diagnoosi

kliininen diagnoosi: kliininen kuva klamydiainfektiota sairastavista potilaista voi olla harhaanjohtava, sillä jopa 70-80 prosenttia tartunnan saaneista naisista ja 50 prosenttia tartunnan saaneista miehistä on oireettomia. Tyypillisesti nainen, jolla on komplisoitumaton klamydia-infektio, esiintyy hajuton, limainen valkovuoto ilman kutinaa. Dysuria ilman taajuutta tai kiireellisyyttä valitellaan, jos virtsaputki on mukana. Lisäksi PID: ssä voi esiintyä aiempia vaikeita vatsakipuja, joihin liittyy korkea kuume, dyspeunia, pitkittyneitä kuukautiskiertoja ja intermensturaalinen verenvuoto. Tutkittaessa, kohdunkaulan keltainen, samea, limainen vastuuvapauden voidaan nähdä os. Kohdunkaula yleensä vuotaa helposti verta, kun kaavitaan lastalla tai harjalla. Virtsa-analyysi paljastaa >5 WBC/HPF (high power field), joka viittaa uretriitti13: een. Klamydiainfektioita ei voida erottaa muista kliinisesti hoidetuista virtsaputken infektioista. Amiinitesti (ts., merkittävä hajun vapautuminen Koh: n lisäämisestä emättimen eritykseen) voi auttaa erottamaan klamydiainfektiot muista alemmista sukupuolielinten infektioista, mutta sillä on alhainen spesifisyys.

klamydiainfektio uroksilla ilmenee virtsaputkentulehduksena 15-55 prosentilla sairastuneista enintään 35 v, joskus lisäkivestulehdus voi olla seen2. Lievä tai kohtalainen kirkas tai valkoinen virtsaputken vastuuvapauden nähdään aamulla ennen potilaan voides. Lisäkivestulehduksessa voi esiintyä aiemmin yksipuolista kiveskipua, johon liittyy kivespussin eryteema, lisäkiveksen arkuus tai turvotus. Diagnoosi voidaan vahvistaa sillä, että peniksestä erittyy mukopurulenttia eritettä, joka gramvärjäyksessä osoittaa >5 WBC/HPF, eikä solunsisäisiä gramnegatiivisia diplokokkeja ole. Reiterin oireyhtymä voi olla hoitamattoman klamydiainfektion harvinainen komplikaatio. Reactive niveltulehdus, joka sisältää Triad virtsaputken/kohdunkaulan naisilla, conjuntivitis ja kivuton mucopurulent purkaus kämmenten ja jalkapohjien nähdään Reiter syndrome29. Naiset ovat yleisemmin vaikuttaa kuin miehet. On epäsymmetrinen useita nivelrikkoja mieltymys alaraajoihin.

laboratoriodiagnoosi: taudin oireeton luonne ja C. trachomatis-bakteerin aiheuttamien infektioiden lisääntyvä kirjo korostavat herkkien ja luotettavien laboratoriomenetelmien tarvetta.

näytteiden keräämisen ja kuljetuksen taito on diagnostisen testauksen tarkkuuden kannalta ensiarvoisen tärkeää. Sekä C. trachomatis-bakteerin diagnostisten testien herkkyyden että spesifisyyden on osoitettu olevan suoraan yhteydessä näytteen riittävyyteen. Eliössä olevat isäntäsolut olisi sisällytettävä näytteiden keräykseen, koska klamydiat sitovat solunsisäisiä taudinaiheuttajia erityisesti tekniikoissa, joissa eliö visualisoidaan suoraan.

näytteenottopaikan valinta voi vaikuttaa taudinaiheuttajan toipumisen todennäköisyyteen. C. trachomatis-bakteerin toipumisessa sukuelimistä on havaittu 10-20 prosentin kasvua, jos sekä kohdunkaulan että virtsaputken näytteitä otetaan verrattuna vain kohdunkaulan näytteenottoon42. Yleiset naispotilailta otetut näytteet ovat endokervinen moppi, vaginaalinen/introitaalinen moppi, vulval-moppi sekä virtsaputken ja peräsuolen moppi ja ensimmäinen virtsanäyte. Virtsaputken ja peräsuolen moppi ja ensimmäinen saalis virtsanäyte voidaan myös kerätä miespotilaiden lisäksi muita erityisiä näytteitä, kuten eturauhasen nestettä.

näytteen keräämisen ja kuljetuksen laadunvarmistus: näytteen riittävyys voidaan määrittää visualisoimalla squamo-columnar-soluja mikroskopian aikana. Näytettä pidetään riittävänä, jos siinä on yksi kolumnaarinen/metaplastinen solu yhtä solua kohti. Eristämisen todennäköisyys on optimaalinen, jos näyte jäähdytetään välittömästi keräyksen jälkeen 2-8°C: ssa.näytteenoton ja käsittelyn välisen ajan olisi mieluiten oltava alle 48 tuntia. jos tämä ei ole mahdollista, näytteet voidaan jäädyttää -70 °C: ssa, kunnes ne käsitellään 16. Sikiöiden nautaseerumi (2-5%) auttaa säilyttämään klamydian elinkelpoisuuden pakastettavassa näytteessä. Kaksimolaarinen sakkaroosifosfaatti (2-MSP) tai sakkaroosiglutamaattifosfaatti ovat yleisimmin käytetyt kuljetusvälineet. On kehitetty ja hyväksytty diagnostiseen käyttöön synteettisiä kuljetusvälineitä viljelyyn ja joihinkin muihin kuin viljelytesteihin, kuten M4 – kuljetusvälineeseen, Flex-Trans-väliaineeseen ja uuteen M4-synteettiseen/yleiseen väliaineeseen.

klamydian laboratoriodiagnoosi koostuu seuraavista menetelmistä:

(i) erityistestit

soluviljelmä: eliön eristäminen on lopullinen menetelmä klamydiatartunnan diagnosoimiseksi. Klamydia on velvoittava solunsisäinen patogeeni ja vaatii siksi embryonated kanan muna tai eläinten solulinjat viljelyn. Tällaiset viljelymenetelmät ovat teknisesti vaikeita, työvoimavaltaisia, hankalia ja kalliita, eikä niitä ole yleisesti hyväksytty rutiinitestiksi, joka suoritetaan yleisissä kliinisissä laboratorioissa. Klamydiae viz-viljelyyn on kuitenkin käytetty kolmea in vitro-järjestelmää. hiiren inokulaatio (Intraperitoneaalinen, kallonsisäinen ja laskimonsisäinen), keltuaispussiin inokulaatio (7-8 päivän ikäisen poikasen alkionalkion keltuaispussiin inokulaatio) ja soluviljelylinjat16. Yleisimmin käytettyjä solulinjoja ovat-HeLa 229-solut, McCoy-solut, BHK21-ja BGMK-kennot24.

soluviljelmän herkkyys klamydian eristämiselle paranee, kun solu esikäsitellään polykationeilla, deae-dekstraaneilla, inokulaatti sentrifugoidaan solumonolikerrokseen ja antimetaboliitit, kuten sykloheksimidi tai sytokalasiini B, lisätään soluviljelymediumiin42. C. trachomatis-viljelmän solumonolayeria kasvatetaan rumpu-tai kuoripulloissa lasikatteissa tai moniviljelyastioiden kaivoissa. Shell injektiopullo menetelmä on herkempi kliiniselle näytteelle kuin multiwell soluviljelmä, koska vähemmän mahdollisuuksia ristikontaminaation 42. Ennen inokulointia näyte on sonikoitava isäntäsolujen häiritsemiseksi ja klamydiasulkeumien erottamiseksi. Jotta soluviljelmät voidaan inokuloida, päällysviljelyaine on poistettava ja korvattava sellaisella määrällä näytettä viljelyaineessa, joka peittää yksikerroksen ja estää kuivumisen.

yleisimmin käytetty kasvualusta on Eagles Minimal Essential Medium (EMEM) täydennettynä aminohapoilla ja vitamiineilla, sikiöjalkaisten seerumi (5-10), ylimääräinen glukoosi (0, 056 m) ja 2-glutamiini42. Inokulaation jälkeen viljelmiä inkuboidaan 37o C: ssa 2-3 päivän ajan. Klamydian sulkeumat havaitaan immunofluoresenssivärjäyksellä. Eristyksen herkkyyden on osoitettu vaihtelevan 70-85 prosentin välillä laboratoriosta ja käytetystä viljelyjärjestelmästä riippuen. Perinteisesti tämä on” kultakanta ” diagnoosi C. trachomatis koska se on 100% specific42. Valitettavasti useimmat yksityiset ja julkiset laboratoriot eivät pysty siihen teknisen kysynnän, työvoimavaltaisuuden ja korkeiden kustannusten vuoksi.

suora fluoresoiva testi (DFA): DFA-testi lisää klamydian spesifisen vasta-ainevärjäyksen huomattavan edun näytteen suoraan tutkimiseen ja on edelleen yksi hyödyllisimmistä diagnostisista tekniikoista. Tässä testissä käytetään alkeiskoppien nopeaa tunnistamista floureseiini-isotiosynaattikonjugoiduilla monoklonaalisilla vasta-aineilla (FITC-Mab) MOMP-tai genuspesifisiä LPS-vasta-aineita vastaan. Alkeiskappaleet näkyvät erillisinä, jyrkästi hahmoteltuina, omenanvihreinä, levymäisinä (300 nm) hiukkasina ja retikuloituneina kappaleina, jotka ovat noin kolme kertaa suurempia kuin alkeiskappaleet, joilla on fluoresoiva sädekehä.

tämä menettely ei vaadi tiukkoja edellytyksiä näytteen kuljetukselle, sillä vuoteesta valmistetaan sivujälki, joka kuljetetaan käsiteltäväksi. Kun käytetään C. trachomatis-bakteerin MOMPIA, DFA: n herkkyyden ja spesifisyyden on todettu olevan 80-90 prosenttia ja spesifisyyden 98-99 prosenttia suhteessa kulttuuriin43. DFA: n suuri spesifisyys johtuu sen riippuvuudesta klamydialiskosten erottuvien morfologisten ja värjäysominaisuuksien visualisoinnista. DFA on ainoa käytettävissä oleva diagnostinen testi, joka mahdollistaa näytteen riittävyyden samanaikaisen arvioinnin näytteessä olevien epiteelisolujen visualisoinnin avulla. Se on nopea ja yksinkertainen (läpimenoaika noin 30 min), Mutta mikroskooppinen tutkiminen ja tulosten tulkinta vaatii asiantuntemusta. Tätä menetelmää suositellaan siksi pienitehoisille laboratorioille. Tätä testiä voidaan soveltaa myös ekstragenitaalisiin kohtiin. Sen on raportoitu olevan viljelyä herkempi klamydian toteamiseen endometriumissa tai tubaalisessa yksilössä42.

ELISA (entsyymi-immunologinen määritys): ELISA on käytettävissä C. trachomatis-antigeenin osoittamiseen. Tarkoitukseen on saatavilla useita kaupallisesti saatavilla olevia ELISA-sarjoja. Useimmat näistä havaitsevat klamydian LPS: n, joka liukenee paremmin kuin MOMP. Entsyymi-immunomääritys (EIA) – testien herkkyyden on raportoitu olevan 62-96 prosenttia ja spesifisyyden 86-99 prosenttia verrattuna soluviljelmään44. Tämä testi soveltuu laboratorioihin, joilla ei ole pääsyä soluviljelyyn. Erilaiset suuret ja pienet tutkimukset ympäri maailmaa,mukaan lukien Intia,ovat kuitenkin raportoineet Elisan heikosta herkkyydestä verrattuna DFA: han ja PCR45, 46, 47: ään.

sytologia: sytologia on helposti saatavilla oleva, helppokäyttöinen ja kustannustehokas diagnostinen testi. Se ei vaadi varotoimia näytteiden varastointiin ja kuljetukseen, ja myös elinkyvyttömiä/ei-tarttuvia hiukkasia voidaan havaita. Kliinisen näytteen laatu voidaan arvioida mikroskooppitekniikalla, ja näissä testeissä käytettävät tekniset menetelmät ovat yleensä nopeampia ja yksinkertaisempia kuin viljely. Yleisimmin käytetään Giemsa -, immunofluoresenssi-ja jodivärjäysmenetelmiä. Muita tahroja, kuten immunoperoksidaasi, immunoferritiini, May Grunwald, Giemenez, Macchiavello ja akridiinioranssi voidaan käyttää myös klamydian havaitsemiseen kuorituissa soluissa. Sytoplasmaisten sulkeumien esiintyminen on patogeeninen vastasyntyneiden klamydiainfektioille, mutta tätä menetelmää ei suositella sidekalvontulehduksen tai sukupuolielinten infektion diagnosoimiseksi aikuisilla herkkyyden puutteen vuoksi. Kolmesta menetelmästä immunofluoresenssi tarjoaa suurimman herkkyyden, jota seuraa Giemsa ja sitten joditahraus42.

Molekyylimenetelmät: Perinteisillä diagnoosimenetelmillä on useita rajoituksia, joita ovat alhainen herkkyys, pitkä testausaika ja korkeat kustannukset. Siksi DNA-ja RNA-sekvenssien suoraan tunnistamiseen perustuvat testit suunnitellaan. Kaupallisesti saatavilla oleva DNA-koetin klamydian toteamiseksi on PACE 2 test (Probe Assay chemiluminescence Enhanced)48, jolla voidaan havaita myös Neisseria gonorrhoeae, joka on ei-isotooppinen DNA-koetin C. trachomatis-bakteerin R-RNA: n tiettyjen osien havaitsemiseksi endokervisessä ja virtsaputken näytteessä. On myös kehitetty toinen DNA-koetin, PACE 2C-testi, joka tunnistaa samanaikaisesti sekä C. trachomatis että N. gonorrhoeae yhdestä näytteestä; PACE 2C: n lisäarviointi on kuitenkin tarpeen ennen sen käyttöä diagnostiikassa. Näissä testeissä käytetään kemiluminesenssiin perustuvaa DNA – luotainta, joka risteytyy lajille ominaiseen klamydian 16S rRNA-sekvenssiin. Kun DNA-rRNA-hybridi on muodostettu, se adsorboituu magneettiseen helmeen ja kemiluminesenssivaste havaitaan kvantitatiivisesti luminometrillä. Koska aktiivisesti jakautuvat klamydiat sisältävät jopa 104 kopiota 16S rRNA: ta, PACE 2-testin pitäisi teoriassa olla herkempi kuin antigeenien havaitsemisjärjestelmät. PACE 2: n herkkyyttä suhteessa DNA: n monistumisstandardiin ei ole vielä hyvin arvioitu, mutta sen on raportoitu olevan 77-93 prosenttia 48: sta yhdessä tutkimuksessa.

nukleiinihapponvahvistusteknologiaan (Naat) perustuvien testien kehittäminen on ollut tärkein edistysaskel klamydian diagnosoinnissa, koska in vitro-soluviljelytekniikat korvasivat keltuaispussin viljelyä ja organismin eristämistä kliinisistä näytteistä varten. NAAT on vähintään 20-30 prosenttia herkempi (kykenee havaitsemaan niinkin vähän kuin yhden geenikopion) ja 100-prosenttisesti specific49,50. Se tarjoaa mahdollisuuden käyttää ei-invasiivisia näytteitä, kuten virtsaa, infektioiden seulomiseen oireettomilta henkilöiltä, jotka eivät tavallisesti hakeudu kliiniseen hoitoon. Tämä on kriittinen etu, sillä valtaosa klamydiatartunnoista naisilla ja merkittävä osa tartunnoista miehillä on oireettomia. DNA: n monistustekniikoista tunnetuin on PCR. PCR voi olla suku -, laji -, ryhmä-tai kantakohtainen riippuen pohjustusmallista. C. trachomatis-bakteerin diagnosointiin tarkoitettuja geenejä ovat MOMP-geeni, endogeeninen plasmidi, fosfolipaasigeeni sekä 16S-ja 23s-rRNA-geeni. Koska kaikki nukleiinihappojen monistustekniikat havaitsevat nukleiinihappokohteita, positiivisen tuloksen saaminen ei riipu sen paremmin eliön elinkelpoisuudesta kuin ehjästä tilasta. Näin ollen näytteen kuljetus ei ole kriittinen asia49. Vaikka sitä ei ole tutkittu hyvin, doksisykliinihoidon jälkeisen viljelmän negatiivisen, PCR-positiivisen tilan ”ikkuna” näyttää kestävän jopa 3 wk29: ään. Tämän jälkeen potilasyksilöistä tulee sekä kulttuuri-että PCR-negatiivisia.

PCR-testi C: n toteamiseksi. trachomatis kehittämä Roche Diagnostics, Basel Switzerland (Roche-Amplicor) oli ensimmäinen PCR-testi, jonka FDA hyväksyi Yhdysvalloissa51. Vuodesta 1993 Amplicor PCR on arvioitu suhteellisen hyvin sekä urogenitaalisissa että virtsanäytteissä, ja yleinen herkkyys ja spesifisyys on 90 ja 99-100 prosenttia, vastaavasti 51. Amplicor PCR on hyväksytty kohdunkaulan, urosten virtsaputken ja urosten virtsanäytteille.

molekyylibiologian tekniikoiden räjähdyksen myötä uudemmat määritykset, kuten M2000-järjestelmä (Abbott) sekä strand-displacement amplification (SDA) (Bd ProbeTec strand displacement amplification developed by Becton Dickinson and Company, Diagnostic Systems, Franklin Lakes, N. J.) ja transkriptio-välitteinen amplification (TMA) (APTIMA system by Gen-Probe, Inc., San Diego) tuli C. trachomatisin saataville. Vaikka ne ovat suosittuja kehittyneissä maissa, niiden korkeat alku-ja ylläpitokustannukset estävät niiden käytön resurssipulassa.

taakka C. sukupuolielinten trachomatis-organismit (klamydiakuorma) voidaan havaita kvantitatiivisella reaaliaikaisella PCR: llä, ja niiden määrä voi vaihdella 10: stä yli miljoonaan organismiin/ml sukupuolielinten erittymistä52. Tämä todennäköisesti vaikuttaa erilaisten nukleiinihappovahvistustestien suorituskykyyn, sillä niissä ei rutiininomaisesti erotella ihmisiä, joilla on suuri ja alhainen klamydiakuormitus. Klamydiakuorman erojen on raportoitu liittyvän kliinisiin oireisiin, infektion tarttuvuuteen ja pysyvyyteen sekä kroonisten jälkitilojen riskiin53. Siksi klamydiainfektioiden diagnosoinnissa ja hoidossa kvantifioinnilla on ratkaiseva merkitys.

Naats on genitaalialueen klamydia-ja gonokokki-infektioiden seulonta-ja diagnosointitesteistä herkin. Epäilyjä niiden toimivuudesta vähäisen levinneisyyden alueilla on kuitenkin raportoitu 57,58. Vuonna 2002 CDC suositteli vahvistamaan C. trachomatis-bakteerin kaikki positiiviset naatit, kun testin positiivinen ennustearvo on <90 prosenttia 59. Naat-menetelmien todellisiksi erityispiirteiksi on kuitenkin todettu >99 prosenttia 54,55.

CDC on myös ehdottanut useita mahdollisia varmistusstrategioita59, joihin kuuluvat i) toisen näytteen testaus eri NAAT: lla, jonka herkkyys on sama tai suurempi ensimmäiseen testiin nähden, ii) eri Naat: lla, jonka herkkyys on sama tai suurempi ensimmäiseen testiin nähden, kohdistaen eri nukleiinihapposekvenssiin alkuperäiseen näytteeseen, iii) alkuperäisen testin toistaminen alkuperäisellä näytteellä ja iv) potilaan tuominen takaisin uusintatestiä varten.

kuvattu rajoitus on kuitenkin se, että useimmat lääkärit eivät kerää kahta näytettä samaa arviointia varten, eikä ole mahdollista palauttaa potilasta keräämään toista näytettä, ja useimmissa laboratorioissa ei ole tiloja / valmiuksia suorittaa kahta eri naattia.

varmistustestauksen käsite ei ole Uusi 57. Se kuitenkin vaikeuttaa Naat-positiivisen näytteen käsittelyä ja lisää kustannuksia jo ennestään kalliille seulontatestille. NAATs: n herkkyyttä on vielä mahdollista parantaa ehkä näytteiden paremmalla valmistamisella, automaatiolla tai tavoitepitoisuudella.

(ii) epäspesifiset testit

leukosyytti-esteraasi (LE) – testi on virtsanäytteiden kanssa käytettävä nopea mittatikkutesti. Tämä testi on suunniteltu virtsatietulehdusten toteamiseen toteamalla polymorfonukleaaristen (PMN) solujen tuottama entsyymi. Positiivisia LE-testituloksia saadaan useiden eri aineiden, kuten C. trachomatis ja N. gonorrhoeae, aiheuttamista infektioista.

le-testin herkkyys C. trachomatis-infektion toteamiseksi vaihtelee suuresti 31-100 prosentin välillä, ja ominaispiirteet vaihtelevat 83-100 prosentin välillä 60. LE-testiä on pidetty parhaana seulontatestinä nuorille miehille, ja useimpien raporttien mukaan sitä ei tulisi käyttää naisten tai vanhempien miesten näytteiden testaamiseen epätyydyttävän suorituskyvyn vuoksi.

(iii) POC (Rapid point of care)-testit

pikatestit, joita kutsutaan myös C. trachomatis-bakteerin ”hoitopistetesteiksi”, käyttävät YVA-tekniikkaa formaateissa, jotka perustuvat pääasiassa kalvojen talteenottoon tai lateksiin immunodiffuusioon. Pikatestit suoritetaan lääkärin vastaanotoilla, eivät vaadi kehittyneitä laitteita, ja ne voidaan suorittaa noin 30 minuutissa. Tulokset luetaan silmämääräisesti ja ovat siten laadullisia. Vaikka useita sarjat ovat kaupallisesti saatavilla, mutta mikään ei ole hyvin arvioitu. Yleensä pikatestit ovat huomattavasti vähemmän herkkiä ja spesifisiä kuin laboratoriossa suoritetut EIAs: t. PCR: ään verrattuna Clearview-testin herkkyys ja spesifisyys (Unipath Ltd., Iso-Britannia) 53, 8 ja 99, 1 prosentilla oli endokervinen vanupuikko, ja 31, 1 ja 95, 2 prosentilla filippiiniläisnaisista vaginanäytteet61. Pikatestit tarjoavat edun tavanomaisiin laboratoriotesteihin verrattuna vain silloin, kun tuloksia tarvitaan välittömästi potilaan hoitoon. Pikatestejä ei tule käyttää alhaisen esiintyvyyden väestölle eikä oireettomille henkilöille väärien positiivisten tulosten mahdollisuuden vuoksi. Pikatestin tuloksia on aina pidettävä oletettuina, ja jos ne ovat positiivisia, ne on vahvistettava laboratoriossa tehdyllä testillä.

yhteenvetona voidaan todeta, että vaikka kulttuuri on 100-prosenttisesti spesifinen, sen arvioitu herkkyys voi olla jopa 50 prosenttia. Suurin osa laboratorioista on siirtynyt pois kulttuurista siihen liittyvien kustannusten, ajan ja teknisten ongelmien vuoksi. Näin ollen viljelyn sijasta diagnostisena kultastandardina pidetään laajennettua kultastandardia / määriteltyä vertailustandardia eli yleisesti yhdenmukaista tulosta kahden Ei-viljeltävän tekniikan kanssa tutkimusvälineen43.

(iv) serologia

serologisista testeistä ei yleensä ole hyötyä C. trachomatis-bakteerin aiheuttamien sukupuolielinten infektioiden diagnosoinnissa. C. trachomatis-infektio on pitkäikäinen ja positiivinen vasta-ainetesti ei erota aiempaa nykyisestä infektiosta.