cresylvioletoplossing | Differentiatietijd in 95% ethanol |
|---|---|---|---|
| Cresylviolet Acetaat | EM SCIENCE | 3.5 | 10 tot 30 seconden |
| Cresyl Violet acetaat | SIGMA | 4.7 | 10min ongeveer |
| Cresyl violet (Acetaat) | MERCK | 4.8 | 10min ongeveer |
※ De pH-waarde kan worden aangepast van 3,5 tot ongeveer 3,8 door het toevoegen van een geschikte hoeveelheid van 10% azijnzuur Sigma en Merck vlekken oplossingen, die verkort de tijd die nodig is voor differentiatie, met 95% ethanol. Het wordt echter niet aanbevolen om deze oplossing te hergebruiken.
belangrijke overwegingen met betrekking tot differentiatie
voer differentiatie uit totdat de achtergrond wit wordt. Het hebben van de nucleoli en nucleaire membranen van de zenuwcelkernen helder en chromatine zwak gekleurd is ideaal.
Cresylviolet acetate (Sigma C5042) pH4.7 werd in beide rubrieken gebruikt.
linkerfoto: 95% ethanoldifferentiatie gedurende slechts 10 Seconden. Bij onvoldoende differentiatie is de hele zenuwcel blauw gekleurd, waardoor het onmogelijk is om de kern en Nissl-lichamen te identificeren.
rechterfoto: 95% ethanol differentiatie gedurende 10 minuten. Voldoende differentiatie staat de kernen en Nissl lichamen van neuronen toe om duidelijk te worden onderscheiden.
Leave a Reply