Articles

⑫ Barvení

by admin

Nissl barvení

Jádra a nissl těla (drsné endoplasmatické retikulum) jsou obarvené modře fialové s kresylová violeť.

barvení Nissl se používá pro barvení Klüver-Barrera (KB).

  • postup Barvení
  • Důležité faktory týkající se diferenciace

Barvení postup

1 Deparaffinization Xylen 3 změny, 10 minuntes každý
2 Odstranění xylenu 100% etanolu 3 změny, každých 5 minut
3 Hydrataci 95%, 70% ethanol 5 minut
4 Praní Tekoucí vodou 2 minut
5 Oplachování Destilovaná voda
6 Barvení 0.1% kresylová violeť řešení 10 minut, 37 ° c
7 Rozlišení 95% ethanolu + několik kapek 10% roztoku kyseliny octové Přibližně 5 až 10 minut. Je třeba dbát na to, aby nedošlo k nadměrnému rozlišení, protože odbarvení bude pokračovat v následujícím kroku.
8 diferenciace 95%, 100% ethanol přibližně 1 minutu každý. Rozlišujte, dokud nejsou pouze jádra a těla nissl modrofialová.
9 mikroskopická kontrola krok ⑦ & ⑧ se může opakovat, pokud je zapotřebí větší diferenciace.
10 Dehydratace 100% ehtanol 2 změny, každých 5 minut
11 Clearing Xylen 3 změny, 10 minuntes každý
12 Coverslipping

0.1% kresylová violeť vodný roztok (Filtr před použitím)

kresylová violeť

1g

destilované vody

1000ml

pH kresylová violeť

barvení metoda se liší v závislosti na pH barvicí roztok. Při pH blízkém 3,0 jsou bledě modré obarveny pouze těla Nissl, nukleoly a jaderné membrány. Jádra gliových buněk jsou jen velmi mírně obarvena. Jak se pH zvyšuje, barva se celkově ztmavne a cytoplazma nervových buněk, nervových vláken a gliových buněk je zbarvena společně. Společné barvení zesiluje téměř pH 4,0. Proto je nutná delší doba diferenciace.


  • pH3.0

  • pH4.7

Typy kresylová violeť

Tři typy kresylová violeť se v současné době používají v Laboratoř Neuropatologie.

název produktu výrobce dostupnost
kresylová Violeť-Acetát EM VĚDY skladem
kresylová Violeť-acetát SIGMA komerčně Dostupné
kresylová violeť (Acetát) MERCK komerčně Dostupné

Diferenciace čas se liší v závislosti na kresylová violeť produktu

pH barvicí roztok se liší v závislosti na produktu. Proto se metody barvení také liší. Je důležité si uvědomit, že čas potřebný k diferenciaci se mezi produkty liší. Nicméně, podle toho, co se výrobek používá, stejné barevné chromatické obraz může nakonec být získány prostřednictvím diferenciace a pozorování vzorku pod mikroskopem.

název produktu výrobce pH o 0,1% kresylová violeť řešení Diferenciace čas v 95% ethanol
kresylová Violeť-Acetát EM VĚDY 3.5 10 až 30 sekund
kresylová Violeť-acetát SIGMA 4.7 10min přibližně
kresylová violeť (Acetát) MERCK 4.8 10min přibližně

※ pH může být upravena tak, od 3,5 do cca 3,8 přidáním vhodného množství 10% kyseliny octové na Sigma a Merck barvení řešení, které zkrátí čas potřebný pro diferenciaci s 95% ethanolu. Nedoporučuje se však toto řešení znovu použít.

důležité úvahy týkající se diferenciace

provádějí diferenciaci, dokud pozadí nezmizí. Ideální je mít jádra a jaderné membrány jader nervových buněk čiré a chromatin slabě obarvený.

kresylová Violeť-acetát (Sigma C5042) pH4.7 byla použita v obou oddílech.

levá fotografie: 95% diferenciace ethanolu po dobu pouhých 10 sekund. Při nedostatečné diferenciaci je celá nervová buňka zbarvena modře,což znemožňuje identifikaci těl jádra a Nissl.

pravá fotografie: 95% diferenciace ethanolu po dobu 10 minut. Dostatečná diferenciace umožňuje jasně rozlišit jádra a Nissl těla neuronů.