laboratoriodiagnoosi

erotusdiagnoosi muiden amebojen joukossa

patogeeniset Entamoeba-lajit on erotettava muista suoliston alkueläimistä, kuten ei-patogeenisistä ameboista (Entamoeba coli, E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Jodamoeba buetschlii) ja flagellaatti Dientamoeba fragilis. Morfologinen erilaistuminen näiden välillä on mahdollista, mutta mahdollisesti monimutkaista, perustuen kystien ja trofotsoiittien morfologisiin ominaisuuksiin.

viljelmässä E: n kasvuominaisuuksien eroavaisuudet. moshkovskii voi auttaa erottamaan sen muista lajeista, mutta viljelymenetelmillä on merkittäviä rajoituksia (puuttuvat sekatartunnat, saastuminen, työvoimavaltainen, rajoitettu saatavuus). Historiallisesti E. disparin ja E. histolytican eriyttäminen perustui isoentsymaattiseen tai immunologiseen analyysiin, mutta näitä ei enää suosita tehokkaiden molekyylimenetelmien saatavuudella ja niitä tehdään harvoin. Nykyisin suositellaan molekyylimenetelmiä patogeenisten Entamoebalajien erottamiseksi.

mikroskooppinen havaitseminen

kystien ja trofotsoiittien mikroskooppinen tunnistaminen ulosteesta on yleinen menetelmä patogeenisten Entamoebalajien diagnosoinnissa. Tämä voidaan tehdä käyttämällä:

• tuoretta ulostetta: kosteita kiinnikkeitä ja pysyvästi värjättyjä valmisteita (esim.trikromia).
• Tuorejakkaran Konsentraatit: märkätelineet, joissa on tai ei ole joditahraa, ja pysyvästi värjätyt valmisteet (esim.trikromi). Vaikka se on hyödyllinen kystille, keskittymismenetelmät eivät välttämättä ole hyödyllisiä trofotsoiittien osoittamisessa.
• mikroskopialla on myös heikko herkkyys, jos analysoidaan vain yksi ulostenäyte, ja se vaatii morfologiseen diagnosointiin koulutettua henkilökuntaa. Kolmen peräkkäisen ulostenäytteen kerääminen ja analysointi kymmenen päivän sisällä parantaa havaitsemismahdollisuuksia. Myöskään E. dispar, E. histolytica ja E. moshkovskii eivät ole erotettavissa morfologian perusteella.

Trofotsoiitteja voidaan tunnistaa myös kolonoskopian tai leikkauksen yhteydessä otetuista aspiraatti-tai biopsianäytteistä.

Immunodiagnoosi

Enzyme immunoassay (EIA) – sarjat Entamoeba histolytica-vasta-aineiden määritystä varten sekä EIA-sarjat antigeenin määritystä varten ovat kaupallisesti saatavilla Yhdysvalloissa. Vasta-aineiden osoittaminen on hyödyllisintä potilailla, joilla on ruoansulatuskanavan ulkopuolinen sairaus (eli amebinen maksapaise), kun organismeja ei yleensä löydy ulostetutkimuksessa. Vasta-aineiden osoittamisella on rajallinen diagnostinen arvo potilailla, jotka tulevat erittäin endeemisiltä alueilta, joilla on todennäköisesti aiempi altistus ja serokonversio, mutta siitä voi olla enemmän hyötyä potilaille alueilta, joilla patogeeniset Entamoeba spp. ovat harvinaisia. Antigeenin toteaminen aktiivisten infektioiden aikana voi olla hyödyllistä mikroskooppisen diagnoosin lisänä loisten havaitsemisessa, ja sillä voidaan erottaa patogeeniset ja ei-patogeeniset infektiot.

vasta-aineiden toteaminen

epäsuora hemagglutinaatiotesti (IHA) on korvattu kaupallisesti saatavilla olevilla EIA-testipakkauksilla amebiaasin rutiiniserodiagnostiikkaa varten. Antigeeni koostuu akseenisesti viljellyistä organismeista muodostuvasta raakaliukoisesta uutteesta. EIA-testissä todetaan E: lle spesifinen vasta-aine. histolytica noin 95%: lla potilaista, joilla on ruoansulatuskanavan ulkopuolinen amebiaasi, 70%: lla potilaista, joilla on aktiivinen suolistotulehdus, ja 10%: lla oireettomista henkilöistä, jotka kulkevat kystia E. histolytica. Jos vasta-aineita ei voida havaita potilailla, joilla on akuutti epäilty amebinen maksapaise, otetaan toinen näyte 7-10 päivää myöhemmin. Jos toisessa näytteessä ei ilmene serokonversiota, on harkittava muita lääkeaineita. Havaittavissa Oleva E. histolytic-spesifiset vasta-aineet saattavat säilyä vuosia onnistuneen hoidon jälkeen, joten vasta-aineiden esiintyminen ei välttämättä kerro akuutista tai nykyisestä infektiosta. Myös potilaat, jotka ovat eläneet erittäin endeemisillä alueilla, ovat todennäköisesti seropositiivisia aiemman altistuksen vuoksi. Spesifisyys on 95% tai suurempi: vääriä positiivisia reaktioita esiintyy harvoin.

vaikka E. histolyticalle spesifisiä IgM-vasta-aineita on todettu, herkkyys on vain noin 64% potilailla, joilla on nykyinen invasiivinen sairaus. Yhdysvalloissa on saatavilla useita kaupallisia YVA-pakkauksia vasta-aineiden toteamiseen. E. disparille tai E. moshkovskille tai E. Bangladeshille ei ole olemassa kaupallisia vasta-ainetunnistussarjoja.

antigeenin osoittaminen

antigeenin osoittaminen voi olla hyödyllistä mikroskooppisen diagnoosin lisäksi loisten havaitsemisessa ja patogeenisten ja ei-patogeenisten infektioiden erottamisessa toisistaan. Hyötyosuus on kuitenkin rajoitettu pakastettuihin tai kiinteisiin yksilöihin sekä käsittelyn jälkeisiin yksilöihin. Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että ulosteen antigeenimääritysten herkkyys ja spesifisyys ovat parantuneet käyttämällä monoklonaalisia vasta-aineita, jotka voivat erottaa E. histolytica-ja E. dispar-infektiot. Saatavilla on ainakin yksi kaupallinen pakkaus, joka havaitsee ainoastaan patogeenisen E. histolytica-infektion ulosteessa; useita pakkauksia, jotka havaitsevat E. histolytica-antigeenin ulosteessa, mutta eivät sulje pois E. dispar-infektioita.

Molekyylidiagnoosi

tavanomainen PCR

vertailudiagnostiikkalaboratorioissa tavanomaisilla PCR-pohjaisilla määrityksillä tehtävä molekyylianalyysi on valinta E. histolytican ja E. disparin erottelemiseksi toisistaan. Joissakin määrityksissä voidaan myös erottaa E. moshkovskii.

reaaliaikainen PCR

CDC: ssä on validoitu TAQMAN-reaaliaikainen PCR-lähestymistapa, jota käytetään amebiaasin differentiaalilaboratoriodiagnostiikassa. Määritys kohdistuu 18S rRNA-geeniin lajispesifisillä taqman-luotaimilla duplex-muodossa, mikä mahdollistaa sekä E. histolyrican että E. disparin havaitsemisen samassa reaktioastiassa.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Vertailu reaaliaikainen PCR perustelut differential laboratory diagnoosi amebiasis. J Clin Microbiol 2005;43: 5491-5497.

laboratorion turvallisuus

kystat sekoittamattomissa ulostenäytteissä saattavat infektoida. Noudata vakiomuotoisia varotoimia, joita sovelletaan ulostenäytteisiin: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.