veren ja luuytimen analyysi

solususpensioiden tuottamiseen liittyvät rajoitukset eivät koske potilaita, joilla on kroonisia lymfoproliferatiivisia häiriöitä veressä tai luuytimessä. Näiden vaurioiden alaluokitus perustuu voimakkaasti virtaussytometriaan.42,44,49-51 krooninen lymfaattinen leukemia (KLL) määritellään olennaisesti sen immunofenotyyppiset ominaisuudet. Muilla B-solujen lymfoproliferatiivisilla häiriöillä on tyypillisiä, ellei aina ehdottoman spesifisiä fenotyyppejä. Manttelisolulymfooma voidaan usein tunnistaa leukemiavaiheessaan, joskin spesifisin merkkiaine, sykliini D1, on nykyisillä tekniikoilla hyvin vaikea havaita virtaamalla. Karvasoluleukemia, päinvastoin, ei ole vain ominaisuus, mutta myös erittäin spesifinen fenotyyppi 42, 50, 52; joskus, potilaat, joilla on selittämätön pansytopenia voidaan määrittää karvasoluleukemia kun vain pieni määrä verisoluja klassinen fenotyyppi tunnistetaan 52 (Kuva. 15-3).

Virtaussytometrialla voidaan havaita ennustavia tekijöitä myös kroonista lymfaattista leukemiaa sairastavilla henkilöillä. Koska KLL voidaan jakaa huonoennusteiseen tyyppiin, joka liittyy mutatoitumattomiin immunoglobuliini V: n alueen geeneihin, ja parempiennusteiseen mutatoituneeseen fenotyyppiin, useissa tutkimuksissa on pyritty tunnistamaan virtaussynnyttimiä. Ensimmäinen ennusteeksi todettu merkkiaine oli CD38, joskin korrelaatio joko mutaatiotilan tai ennusteen kanssa on epätäydellinen.53,54 Zeta-ketjuun liittyvä proteiinikinaasi 70 (ZAP 70) näyttää olevan parempi korvike marker, vaikka sekään ei ole täydellinen; se antaa kuitenkin ennustavaa tietoa.55-57 vaikka tämä määritys on laajalti saatavilla erityisesti kaupallisissa vertailulaboratorioissa, positiivisten ja negatiivisten raja-arvot voivat olla mielivaltaisia, ja näin ollen tulokset voivat vaihdella merkittävästi laboratorioiden välillä.Uusittavuutta on yritetty parantaa 58,59 kertaa,60 mutta ei ole aina varmaa, antaako tietty määritys samat tulokset kuin julkaistussa kliinisessä kirjallisuudessa. Lisäksi on yritetty määritellä ennusteellisesti merkittäviä KLL-potilaiden alaryhmiä käyttäen muita merkkiaineyhdistelmiä,61, mutta näitä yhdistelmiä ei ole otettu käyttöön rutiinikäytännössä.

virtaussytometrian ensisijainen arvo arvioitaessa kroonisia leukemioita on sen kyky osoittaa klonaalisuutta B-solupopulaatioissa yhden immunoglobuliinin valoketjun rajoittuneen ilmentymisen perusteella. Tämä ominaisuus on erityisen arvokas arvioitaessa potilaita, joilla on selittämätön lymfocytosis62, 63 ja on myös hyödyllistä määrittää vaiheen potilaiden B-solu Non-Hodgkin lymfooma,64,65 koska läsnäolo niinkin vähän kuin 0,5%-1% kloonisen B-solupopulaation, tai jopa vähemmän, voidaan osoittaa luuytimessä tai veressä joidenkin potilaiden. Virtaussytometrian korkea herkkyys kloonisten populaatioiden havaitsemiseksi on kuitenkin osoittanut pieniä kloonisten B-solujen populaatioita joillakin potilailla, joilla ei ole selvää lymfoomaa tai leukemiaa.Näin ollen pienen luuydinkloonin löytymistä on tulkittava varoen, koska lymfoomasta ei ole muita todisteita, mikä vastaa monoklonaalisen gammopatian toteamista potilaalta, jolla ei ole myeloomaa.

Virtaussytometriaa on käytetty runsaasti myös myeloomapotilaiden tutkimuksessa. Yksi virtaussytometriaa rajoittava tekijä on se, että plasmasolut ovat aliedustettuina virtauksella tutkituissa luuytimen aspiraateissa verrattuna solujen esiintyvyyteen kalvoissa tai koepaloissa; tämän vuoksi tätä tekniikkaa ei voida käyttää myeloomasolujen kvantifiointiin, eikä sillä näin ollen voida korvata morfologiaa perinteisiä diagnostisia kriteerejä sovellettaessa. Plasmasoluilla on kuitenkin tunnusomainen fenotyyppi, johon kuuluvat CD38: n hyvin kirkas ilmentymä ja CD138: n,67: n ja 68: n ilmentymä,joten ne on helppo tunnistaa. Kalvopermeabilisaatiotekniikoiden avulla on helppo osoittaa sytoplasminen immunoglobuliini (Ig) valoketjun rajoitusta.On merkityksellisempää, että neoplastisissa plasmasoluissa on yleensä poikkeavia fenotyyppejä. Vaikka mikään yksittäinen spesifinen fenotyyppinen poikkeavuus ei oikeuta tekemään eroa hyvänlaatuisen monoklonaalisen gammopatian ja myelooman välillä, virtaussytometriasta voi silti olla apua myelooman erottamisessa monoklonaalisesta gammopatiasta, jonka merkitystä ei ole määritelty, tai määrittelemättömän monoklonaalisen gammopatian tai kytevän myelooman etenemisen ennustamisessa.69-71 myeloomaa diagnosoitaessa on lisäksi osoitettu, että epänormaalien plasmasolujen virtaussytometrisellä arvioinnilla on prognostista merkitystä.Myeloomapotilailla myeloomaa sairastavien potilaiden hoitotulosta ennustetaan myös kiertävien plasmasolujen toteamisella tai poikkeavan fenotyypin säilymisellä hoidon jälkeen, mukaan lukien vähäisen jäännössairauden toteaminen.69,71,73-76

t-solupopulaatioiden Klonaalisuus voidaan osoittaa myös virtaussytometrialla, vaikka menetelmä on monimutkaisempi eikä ole yhtä laajalti saatavilla kuin B-soluissa käytetty menetelmä. Tämä tekniikka perustuu V-beeta-geenin käytön rajoittamisen osoittamiseen T-soluleukemioissa.77-79 T-solujen maligniteeteissa esiintyy usein myös poikkeavia T-solujen fenotyyppejä, joille on useimmiten ominaista normaalin pan-t-antigeenin häviäminen tai T-solun antigeenin ilmentyminen epänormaalilla voimakkuudella.44,80,81 koska tiettyjä pieniä, epätavallisia ja jopa kloonisia T-solupopulaatioita voidaan nähdä pieninä määrinä ei-neoplastisissa olosuhteissa, tämän tekniikan herkkyys on rajoittuneempi kuin kloonisen B-solupopulaation osoittaminen. Kuitenkin, kun epänormaalit T-solut ovat enemmän kuin hyvin pieni osa soluista, moniparametrinen virtaussytometria osoittaa ne helposti ja sillä on merkittävä rooli näiden harvinaisten kasvainten luokittelussa.