Abstrakti

Tämä tutkimus suunniteltiin arvioimaan oksidatiivista stressiä sekä agaricus blazei Murilin (A. Blazei) terapeuttista vaikutusta rotilla, joilla oli streptotsotosiinin aiheuttama diabetes. Käytimme 25 Wistar-rottaa, ja DM indusoitiin pistämällä streptotsotosiinia (70 mg/Kg i.p.). Agaricus blazei Muril-valmistetta annettiin päivittäin 40 päivän kuluttua taudin puhkeamisesta. A. Blazei testattiin vesipitoisena uutteena sen fytokemikaalista koostumusta varten, ja sen antioksidanttista aktiivisuutta in vitro arvioitiin myös. Lipoperoksidaatiota (LPO) ja superoksididismutaasin (SOD), katalaasin ja glutationiperoksidaasin aktiivisuutta mitattiin keuhkokudoksesta sekä indusoituvan typpioksidisyntaasin (iNOS) esiintymistä immunohistokemian kautta. Lisäksi tehtiin anatomopatologinen tutkimus. Phytochemical seulonta A. Blazei havaittu läsnäolo alkaloideja ja saponiineja. Uutteella oli merkittävä antioksidanttiaktiivisuus DPPH-scavenging-ja hipoksantiini / ksantiinioksidaasi-määrityksissä. Keuhkojen LPO-arvo suureni diabeetikoilla (; ) verrattuna verrokkiryhmään (), minkä jälkeen A. Blazei-hoitoa saaneessa ryhmässä pieneni (; ). Inosin todettiin suurentuneen diabeetikkorottien keuhkoissa ja pienentyneen A. Blazei-hoitoa saaneessa ryhmässä. Diabeettisten rottien keuhkokudoksessa ilmeni streptotsotosiinihoitoon liittyviä oksidatiivisia muutoksia. A. Blazei hoito tehokkaasti vähensi oksidatiivista stressiä ja osaltaan kudosten elpymistä.

1. Johdanto

Diabetes mellitus (DM) on endokriininen aineenvaihduntasairaus, jonka esiintyvyys ja kliininen merkitys kasvavat ja johon liittyy korkea sairastuvuus ja kuolleisuus . Sen kroonisiin komplikaatioihin kuuluvat mikro-ja makroverisuonisairaudet, jotka liittyvät munuais -, sydän-ja hermostoon . Kahden viime vuosikymmenen aikana hengitystoimintojen muutoksia on kuitenkin raportoitu myös kliinisissä ja kokeellisissa tutkimuksissa. Keuhkojen toiminta heikkeni vuosien mittaan suhteessa pienentyneeseen keuhkojen tilavuuteen ja kapasiteettiin diabetespotilailla, joilla oli heikentynyt hoitotasapaino . DM: ssä esiintyy myös keuhkokapillaarisen endoteelin tyvikalvon rakenteellisia muutoksia, jolloin alveolus-kapillaarikalvo paksuuntuu ja diffuusiokyky heikkenee . Lisäksi diabeetikot ovat alttiimpia keuhkotulehduksille, erityisesti tuberkuloosille, jota esiintyy tässä nimenomaisessa väestössä neljä kertaa enemmän . Vaikka kaikki nämä muutokset havaittiin kliinisissä ja kokeellisissa tutkimuksissa, vain harvoissa tutkimuksissa tutkittiin tärkeimpiä fysiologisia mekanismeja, joihin liittyi DM: ään liittyviä keuhkokomplikaatioita.

DM: n kroonisiin komplikaatioihin liittyy 4 reittiä: polyolireitti, proteiinikinaasi C: n (PKC) aktivaatio, heksosamiinireitin lisääntynyt virtaus ja pitkälle edenneiden glykosilaation lopputuotteiden reitti (AGE). Vaikka oksidatiivinen stressi (OS) esiintyy kussakin tapauksessa eri tavalla, se liittyy edellä mainittuihin neljään reitiin .

on runsaasti näyttöä siitä, että indusoituvan typpioksidisyntaasin (inos) vaikutuksesta muodostuvan typpioksidin (NO) lisääntyminen on yksi tekijöistä, jotka ovat vastuussa sekä patogeneesistä että DM: n aiheuttamista komplikaatioista . Eksogeenisten antioksidanttien käyttö voi edustaa suurta terapeuttista potentiaalia DM: n

hoidossa basidiomycete Agaricus blazei Murill (A. Blazei), joka tunnetaan yleisesti nimellä ”aurinkosieni”, on kotoisin Brasiliasta ja laajalti viljelty Japanissa sen lääkinnällisten ominaisuuksien vuoksi. Tämä sieni on perinteisesti käytetty ateroskleroosin, hepatiitin, hyperlipidemian, dermatiitin ja syövän hoidossa, ja sillä on osoitettu olevan immunomoduloivia ja antimutageenisia vaikutuksia sekä in vivo että in vitro. Polysakkaridit α-glykaani ja β-glykaani ovat vastuussa immunologisen ja antitumoraalisen stimulaation toiminnasta .

A. Blazein on jo osoitettu olevan hyödyllinen tyypin 2 diabetekseen liittyvässä insuliiniresistenssissä, mutta mikään tutkimus ei ole osoittanut A. Blazein antioksidanttipotentiaalia in vivo DM: ssä . Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli siis arvioida oksidatiivista stressiä sekä A. Blazein terapeuttista vaikutusta streptotsotosiinin indusoimaa DM: ää sairastavien eläinten keuhkokudoksessa.

2. Menetelmät

2. 1. Sienet

ilmakuivatut agaricus blazei Murill-lajin sienet (C-tyyppiä) olivat lahja tohtori Luiz Antônio Graciollolta São Paulon valtionyliopiston Engeneringin laitokselta (UNESP) Brasiliasta.

2, 2. A. blazein vesipitoisen uutteen

ilmakuivatut osat (100 g) jauhettiin ja uutettu vesiaine valmistettiin infuusiona (1/10 sieni / liuotin). Infuusio oli huoneenlämmössä 30 minuuttia. Jäähdytyksen ja suodatuksen jälkeen uute jäädytettiin ja tiivistettiin kylmäkuivauksella viiden päivän ajan yön yli, jotta saatiin A. blazei vesipitoinen uute.

2, 3. Kemikaalit ja reagenssit

2,2-Difeniili-1-pikryylihidratsyyli (DPPH), hypoksantiini, ksantiinioksidaasi, trolox ja salisyylihappo ostettiin Sigmalta (St. Louis, USA).

2, 4. Fytokemiallinen seulonta

A: n fytokemiallinen analyysi (flavonoidit, tanniinit, antrakinonit, alkaloidit, saponiinit, kumariinit ja sydänglykosidit). blazei toteutettiin Harbornen kuvaamien menetelmien mukaan . Ohutkerroskromatografian analyysit tehtiin Wagnerin ja Bladtin osoittamien järjestelmien ja kehittäjien mukaan .

2, 5. Hypoksantiini / ksantiinioksidaasin määritys

uutteiden hydroksyyliradikaalin keräämiskyvyn määritysmenetelmä perustui Owenin et al-menetelmään. . Uute liuotettiin lyhytaikaisesti määrityspuskuriin(hypoksantiini, Fe (III), EDTA ja salisyylihappo) pitoisuutena 2, 0 mg/mL ja laimennettiin asianmukaisesti (kolmena kappaleena) määrityspuskuriin lopulliseksi tilavuudeksi 1.0 mL, jolloin vaihteluväli on 0, 1-2, 0 mg / mL. Reaktion käynnistämiseksi lisättiin 5 L: n määräosa 3,2 M (NH4)2so4: ään liuotettua ksantiinioksidaasia. Näyteputkia inkuboitiin 3 tuntia 37°C: n lämpötilassa, jolloin reaktio oli täydellinen. Reaktioseoksesta analysoitiin 30 L: n erä HPLC: llä Owenin ym.kuvaamien kromatografisten olosuhteiden avulla. . Kromatografinen analyysi tehtiin käyttäen metanoli/vesi/etikkahappoon perustuvaa gradienttia, jossa oli µBondaPak C18-käänteisfaasikolonni ja detektointi 325 nm: ssä. HPLC-laitteissa oli erotusmoduuli 2695 ja UV-detektori 2487. Salisyylihapon hydroksylaatiota seurattiin aallonpituudella a = 325 nm ja hypoksantiinin hydroksylaatiota aallonpituudella a = 278 nm. Dihydroksifenolien (2,5-dihydroksibentsoehappo ja 2,3-dihydroksibentsoehappo) (2,5-DHBA ja 2,3-DHBA) määrä, jota hydroksyyliradikaali (OH•) hyökkää salisyylihappoa vastaan, määritettiin standardikäyristä, jotka on valmistettu vastaavilla puhtailla dihydroksifenoleilla.

2, 6. DPPH-Scavenging Assay

scavenging of DPPH free radical was measured using a modified method described by Yamaguchi et al. jossa erilaisia metanolisia kasviuutteita lisättiin Tris-HCl (100 mM) – puskuriin, pH 7,0, joka sisältää 250 mM DPPH: ta metanoliin liuotettuna. Kunkin uutteen vähintään kuusi eri laimennosta testattiin, ja niiden annettiin seistä 20 minuuttia pimeässä, ennen kuin absorbanssi mitattiin 517 nm: ssä Shimadzu-spektrofotometrimallilla UV-1602PC (Kioto, Japani). Kokeilu toteutettiin kolmena kappaleena. Antioksidanttiaktiivisuus (AOA) ilmaistiin IC50: nä (estopitoisuus g/mL näytteissä tai positiivisissa kontrolleissa, jotka ovat tarpeen DPPH: n absorbanssin vähentämiseksi 50% negatiiviseen kontrolliin verrattuna). Mitä alempi IC50, sitä korkeampi on AOA .

2, 7. Eläimet ja Koeprotokolla

käytetty koeprotokolla oli Porto Alegressa sijaitsevan Hospital de Clínicasin tutkimus-ja jatko-opintoryhmän eettisen ja Terveystutkimuskomitean vahvistamien normien sekä NAS: n (Principles for Research with Animals) mukainen. Tutkimuksessa käytettiin ainoastaan urosvistarottia, jotka saatiin Instituto de Ciências Básicas da Saúde da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) – nimisestä jalostussiirtokunnasta. Eläinten keskipaino tutkimuksen alussa oli 200-300 grammaa. Niitä pidettiin 12: 12 tunnin valo-/pimeäsyklissä (valo klo 7-19) lämpötilasäädellyssä ympäristössä (22 ± 4°c).

DM indusoitiin yhdellä streptotsotosiini i.p. – injektiolla (STZ, Sigma Chemical Company, St. Louis, MO, EUA) annoksella, joka oli 70 mg painokiloa kohti . STZ liuotettiin natriumsitraattipuskuriin (0,1 M, pH 4.5) ja annetaan eläimen vasemmalle vatsan alueelle noin 10 minuuttia puskuriliuokseen liukenemisen jälkeen. Kontrolliryhmän eläimet saivat vain NaCl 0, 9% i.p.: tä samalla tilavuudella STZ: n liuottamiseen käytettyä puskuria. A. blazei-uute laimennettiin 0,1 g/mL (10%) konsentraatioon tislatussa vedessä ja jätettiin 2 tunniksi huoneenlämpöön . Antoreittinä käytettiin 2 mL: n mahaletkua lopullisena liuoksena ja hoito aloitettiin diabeteksen induktiopäivästä alkaen 40. Eläimet satunnaistettiin eri ryhmiin: kontrolli (CO), NaCl: llä (DM) hoidettu diabeetikko ja A. blazei-valmisteella (DM + A. blazei) hoidettu diabeetikko. Verinäytteet kerättiin retrokuopan pleksistä päivää ennen induktiota ja 2 ja 30 päivää kokeen alkamisen jälkeen. 60 päivää kestäneen kokeen päätteeksi eläimet saivat eutanasian verenlaskun jälkeen, kun ne oli nukutettu ksilasiinilla ja ketamiinilla. Takaoven pleksistä otettiin verinäytteet ja oikea keuhko leikattiin pois ja säilytettiin 4% formaldehydissä histologista analyysiä varten. Vasen keuhko poistettiin ja jäädytettiin -80°C: ssa lisäanalyysejä varten.

2, 8. Seerumianalyysit

verinäytteet laitettiin koeputkeen hepariinilla (Liquemine) hyytymisen välttämiseksi. Tämän jälkeen ainetta sentrifugoitiin 1 800 grammaan 15 minuutin ajan. Sakka hävitettiin ja plasma poistettiin.

glukoosi -, kolesteroli-ja triglyseridipitoisuuksien määrittämiseen käytimme kolorimetristä entsymaattista testiä (Kit Labtest, Bio Diagnóstica) ja absorbanssi mitattiin spektrofotometrillä (CARY 3E-UV-näkyvä Spektrofotometri Varian). Eläimiä, joiden glukoosipitoisuus oli yli 250 mg/dL, pidettiin diabeetikkoina.

2, 9. Biokemialliset analyysit oksidatiivisesta stressistä ja Antioksidanttimäärityksestä

keuhkot homogenoitiin 9 mL: lla fosfaattipuskuria (KCL 140 mM, fosfaatti 20 mM, pH 7.4) kudosgrammaa kohti. Näiden keuhkohomogenaattien proteiinipitoisuus määritettiin naudan albumiinin standardiliuoksella Lowry et al-menetelmän mukaisesti. .

keuhkojen lipoperoksidaatio määritettiin tiobarbituurihapporeaktiivisten aineiden (TBA-RS) menetelmällä .

superoksididismutaasin (SOD) aktiivisuus keuhkokudoksessa määritettiin menetelmällä, joka perustui adrenaliinin autoksidaation adrenokromin muodostumisen estoon . Katalaasin (CAT) aktiivisuus keuhkokudoksessa määritettiin muualla kuvatulla tavalla ja seleeniriippuvaisen glutationiperoksidaasin määritys keuhkokudoksessa saatiin menetelmällä, jossa NADPH-hapetus mitataan glutationireduktaasilla .

2, 10. Histologinen tutkimus

histologista analyysia varten näytteet upotettiin parafiiniin kahdesti. Mikrotomilla parafiinilohkot leikattiin 3-metrisiksi sarjalohkoiksi. Värjäysvaiheessa diat upotettiin hematoksyliini-eosiiniin ja pikrosiriokseen. Nestehukkavaiheessa rakenteet kävivät läpi kolme säiliötä, joissa oli absoluuttista alkoholia ja kaksi säiliötä, joissa oli ksylolia. Lukeminen suoritettiin valomikroskopialla (Nikon Labophot)100. Analyysin teki kaksi patologia, jotka eivät tunteneet tutkimuksen yksityiskohtia.

2, 11. Inos

-Immunohistokemialliset reaktiot osoitettiin keuhkokudososastoilla streptavidiini-biotiiniperoksidaasikompleksin (StreptABC, Dako) tekniikalla. Diat päällystettiin aiemmin 4-prosenttiseen asetoniin laimennetulla silaaniliuoksella (APTS, Sigma). 3 metrin paksuiset osat saatiin mekaanisella mikrotomilla. Tämän jälkeen osat poistettiin ja upotettiin peräkkäin ksyloliin ja etanoliin ja alistettiin antigeeniselle talteenotolle säteilytyslämmöllä painekattilassa (Eterna, Nigro) sitraattipuskurilla (10 mM, pH 6,0) 15 minuutin ajan. Peroksidaasin esto suoritettiin 3%: n vetyperoksidiliuoksella, minkä jälkeen inkuboitiin primaarisella vasta-aineella NOS-2 : ta vastaan (iNOS, 1: 40, Santa Cruz). Reaktiot merkittiin 60 mg: n diaminobentsidiiniliuoksella (Dab, Sigma) ja vastattiin Harrisin hematoksyliinilla (Merck). Jokaisesta reaktiosta käytettiin positiivista kontrollia kudokseen, jonka tiedettiin olevan positiivinen testatulle vasta-aineelle. Lisäksi käytettiin kahta negatiivista kontrollia, joista ensimmäinen johtui primaarisen vasta-aineen puuttumisesta ja toinen sekundaarisen vasta-aineen poistamisesta reaktiovaiheiden aikana. Tapauksia pidettiin iNOS-positiivisina, kun ruskeaa väriä oli havaittavissa vähintään kohtalaisella voimakkuudella solulimassa ja yli 10 prosentissa soluista.

2, 12. Tilastoanalyysi

tiedot on esitetty keskiarvona ± keskihajonta (SD), ja ne on analysoitu tilastollisen SPSS 15.0-ohjelmiston avulla. Muuttujien normaalius testattiin Kolmogorov-Smirnov-testin avulla. Ryhmien välisissä eroissa käytettiin yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA). Parametrisille muuttujille käytettiin opiskelijan Newman-Keuls post hoc-testiä ja nonparametrisille Kruskal-Wallis-testiä. Käytetty merkittävyystaso oli .

3. Tulokset

3.1. A. blazein fytokemialliset analyysit

Fytokemialliset analyysit osoittivat saponiinien ja alkaloidien esiintymisen. Muita sekundaarimetaboliitteja kuten antrakinoneja, sydänglykosideja, kumariineja, flavonoideja, fenolihappoja ja tanniineja ei havaittu.

3, 2. Hypoksantiini / ksantiinioksidaasi in Vitro-määrityksessä

uutteen antioksidanttiaktiivisuus in vitro määritettiin seuraamalla hydroksyylibentsoehappojen (DHBA) tuotantoa hydroksyyliradikaalin hyökätessä salisyylihappoa vastaan hipoksantiini-ksantiinioksidaasimäärityksessä. Kokonaishapetustuotteiden pelkistäminen määritykseen lisätyn A. blazei-vesiuutteen pitoisuuden funktiona johti in vitro-antioksidanttikapasiteettiin annosriippuvaisesti. A. blazein vesipitoinen uute vähensi molempien DHBA-lajien muodostumisen 45.2% suurimmalla käytetyllä pitoisuudella (2 mg/mL). IC50-arvo laskettiin ja todettiin 0,99 mg / mL. Kontrollinäytteenä käytettiin toista sienityyppiä (Lentinula edodes), jonka osalta tekijät eivät löytäneet alkaloideja (IC50, 1,95 mg/mL). Troloxia (E-vitamiinia) käytettiin positiivisena kontrollina, ja sen IC50-arvo oli 0,34 mg/mL (Kuva 1).

3, 3. DPPH-Scavenging Assay

the free radical scavenging effect of the both of A. blazei aqueous extract, L. edodoesin vesipitoinen uute sekä trolox testattiin positiivisena kontrollina käyttäen DPPH: n vapaiden radikaalien scavenging-määritystä . A. blazei-vesiuutteen ja L. edodes-uutteen IC50-arvot esitetään taulukossa 1. Positiivisena kontrollina käytetyn troloxin vapaiden radikaalien huuhteluvaikutuksen tuloksia (IC50 = 0, 02 mg/mL) käytettiin määrityksen validointiin. Vaikka uutteiden vapaiden radikaalien huuhtelukapasiteetti oli pienempi (suurempi pitoisuus on tarpeen vähentää DPPH: n absorbanssia 50%: lla) kuin troloxin vaikutus, A. blazei-vesipitoinen uute (korkein flavanonipitoisuus) esitti lupaavan antioksidanttiaktiivisuuden IC50: llä 1,77 mg/mL. L. edodesilla taas oli pienin haaskausaktiivisuus (IC50 = 3,22 mg / mL), mikä on sopusoinnussa alkloidien puuttumisen kanssa tässä sienilajissa.

3, 4. Paino ja Seerumianalyysit

diabeetikkoeläinten paino laski merkittävästi, ja A. Blazei-hoitoa saaneet eläimet laihtuivat vielä enemmän (Taulukko 2). A. Blazei-uute ilmeisesti vähensi sokeritautirottien glykemiaa (), mutta glykeeminen käyrä oli samanlainen diabeetikoilla ja hoidetuilla eläimillä. A. Blazei kuitenkin vähensi merkittävästi kokonaiskolesteroli-ja triglyseridipitoisuuksia (). DM-ja DM + A. Blazei-ryhmillä oli eri otoskoot DM-ryhmän eläinten suuremman kuolleisuuden vuoksi kokeen aikana.

3, 5. Biokemiallinen analyysi ja oksidatiivinen stressi

A. Blazei vähensi merkitsevästi () TBA-RS: n määrittämiä lipoperoksidaatiotasoja (Taulukko 3). Antioksidanttisten entsyymien SOD: n ja CAT: n aktiivisuudessa ei kuitenkaan havaittu eroja ryhmien välillä. Entsyymin GPX-aktiivisuus lisääntyi merkitsevästi diabetesryhmässä ja väheni A. Blazei-hoitoa saaneessa ryhmässä ().

3.6. Histologinen analyysi

STZ: n aiheuttama Diabetes Mellitus aiheutti vakavan verisuonivaurion keuhkokudokseen (kuva 2(c)), jossa todettiin myös alveolaarisia muutoksia, kuten Sept: n repeämä. Pikrosirius-värjäytyminen paljasti konjunktiivisen kudoksen laajenemisen diabetesryhmän alveolokapillaaritilassa(kuva 2 (d)) ja tämän kuvion näennäisen palautumisen Ab-hoidetussa ryhmässä(kuva 2 (f)).

(a)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

Figure 2

hän (A, c ja e) ja pikrosirius (b, d ja f) värjäämän keuhkokudoksen histologia. Suurennus 100: A) ja b): kontrolli, c) ja d): Diabetes Mellitus, e) ja f): Agaricus blazei-valmisteella hoidettu Diabetes Mellitus.

3, 7. Inos

Kuvan 3 immunohistokemiallinen analyysi osoittaa inos: n jakautumisen keuhkokudoksessa immunohistokemian kautta todettuna. DM-ryhmän keuhkojen keuhkoputkiepiteelissä ja kapillaarisessa endoteelissa havaittu ruskea positiivinen tahra osoitti inos-positiivisuutta. inos-värjäytyminen ei näkynyt yhtä selvästi A: ssa. Blazei group and absent in the CO group.

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figure 3

iNOS immunohistochemistry in lung tissue. Magnification 400: There was no staining in the control group (a); reduction in the treated group (b) versus DM (c).

4. Keskustelu

tulokset A. blazein vesipitoisen uutteen vapaiden radikaalien syövyttävästä vaikutuksesta hipoksantiini / ksantiinioksidaasi in vitro-määrityksessä ja DPPH: n vapaiden radikaalien huuhtelumäärityksessä osoittivat merkittävää antioksidanttista vaikutusta in vitro. Molemmissa määrityksissä uutteella on suurempi antioksidanttiaktiivisuus verrattuna L. edodesin vesiuutteeseen, joka on toinen sienilaji ja jossa esiintyy ainoastaan saponiineja, mutta ei alkaloideja, flavonoideja tai tanniineja. Sitä ovat ehdottaneet Ribeiro et al. että antioksidantti aktiivisuus voi liittyä läsnäolo alkaloideja sieni. Toisin sanoen korkeammat alkaloidipitoisuudet tuottavat parempaa antioksidanttiaktiivisuutta .

tämän tutkimuksen tärkein löydös oli keuhkojen lipoperoksidaation väheneminen rotilla, joilla oli streptotsotosiinin aiheuttama diabetes Agaricus blazei-hoidon jälkeen. Aiemmissa tutkimuksissa on havaittu glykemiaa vähentävä vaikutus, joka vähentää insuliiniresistenssiä ja lisää sen haiman solujen vapautumista. Kuitenkin A. Blazei hoito täällä osoitti suotuisa vaikutus muuttujia, jotka liittyvät oksidatiivista stressiä, vaikka ei vähennä hyperglykemia.

Kim ym. kuvattu A. Blazeista uutettujen glukaanien ja sen entsymaattisesti hydrolysoitujen oligosakaridien diabeteslääkityksen in vitro-ja In vivo-vaikutuksia haimasoluviljelmässä ja streptotsotosiinin aiheuttamaa diabetesta sairastavilla eläimillä. -Glukaani-ja oligosakaridihoidon jälkeen eläimillä todettiin glykemian, triglyseridi-ja kolesteroliarvojen sekä ateroskleroottisen aktiivisuuden vähenemistä . Tutkimuksessamme, hoito suoritettiin käyttäen brutto ote A. Blazei, eristämättä mitään sen yhdisteitä, ja tämä on luultavasti selitys puute antiglykolisen toiminnan.

A. Blazei-uute osoitti antioksidanttivaikutusta in vitro ja In vivo, mutta hoito vähensi merkittävästi eläinten painoa. Tämä seikka voidaan selittää, koska suuret annokset A. blazei uutetta käytetään tässä kokeessa, eri annoksilla käytetään muissa tutkimuksissa, jotka eivät osoita painonpudotukseen . Kuitenkin tutkimuksessa, jossa arvioitiin 90 vuorokauden subkrooninen toksisuus vesiuutteella rotilla, ei havaittu yhdenmukaisia hoitoon liittyviä muutoksia kliinisissä merkeissä, ruumiinpainossa eikä ruoan kulutuksessa urosrotilla annoksella 2654 mg kg-1, joka on suurempi annos kuin tutkimuksessamme käytetty annos . Lisää tutkimuksia oli tarpeen arvioida myrkyllisiä vaikutuksia A. Blazei näissä annoksissa, analysoimalla erityisiä muuttujia.

GPX suureni merkittävästi diabetesryhmässä ja pieneni merkittävästi A. Blazei-hoidon jälkeen. Tämä GPX: n lisääntyminen voi selittää pelkistyneen glutationin vähenemisen, koska se on sen toimintaa säätelevä tärkein substraatti. Gumieniczek ym. on osoitettu, että kokeellisessa DM: ssä esiintyy keuhkojen oksidatiivista stressiä, koska antioksidanttientsyymien aktiivisuus vähenee ja lipoperoksidaatio lisääntyy. Nämä muutokset ovat merkittävämpiä induktiota seuraavien viikkojen aikana. DM: n aikana Cu: n,Zn-SOD: n aktiivisuus vähenee ja katalaasiaktiivisuus lisääntyy . Tutkimuksessamme SOD – tai katalaasiaktiivisuus ei muuttunut yhdessäkään eri ryhmässä. Mahdollinen selitys gumieniczekin löydöksistä poikkeaville löydöksille on se, että tutkimuksessamme antioksidanttientsyymien analyysi tehtiin aiemmin.

kokeellisessa mallissamme keuhkojärjestelmässä havaittiin lukuisia histologisia muutoksia. Nämä muutokset ovat yhtäpitäviä kirjallisuudessa ilmoitettujen muutosten kanssa, erityisesti picrosirius-värjäystekniikalla havaitun konjunktiivisen kudoksen lisääntymisen ja tyvilaminan paksuuntumisen osalta. Hoidon jälkeen A. Blazei tällaiset muutokset tulivat vähemmän ilmeisiksi. Glykosilaation tuloksena syntyvä intra-ja intermolekulaarisen sitoutumisen muodostuminen kollageeniin johtaa kudosproteiinien rakenteellisiin muutoksiin, kuten jäykkyyden lisääntymiseen, proteolyyttisen digestion ja solunulkoisen matriisin (mukaan lukien fibronektiini, prokollageeni α2, tyyppi III, IV ja VI kollageeni ja laminina) lisääntymiseen . Tutkimuksessamme tärkein tekijä palautumisen tämän prosessin jälkeen hoidon A. Blazei voidaan selittää vähentää vaurioita johtuvat oksidatiivisen stressin osoittama vähentäminen keuhkojen lipoperoksidaation.

pitkäaikainen hyperglykemia liittyy iNOS-ilmentymän muutoksiin useissa kudoksissa . Tutkimuksemme immunohistokemiallisessa analyysissä inos kasvoi merkittävästi diabeettisten rottien keuhkokudoksessa ja väheni merkittävästi, kun eläimiä hoidettiin A. Blazeilla. Tutkimukset ovat osoittaneet, että endoteelisen typpioksidisyntaasin (Enos) mRNA-ilmentymä pelkistyy, kun taas inos voi lisääntyä syklisen guanosiinimonofosfaatin (c-GMP) muodostumisen yhteydessä .

äskettäin julkaistussa tutkimuksessa arvioitiin lipoperoksidaatiota, superoksididismutaasin aktiivisuutta sekä inos-Ja Enos-isoentsyymien jakautumista diabeetikkorottien keuhkokudoksessa. Diabeettisten rottien keuhkokudoksessa havaittiin oksidatiivisen stressin lisääntymistä, joka korjaantui antioksidanttista α-lipoiinihappoa saaneessa ryhmässä . Nämä löydökset ovat yhtäpitäviä tässä työssä raportoitujen löydösten kanssa, kuten havaittu lisääntynyt oksidatiivinen stressi, histologiset keuhkomuutokset ja antioksidanttihoidon vaikutus tässä DM-mallissa.

Tämä tutkimus osoittaa A. Blazei aqueous Extractin hyödyllisen vaikutuksen oksidatiivisten stressimuuttujien ja keuhkojen morfopatologian suhteen streptotsotosiinin aiheuttamassa diabeteksessa. Nämä löydökset voivat merkittävästi auttaa ymmärtämään paremmin DM: n keuhkofysiopatologiaa. Tutkimuksemme on myös merkitystä ja osalta terapeuttista potentiaalia A. Blazei.

tunnustus

tätä työtä ovat tukeneet Brasilian virastot ”Fundo de Incentvo à Pesquisa e Eventos (FIPE) do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)” ja ”Laboratório de Hepatologia e Fisiologia Experimental da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (HCPA / UFRGS)”.