Articles

⑫ – värjäykselle

by admin

Nissl-värjäykselle

ytimet ja nissl-elimet (karkea endoplasmainen retikulaatti) värjätään sinipunaisiksi kresyylivioletilla.

Nissl-värjäystä käytetään Klüver-Barrera (KB) – värjäykseen.

  • värjäysmenettely
  • tärkeitä erotteluun liittyviä näkökohtia

Värjäysmenettely

2

95% etanolia + muutama tippa 10-prosenttista etikkahappoliuosta

12

1 Depaffinisaatio ksyleeni 3 muutosta, 10 minuuttia kutakin
ksyleenin poisto 100% etanolia 3 muutosta, 5 minuuttia kutakin
3 nesteytys 95%, 70% etanolia 5 minuuttia kutakin
4 pesu juokseva vesijohtovesi 2 minuuttia
5 huuhtelu tislattu vesi
6 värjäytyminen 0, 1% kresyyliviolettiliuos 10 minuuttia, 37℃
7 erottelu noin 5-10 minuuttia. On huolehdittava siitä, ettei eriyty liikaa, koska värinpoisto tapahtuu seuraavassa vaiheessa.
8 erilaistuminen 95%, 100% etanoli noin 1 minuutti kukin. Erottele, kunnes vain ytimet ja nisslin vartalot ovat sinipunaisia.
9 mikroskooppinen tarkistus vaihe ⑦ & ⑧ voidaan toistaa, jos tarvitaan lisää eriyttämistä.
10 dehydraatio 100% ehtanoli 2 muutosta, 5 minuuttia kutakin
11 tyhjentyminen ksyleeni 3 muutosta, 10 minuuttia kutakin
coverslipping

0.1% kresyylivioletin vesiliuos (suodatin ennen käyttöä)

kresyylivioletti

1g

Tislattu vesi

1000 ml

kresyylivioletin pH

värjäysmenetelmä vaihtelee värjäysliuoksen pH: n mukaan. PH: n ollessa lähellä 3,0, vain Nisslin kappaleet, nukleoli ja ydinkalvot värjäytyvät vaaleansinisiksi. Gliasolujen tumat ovat vain hyvin lievästi värjäytyneet. PH: n noustessa väri muuttuu kaiken kaikkiaan tummemmaksi, ja hermosolujen, hermosyiden ja gliasolujen sytoplasma värjäytyy. Yhteisvärjäys voimistuu lähelle pH: ta 4,0. Siksi tarvitaan pidempi eriyttämisaika.


    pH3.0


  • pH4.7

Kresyylivioletin tyyppejä

neuropatologian laboratoriossa käytetään nykyisin kolmea kresyylivioletin tyyppiä.

valmistaja

/td>

Tuotteen nimi saatavuus
Kresyylivioletti asetaatti em tiede loppunut varastosta
Kresyylivioletti asetaatti SIGMA kaupallisesti saatavilla
kresyylivioletti (asetaatti) Merck kaupallisesti saatavilla

erilaistumisaika vaihtelee riippuen kresyyliviolettituotteesta

värjäysliuoksen pH vaihtelee tuotteesta riippuen. Siksi myös värjäysmenetelmät eroavat toisistaan. On tärkeää tiedostaa, että eriyttämiseen tarvittava aika vaihtelee tuotteiden välillä. Riippumatta siitä, käytetäänkö tuotetta, sama värjätty kromaattinen kuva voidaan kuitenkin lopulta saada aikaan erottelemalla ja tarkkailemalla näytettä mikroskoopilla.

td>10min noin

Tuotteen nimi valmistaja 0, 1-prosenttisen kresyyliviolettiliuoksen pH Differentiaatioaika 95-prosenttisessa etanolissa
Kresyyliviolettiasetaatti EM tiede 3.5 10-30 sekuntia
Kresyylivioletti asetaatti SIGMA 4, 7 10min noin
Kresyylivioletti (asetaatti) MERCK 4, 8

※ pH voidaan säätää 3,5: stä noin 3,8: aan lisäämällä Sigma-ja Merck-värjäysliuoksiin sopiva määrä 10-prosenttista etikkahappoa, mikä lyhentää erilaistumiseen tarvittavaa aikaa 95-prosenttisella etanolilla. Tämän ratkaisun uudelleenkäyttöä ei kuitenkaan suositella.

tärkeitä huomioita erilaistumisesta

suorita erilaistuminen, kunnes tausta muuttuu valkoiseksi. Hermosolun tumien nukleoli-ja ydinkalvot ovat kirkkaita ja kromatiini heikosti värjäytynyt, mikä on ihanteellista.

Kresyylivioletti-asetaatti (Sigma C5042) pH4.7 käytettiin molemmissa jaksoissa.

vasen kuva: 95-prosenttinen etanolierotus vain 10 sekunnin ajan. Riittämättömällä erilaistumisella koko hermosolu värjäytyy siniseksi, jolloin tuman ja Nissl-elinten tunnistaminen on mahdotonta.

oikea kuva: 95% etanolierotus 10 minuuttia. Riittävä erilaistuminen mahdollistaa hermosolujen tumien ja Nissl-kappaleiden selkeän erilaistumisen.