Laboratorní Diagnostika

Diferenciální diagnóza mezi další amebae

Patogenní Entamoeba druhů je třeba odlišit od jiných střevních prvoků jako nepatogenní amebae (Entamoeba coli E. hartmanni, E. gingivalis, Endolimax nana, Iodamoeba buetschlii) a mrskat Dientamoeba fragilis. Morfologická diferenciace mezi nimi je možná, ale potenciálně komplikované, na základě morfologických charakteristik cyst a trofozoitů.

v kultuře, diferenciální růstové charakteristiky e. moshkovskii může pomoci v odlišení od jiných druhů, ale kultivační metody mají významné omezení (chybějící smíšené infekce, znečištění, práce-intenzivní, omezená dostupnost). Historicky, diferenciace e. dispar A E. histolytica byla založena na izoenzymatické nebo imunologické analýze, ale ty již nejsou upřednostňovány dostupností účinných molekulárních metod a jsou zřídka prováděny. Molekulární metody se v současné době doporučují pro rozlišení patogenních druhů Entamoeba.

mikroskopická detekce

mikroskopická identifikace cyst a trofozoitů ve stolici je běžnou metodou diagnostiky patogenních druhů Entamoeba. Toho lze dosáhnout pomocí:

• čerstvá stolice: mokré úchyty a trvale obarvené přípravky (např.
• Koncentráty z čerstvé stolice: mokré koně, s nebo bez jódu skvrny, a trvale obarví přípravky (např. trichrome). Zatímco užitečné pro cysty, koncentrační metody nemusí být užitečné pro demonstraci trophozoitů.
• mikroskopie má také nízkou citlivost, pokud je analyzován pouze jeden vzorek stolice, a vyžaduje personál vyškolený v morfologické diagnostice. Sběr a analýza tří po sobě jdoucích vzorků stolice do deseti dnů zvyšuje šance na detekci. Také e. dispar, e. histolytica A E. moshkovskii nejsou rozlišitelné na základě morfologie.

trophozoity lze také identifikovat ve vzorcích aspirátů nebo biopsie získaných během kolonoskopie nebo chirurgického zákroku.

imunodiagnostika

soupravy enzymové imunoanalýzy (EIA) pro detekci protilátek Entamoeba histolytica a soupravy EIA pro detekci antigenu jsou komerčně dostupné ve Spojených státech. Detekce protilátek je nejužitečnější u pacientů s extraintestinálním onemocněním (tj. Detekce protilátky má omezenou diagnostickou hodnotu na pacienty z vysoce endemických oblastech, které budou pravděpodobně mít předchozí expozice a sérokonverzi, ale může být z více použití na pacienty z oblastí, kde patogenní Entamoeba spp. jsou vzácné. Detekce antigenu během aktivních infekcí může být užitečná jako doplněk k mikroskopické diagnostice při detekci parazitů a může rozlišovat mezi patogenními a nepatogenními infekcemi.

detekce Protilátky

nepřímá hemaglutinace (IHA) zkouška byla nahrazena komerčně dostupné EIA test kit pro rutinní serodiagnosis amebiasis. Antigen se skládá ze surového rozpustného extraktu axenicky kultivovaných organismů. Test EIA detekuje protilátky specifické pro e. histolytica v přibližně 95% pacientů s extraintestinálních amebiasis, 70% pacientů s aktivní střevní infekce, a 10% asymptomatických osob, které jsou kolem cyst E. histolytica. Pokud protilátky nejsou detekovatelné u pacientů s akutní prezentaci podezření amebic jaterní absces, druhý exemplář by měl být vypracován 7-10 dní později. Pokud druhý vzorek nevykazuje sérokonverzi, je třeba zvážit další látky. Detekovatelný E. histolytica-specifických protilátek může přetrvávat roky po úspěšné léčbě, takže přítomnost protilátek nemusí indikovat akutní nebo současnou infekci. Také pacienti, kteří žili ve vysoce endemických oblastech, budou pravděpodobně séropozitivní kvůli minulým expozicím. Specificita je 95% nebo vyšší: falešně pozitivní reakce se vyskytují zřídka.

přestože byla hlášena detekce IgM protilátek specifických pro e. histolytica, u pacientů se současným invazivním onemocněním je citlivost pouze asi 64%. Ve Spojených státech je k dispozici několik komerčních souprav EIA pro detekci protilátek. Neexistují žádné komerční sady pro detekci protilátek pro e. dispar nebo e. moshkovskii nebo e. Bangladéš.

Antigenu

Antigenu může být užitečné jako doplněk k mikroskopické diagnostiky v detekci parazitů a rozlišovat mezi patogenní a nepatogenní infekcí. Užitečnost je však omezena u zmrazených nebo fixovaných vzorků a u vzorků po ošetření. Nedávné studie naznačují zlepšenou citlivost a specificitu testů fekálního antigenu s použitím monoklonálních protilátek, které mohou rozlišovat mezi infekcemi e.histolytica a e. dispar. K dispozici je alespoň jedna komerční sada, která detekuje pouze patogenní infekci E.histolytica ve stolici; k dispozici je několik souprav, které detekují antigeny e. histolytica ve stolici, ale nevylučují infekce E. dispar.

Molekulární Diagnostika

Konvenční PCR

V referenční diagnostice laboratoře, molekulární analýzy pomocí konvenční PCR založené na testech je metodou volby pro diskriminaci mezi E. histolytica a E. dispar. Některé testy také mohou rozlišit e. moshkovskii.

Real-Time PCR

přístup TaqMan real-time PCR byl validován na CDC a používá se pro diferenciální laboratorní diagnostiku amebiázy. Stanovení cílů 18S rRNA gen, s druhově specifickými TaqMan sond v duplex formát, takže je možné odhalit i E. histolyrica a E. dispar ve stejné reakční nádoby.

Qvarnstrom Y, James C, Xayavong M, Holloway B, Moura I, Visvesvara GS, et al. Porovnání real-time PCR racionálů pro diferenciální laboratorní diagnostiku amebiázy. J Clin Microbiol 2005; 43: 5491-5497.

laboratorní bezpečnost

cysty v nefixovaných vzorcích stolice jsou potenciálně infekční. Dodržujte standardní opatření, která platí pro vzorky stolice: https://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticprocedures/stool/safety.html.